Основна
Нормальна фізіологія / 3а ред. В. I. Філімонова.— К. : 3доров'я, 1994.— С. 244—253.
Посібник з фізіології. За редакцією проф. В.Г.Шевчука. Вінниця: Нова книга, 2005. С.205-215
Додаткова
Фізіологія людини. /Вільям Ф. Ганонг.Переклад з англ.-Львів: БаК, 2002.-С.495-496, 669-677.
Протокол практичного заняття №2. ”____”_______2013 Робота 1. Підрахунок еритроцитів.
Еритроцити
підраховують за допомогою лічильної
камери
Горяєва під мікроскопом.
Сітка лічильної
камери складається з 225 великих квадратів,
з яких 25 розділені на 16 маленьких (мал.
8) Сторона одного маленького квадрата
дорівнюе 1/20 мм площа
– 1/400 мм2,
висота камери (відстань від дна до
покривного скла) – 1/10 мм. Таким чином,
об'єм камери над
маленьким квадратиком становить 1/4000
мм3
(1/400x1/10).
Кров для підрахунку еритроцитів розводять у спеціальних змішувачах – капілярних піпетках з ампульним розширенням. На змішувачах для еритроцитів є помітки 0,5 та 101. Помітка 0,5 означає, яку частину об'єму всього змішувача займає даний стовбчик капіляра, заповнений кров'ю. Цей об'ем вміщує 1/200 частину повного об'єму змішувача. Таким чином, кров розбавляється в 200 разів. Розбавляти кров у 200 разів можна й іншими методами. Наприклад: у пробірку налити 4 мл 5 % розчину натрію цитрату й за допомогою мікропіпетки додати туди 20 мкл крові. 0бов'язково треба двічі сполоснути мікропіпетку в названому розчині, щоб вся кров потрапила в пробірку.
Мета роботи: Підрахувати еритроцити за допомогою цього методу. Дати оцінку кількості еритроцитів, що містяться в периферичній крові досліджуваного.
Для роботи потрібні: мікроскоп, освітлювач, камера Горяєва, покривне скло, змішувач для червоної крові (мал. 9), пробірка, 3 % розчин натрію хлориду, голка, 96 % спирт, 2 % розчин йоду спиртовий, вата, гумова груша, 5 % розчин натрію цитрату, мікропіпетка місткістю 20 мкл.
Хід роботи. Покласти скло камери Горяєва під об'єктив мікроскопа й роздивитись сітку камери під великим та малим збільшенням. Накрити камеру покривним склом. Гумову грушу надіти на верхній отвір змішувача (меланжера). Налити 1-1,5 мл 3% розчину натрію хлориду у робочу пробірку. занурити кінчик змішувача у емкість з досліджуваною кров’ю й набрати крові до мітки 0,5. Якщо набрано більше крові, то за доломогою сухого ватного тампона доторкуючись до носика, зняти лишок крові. Занурити кінчик змішувача в 3% розчин натрію хлориду, що налитий у робочу пробірку, і за допомогою гумової груші набрати його в меланжер до помітки 101. Таким чином кров буде розведена у 200 разів.
Обережно
струшуючи змішувач, перемішати розчин
крові в його
ампулі. В ній є для цього маленька червона
намистина. Перші
2 краплі розчину, що йдуть з капіляра
меланжера, видути на вату,
а наступні краплі з ампульного розчину
помістити в камеру. Для
цього кінчик меланжера поставити на
край камери біля покривного
скла й легенько натиснути на грушу.
Розчин зайде під покривне
скло в камеру й заповнить її. Почекати
1-2 хв, щоб еритроцити
осіли на дно камери. При малому збільшенні
мікроскопа
знайти сітку камери. Перевести мікроскоп
на велике збільшення
й почати підрахунок еритроцитів у 5
великих квадратах, що
розділені на маленькі. Найкраще лічити
еритроцити у великих
квадратах, що містяться по діагоналі
поля зору.
Під час підрахунку еритроцитів треба
пам'ятати
правило Бюркера: у маленьких квадратах
рахувати
ті клітини, що містяться посеред квадрата
сітки,
та також на його верхньому та лівому
боках.
Це потрібно для того, щоб двічі не
рахувати еритроцити, що містяться на
боках суміжних квадратиків.
Кількість еритроцитів у 1 мкл крові розраховують за формулою:
Х=а•4000•200/80
де X – кількість еритроцитів у 1 мкл; а – кількість еритроцитів у 80 малих квадратах; 80 – кількість підрахованих малих квадратів, (5•16=80); 200 — ступінь розрідження крові; 4000 — множник, що приводить результат до об'єму 1 мкл крові, оскільки об'єм малого квадратика становить 1/4000 мкл.
Практично кількість еритроцитів визначають у 80 малих квадратах, одержаний показник множать на 10 000. Для визначення кількості еритроцитів в 1 л – отриману цифру множать на 106.
Результати роботи:
Кількість еритроцитів у 80 малих квадратах______
Кількість еритроцитів у 1 л крові___________
Висновки: (визначити, чи нормальна кількість еритроцитів у досліджуваній крові?)