- •Напечатать 5679 тема 1. Строение и функции белков
- •Проведение анализа
- •Тема 1. Строение и функции белков Лабораторная работа № 2
- •Тема 2. Ферменты
- •Проведение анализа
- •Тема 3. Биосинтез нуклеиновых кислот и белков (матричные биосинтезы)
- •Тема 4. Введение в обмен веществ.
- •Лабораторная работа № 5
- •Проведение анализа
- •Тема 5. Химия и обмен углеводов
- •Проведение анализа
- •Проведение анализа
- •Тема 6. Химия и обмен липидов
- •Проведение анализа
- •Проведение анализа
- •Проведение анализа
- •Тема 7. Белковый обмен
- •Проведение анализа
- •Проведение анализа
- •Коэффициент Де Ритиса
- •Проведение анализа
- •Проведение анализа
- •Тема 8. Обмен сложных белков
- •Проведение анализа
- •Проведение анализа
- •Тема 9. Биохимия крови и мочи
- •Проведение анализа
- •Проведение анализа
- •Проведение анализа
- •Тема 10. Гормональная регуляция метаболизма
- •Проведение анализа
- •Учет результатов
- •Тема 11. Биохимия слюны
- •Проведение анализа
- •Тема 12. Биохимия костной ткани
- •Проведение анализа
- •Проведение анализа
- •Проведение анализа
Проведение анализа
Добавить в кювету |
Опытная проба |
Холостая проба |
Стандартная проба |
1. Сыворотка |
10 мкл |
-- |
-- |
2. Стандарт |
-- |
-- |
10 мкл |
3. Дистиллиро-ванная вода |
-- |
10 мкл |
-- |
4. Реагент |
1 мл |
1 мл |
1 мл |
Перемешать содержимое каждой пробирки. Инкубировать 10 мин при температуре 37С. Измерить оптическую плотность опытной и стандартной проб против холостой пробы при длине волны 550 нм (А). Окраска стабильна в течение 30 минут.
Расчет
Расчет по стандарту концентрации холестерола в сыворотке проводят по формуле:
Аоп С (ммоль/л) = ----------- Сст, Аст |
где Аоп / ст – оптическая плотность опытной пробы и стандартной,
соответственно;
Сст – концентрация стандарта (ммоль/л).
Если концентрация холестерола превышает 19,4 ммоль/л (точка вне зоны линейности калибровочного графика), анализируемый образец (сыворотка или моча) следует развести 1:1 физиологическим раствором и повторить измерение, а полученный результат расчета умножить на 2.
Клинико-диагностическое значение: Уровни холестерола важны в диагностике и классификации гиперлипопротеинемий.
Концентрация холестерина в сыворотке указывает на работу печени, билиарного тракта, всасывание в кишечнике.
Высокие концентрации холестерина говорят об угрозе ишемической болезни сердца, о нарушении тиреоидной функции и заболеваниях надпочечников.
Лабораторная работа № 10.
Определение концентрации холестерина ЛПВП в сыворотке крови
Принцип метода: Холестерол липопротеинов высокой плотности (ЛПВП) определяют после осаждения из сыворотки липопротеинов низкой и очень низкой плотности (ЛПНП и ЛПОНП, соответственно). Супернатант содержит холестерол, связанный с ЛПВП в растворенной форме и определяется ферментативным методом для определения концентрации общего холестерола.
Интенсивность окраски раствора при длине волны 550 нм прямо пропорциональна концентрации холестерола в ЛПВП.
Линейность метода: до 19,4 ммоль/л.
Норма:
Сыворотка крови – 0,9 ммоль/л (37С).
Оборудование и реагенты:
Спектрофотометр с термостатированной кюветой, длина волны 550 нм, длина оптического пути 1 см; температура реакции 37С;
Секундомер;
Автоматические пипетки на 10 мкл, 400 мкл , 2 мл и 1000 мкл;
Сыворотка крови;
Осаждающий реагент (хлорид магния, 100 ммоль/л в ортофосфорной кислоте, 30,3 ммоль/л)
Реагент (холестеролэстераза, холестеролоксидаза 50 Е/л, пероксидаза 1000 Е/л, 4-аминоантипирин 0,3 ммоль/л);
Стандарт (Холестерол 1,2 ммоль/л);
Дистиллированная вода.
Проведение анализа
В пластиковую пробирку внести 400 мкл сыворотки и добавить 2 мл осаждающего реагента. Тщательно перемешать в течение 15 секунд. После чего центрифугировать 3000 об/мин в течение 5 минут. Отобрать 1мл супернатанта в чистую пробирку и использовать для последующего определения холестерола в ЛПВП.
Добавить в кювету |
Опытная проба |
Холостая проба |
Стандартная проба |
1. Супернатант |
10 мкл |
-- |
-- |
2. Стандарт |
-- |
-- |
10 мкл |
3. Дистиллиро-ванная вода |
-- |
10 мкл |
-- |
4. Реагент |
1 мл |
1 мл |
1 мл |
Перемешать содержимое каждой пробирки. Инкубировать 10 мин при температуре 37С. Измерить оптическую плотность опытной и стандартной проб против холостой пробы при длине волны 550 нм (А). Окраска стабильна в течение 30 минут.
Расчет
Расчет по стандарту концентрации холестерола в сыворотке проводят по формуле:
Аоп С (ммоль/л) = ----------- Сст, Аст |
где Аоп / ст – оптическая плотность опытной пробы и стандартной,
соответственно;
Сст – концентрация стандарта (ммоль/л).
Общий холестерол сыворотки | ||
Норма |
Пограничные значения |
Высокий уровень |
5,2 ммоль/л |
5,2-6,1 ммоль/л |
6,2 ммоль/л |
Холестерол ЛПВП | ||
Норма |
Пограничные значения |
Низкий уровень |
0,9 ммоль/л |
0,9 ммоль/л; 0,9 ммоль/л |
0,9 ммоль/л |
Клинико-диагностическое значение: Содержание холестерола в ЛПВП в кови здоровых людей мало меняется с возрастом и не подвержено колебаниям.
Величины содержания холестерола в ЛПВП 0,9 ммоль/л свидетельствуют о нарушении липидного обмена и угрозе атеросклероза. Повышение содержания холестерола в ЛПВП, как и повышение содержания общего холестерина в результате увеличения этой фракции, является доброкачественным состоянием.