- •Белорусский государственный университет
- •Введение
- •1. Отбор проб для получения накопительных культур и первичный анализ выделенных микроорганизмов
- •2. Выделение чистой культуры
- •3. Изучение биологических свойств бактерий
- •4. Изучение физиолого-биохимических свойств
- •Среда Кинга а для образования пиоцианина: бактопептон – 2 %, глицерин – 1 %, k2so4 (безв.) – 1 %, MgCl2 –0,14 %, агар – 1,5 %, вода дистиллированная, рН 7,2.
- •5. Выделение отдельных групп бактерий
- •РН индикаторы для культуральных сред
- •Приготовление буферных растворов
- •Основная
- •Дополнительная
- •Приготовление буферов, часто используемых в бактериологических целях
- •Содержание
РН индикаторы для культуральных сред
Название |
Диапазон рН и окраска |
Используемая концентрация в среде |
Кол-во 0,01 н. NaOH для растворения 0,1 г |
Тимоловый голубой |
8,0 (Ж) – 9,6 (С) |
0,04 % |
10,0 |
Феноловый красный |
6,9 (Ж)-8,4(К) |
0,010-0,030 г/л |
28,2 |
Бромтимоловый синий |
6,0(Ж)-7,6(С) |
0,010-0,032 г/л |
16,0 |
Бромкрезоловый пурпурный |
5,4(Ж)-7,0(С) |
0,010-0,032 г/л |
18,5 |
Метиловый красный |
4,4 (Ж) – 6,0 (К) |
0,04 % |
10 |
Бромкрезоловый зеленый |
3,8(Ж)-5,4(С) |
0,020 г/л |
14,3 |
Бромфеноловый синий |
3,0 (Ж) – 4,6 (С) |
0,04 % |
10 |
П р и м е ч а н и е: Ж – желтая, С – синяя, П – пурпурная, К – красная.
Приготовление буферных растворов
При выборе соответствующих буферных сред для культивирования бактерий исходят из: 1) подходящего значения рН буфера, 2) возможного ингибирующего или токсического действия буфера, 3) возможной утилизацией компонентов буфера бактериальной культурой, 4) возможного связывания буфером катионов двух- и трехвалентных металлов. Для бактериальных ростовых сред наиболее широко используются фосфатный, трис-солянокислый, цитратный и ацетатный буферы. Эти буферные смеси охватывают практически весь интервал значений рН, в котором могут расти бактерии.
Схема приготовления данных буферных растворов приведена в таблице 2.
ЛИТЕРАТУРА
Основная
Методы общей бактериологии: В 3 т. / Под ред. Герхардта Ф. и др. М.: Мир, 1984.
Определитель бактерий Берджи: В 2 т. / Под ред. Хоулта Дж. И др. М.: Мир, 1997.
Дополнительная
Руководство к практическим занятиям по микробиологии: Практ. Пособие / Под ред. Егорова Н.С. – Изд-во Московского ун-та, 1983. – 215 с.
Скворцова И.Н. Методы идентификации и выделения почвенных бактерий Рseudomonas. М.: Изд-во МГУ, 1981. – 78 с.
Стейниер Р., Эдельберг Э., Ингрэм Дж. Мир микробов: В 3 т. М.: Мир, 1979.
Мейнелл Дж., Мейнелл Э. Экспериментальная микробиология. М.: Мир, 1967. – 347 с.
Таблица 2
Приготовление буферов, часто используемых в бактериологических целях
рН |
Величина х, используемая в прописях буферов | |||
ацетатного1 |
цитрат-фосфатного2 |
Фосфатного3 |
трис-HCl4 | |
4,0 4,2 4,4 4,6 4,8 5,0 5,2 5,4 5,6 5,8 6,0 6,2 6,4 6,6 6,8 7,0 7,2 7,4 7,6 7,8 8,0 8,2 8,4 8,6 8,8 9,0 |
41,0 36,8 30,5 25,5 20,0 14,8 10,5 8,8 4,8 - - - - - - - - - - - - - - - - |
30,7 29,4 27,8 26,7 25,2 24,3 23,3 22,2 21,0 19,7 17,9 16,9 15,4 13,6 9,1 6,5 - - - - - - - - - -
|
- - - - - - - - - 46,0 43,85 40,75 36,75 31,25 25,5 19,5 14,0 9,5 6,5 4,25 2,65 - - - - - |
- - - - - - - - - - - - - - - - 44,2 41,4 38,4 32,5 26,8 21,9 16,5 12,2 8,1 5,1 |
Примечание: 1 – х мл 0,2 М уксусной кислоты + (50 – х) мл 0,2 М ацетата натрия, довести водой до 100 мл; 2 - х мл 0,1 М лимонной кислоты + (50 – х) мл 0,2 М Na2HPO4, довести водой до 100 мл; 3 - х мл0,2 М NaH2РO4 + (50 – х) мл 0,2 М Na2HPO4, довести водой до 100 мл; 4 – 50 мл 0,2 М триса + х мл 0,2 М HCl, довести водой до 100 мл.