Домашнее задание к занятию № 10

1. Классификация извитых форм бактерий.

2. Морфология спирохет. Классификация. Методы обнаружения. Лабораторная диагностика сифилиса: ранняя диагностика, серодиагностика (реакция Вассермана, иммуноферментный анализ, реакция иммобилизации трепонем, реакция иммунофлюоресценции).

3. Возбудители возвратных тифов, их свойства. Дифференциальная диагностика вшивого и клещевого возвратных тифов. Болезнь Лайма.

4. Возбудители лептоспирозов. Диагностика. Профилактика и лечение.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ №11. ДАТА_____________

ТЕМА: КАМПИЛОБАКТЕРИОЗЫ, ХЕЛИКОБАКТЕРИОЗ, ОТЧЕТ ПО МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКЕ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ИНФЕКЦИЙ.

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:

1. Обсудить морфологические и биологические свойства возбудителей кампилобактериозов и хеликобактериоза.

2. Разобрать и освоить методы диагностики этих заболеваний

3. Разобрать бактериальные препараты, используемые для диагностики, профилактики и терапии данных заболеваний.

4. Выяснить и оценить уровень знаний студентов по микробиологической диагностике бактериальных инфекций.бактериоза.

ПОЯСНЕНИЯ К ЗАНЯТИЮ

Кампилобактериозы

1. Краткая характеристика инфекции. Основные клинические симптомы. История вопроса.

Кампилобактериоз - зооантропанозная бактериальная инфекция, вызываемая м/о рода Campylobacter, которая характеризуется острым началом, лихорадкой, интоксикацией, преимущественным поражением ЖКТ в виде энтеритов и энтероколитов, а также развитием некоторых не кишечных форм.

В структуре острых кишечных инфекций кампилобактериозы встречаются в 3-8%. Острые кишечные инфекции кампилобактерии вызывают в 20-30 % случаев в ассоциации с другими микроорганиз­мами (сальмонеллами и др).

2. Характеристика возбудителя:

2.1 Классификация

2 гр. по Берджи. Род Campylobacter (Campyla — изогнутые) относится к груп­пе аэробных или микроаэрофильных подвижных спирально изогну­тых грамотрицательных бактерий. Род открыли в 1963 г. Он представлен 13 видами, 3 из которых являют­ся патогенными для человека - C.jejuni, С.fetus, C.coli. Наибольшее значение в патологии человека имеет С. jejuni. Реже встречаются С. fetus и С. coli. Ранее отнесенный к данному роду С. pylori выделен в род Helicobacter.

2.2 Морфологические и тинкториальные свойства.

Тонкие вибриоидные клетки, имею­щие один или более витков спирали. Спо­ры не образуют. Подвижные, совершают характерное винтовое дви­жение с помощью одиночных жгутиков, расположенных на одном или обоих полюсах клетки. Грамотрицательные.

2.3 Культуральные свойства.

Хемоорганотрофы не требовательны к питатель­ному субстрату (обычно используют кровяные, мясные, печёночные среды с антибиотиком), микроаэрофилы, термофилы (37-44^оС). На жидких питательных средах образуют равномерное помутнение с выраженным осадком, на плотных средах рост через 2-4 дня образуют прозрачные, округлые колонии с ровными краями, 2-8мм в диаметре.

2.4 Биохимические свойства.

Не сбраживают углеводы. Для получения энергии используют аминокислоты, а не углеводы. Оксидазо - и каталазоположительные, уреазоотрицательные.

2.5 Токсигенные свойства.

Продуцирует энтеротоксины (функ­циональные блокаторы), нарушающие водно-солевой обмен через образование цАМФ, аналогично энтеротоксинам Е. coli и V. cholerae. При разрушении кампилобактеров освобождается эндотоксин. Опи­саны цитотоксины, вызывающие гибель чувствительных клеток толстого кишечника, вызывая дизентериеподобные изменения.

2.6 Антигенные свойства.

Кампилобактеры содержат О-, К- и Н-антигены. В на­стоящее время выделено свыше 55 О-серогрупп кампилобактеров.

2.7 Резистентность.

В пищевых продуктах, водопроводной и сточной воде, моче при комнатной и пониженной температурах сохраняются 1-5 недель. Чувствительны к нагреванию более 50^оС, действию прямого солнечного света и УФ, высыханию, высоким и низким значениям рН среды, также чувствительны к рабочим концентрациям дезрастворов.

2.8 Патогенность для животных.

Вызывают энтериты у с/х. животных, С. jejuni встречает­ся при абортах овец.

3.Патогенез и эпидемиология.

К факторам вирулентности относятся жгутики и муциназа, способствующие проникновению в слизистую оболочку тонкой кишки. Обладают умеренной пенетрационной активностью. Их токсичность связана с секрецией энтеротоксинов (функ­циональные блокаторы), нарушающими водно-солевой обмен через образование цАМФ, аналогично энтеротоксинам Е. coli и V. cholerae. При разрушении кампилобактеров освобождается эндотоксин. Опи­саны цитотоксины, вызывающие гибель чувствительных клеток. После колонизации участка тонкой кишки они могут проникнуть в кровя­ное русло, вызывая генерализованную инфекцию, чаще у иммунодефицитных лиц. В патогенезе кампилобактериозных энтеритов преоб­ладают явления диареи или дизентериеподобных состояний. При этом С. jejuni и С. fetus вызывают энтериты у людей. С.fetus чаще встречается у пожилых лю­дей с иммунодефицитами, а также при не кишечных формах кампилобактериоза, вызывая поражение паренхиматозных органов (печень, лёгкие), артрит, менингит и даже сепсис.

Эпидемиология. Зооантропаноз. Зарегистрированы пищевые, молочные и водные вспышки кампилобактериоза, чаще у детей. Кампилобактерии широко распространены и обитают в репро­дуктивных органах, в ЖКТ, ротовой полости человека и некоторых животных.

Передача инфекции происходит алиментарным путем. Возможен и контактно-бытовой путь. При путях передачи инфекции имеют значение: пищевой фактор активен в летнее время, а также при упот­реблении сырого молока, мяса и воды, бытовой фактор - действует в течение всего года, более опасно общение с больными животными, чем с больными людьми, представляют большую опас­ность и реконвалесценты, которые выделяют значительное количе­ство кампилобактерий.

У здоровых лиц кампилобактерии выделяются в 4,4%. Выражена летняя сезонность.

Наиболее высока вероятность заражения при употреблении продуктов птицефабрик и мясокомбинатов. На этих же предприяти­ях и высокая инфицированность персонала, которая происходит в первый год работы. Заболевание, как правило, протекает у этих лю­дей в стертой форме.

Естественная восприимчивость людей высокая.

4.Иммунитет.

При кампилобактериозе наблюдается гуморальный иммунный ответ. Однако образующиеся антитела не обладают выра­женными протективными свойствами.

5. Лабораторная диагностика.

Материал для исследования: фекалии, кровь.

1.Микроскопический метод мало эффективен, т.к. они могут присутствовать в норме в 15-20% у здорового человека.

2.Бактериологический метод

Посев производят на специальные селективные плотные питательные среды с бриллиантовым зелёным, 5% баранью или лошадиную кровь с антибиотиками, ЖЭКА (железо-эритрин-кровяной агар) в микроаэрофильной атмосфере на 48 часов при 42° С. Идентификация чистой культуры проводится по антигенным и биохимическим свойствам.

3.Серологический метод ретроспективно АТ появляются через 2 недели.

Непрямая РИФ, РСК, р. микроагглютинации, РПГА с парными сыворотками (комплексный Эр кампилобактериозный диагностикум), интервал 10-14 дней.

6. Профилактика и лечение.

Вакцинопрофилактика не разработа­на. Для лечения применяются тетрациклин, гентамицин, макролиды.

Хеликобактериоз

1.Краткая характеристика инфекции. Основные клинические симптомы. История вопроса.

Род Helicobacter ранее относился к роду Кампилобактер, однако в настоящее время выделен в самостоятельный род. Н. pylori - является возбудителем язвенной болезни желудка и 12-перстной кишки. Относится к груп­пе аэробных или микроаэрофильных подвижных спирально изогну­тых грамотрицательных бактерий. 2 гр. по Берджи.

2. Характеристика возбудителя:

2.1 Классификация см. п.1

2.2 Морфологические и тинкториальные свойства.

H.pylori представляют собой мелкие грамотрицательные палочки, лофотрихи или монотрихи.

2.3 Культуральные свойства.

Микроаэрофилы, растут на сложных питательных средах – агар Колумбия и селективные среды с добавлением ванкомицина, полимиксина или триметоприма для подавления сопутствующей микрофлоры. Инкубация посевов при Т-37^оС (33-41) и влажности 98%, состав воздушной среды (5% О₂, 5-10%СО₂, 85-90% N₂ – газогенераторные пакеты), в течении3-10 суток, первые колонии появляются на 3 день, диаметр до 0,5-2мм, в виде “капель росы”, при сплошном росте образуют прозрачную плёнку.

2.4 Биохимические свойства.

Глюкозу не ферментирует, не образует индол.

Продуцируют уреазу, каталазу и оксидазу, ко­торые используют для идентификации этих бактерий.

2.5 Токсигенные свойства

Токсичность связана с цитотоксином, действующим на эпителиальные клетки, токсином, нару­шающим межклеточные контакты, и с ЛПС.

2.6 Антигенные свойства

Изучены не полностью. Известно о наличии О- и Н- Аг, а также поверхностных белковых Аг (определяют типоспецифичность).

2.7 Резистентность

(см. кампилобактер)

2.8 Патогенность для животных

Является представителем нормаль­ной микрофлоры животных.

3. Патогенез и эпидемиология.

К факторам вирулентности хеликобактеров относят их способность к движению и участие в проникно­вении в слизистую оболочку. Фермент уреаза при разрушении моче­вины до аммиака и СО₂ приводит к образованию газовой оболочки, защищающей от кишечного сока. Хеликобактеры продуцируют фосфолипазы, разрушающие фосфолипиды. Их токсичность связана с цитотоксином, действующим на эпителиальные клетки, токсином, нару­шающим межклеточные контакты, и с ЛПС. Кроме того, на поверх­ности клеток образуются белки теплового шока, которые рассмат­ривают как реакцию на стресс. Это приводит к аутоиммунному воспалению и образованию язв в желудке и двенадцатиперстной кишке. Н. pylori выделяются в 80% случаев язвенных гастритов.

Пути передачи человеку окончательно не выяснены. По-видимому, люди заражаются алиментарным путем.

4. Иммунитет.

При хеликобактериозе наблюдается гуморальный иммунный ответ. Однако образующиеся антитела не обладают выра­женными протективными свойствами.

5. Лабораторная диагностика.

Исследуемый материал: биоптаты поражённого участка кишечника, обнаружение HP в кале, в слюне или транссудате десен.

1.Экспресс-диагностика:

ПЦР, иммуноблотинг;

2. Микроскопический метод - выявление HP в биоптате при окраске по Романовскому-Гимзе, по Граму (Г- изогнутые палочки).

3. Бактериологический метод. Дорого.

Выделение культуры HP – растут на сложных питательных средах – агар Колумбия и селективные среды с добавлением ванкомицина, полимиксина или триметоприма для подавления сопутствующей микрофлоры. Инкубация посевов при Т-37^оС (33-41) и влажности 98%, состав воздушной среды (5% О₂, 5-10%СО₂, 85-90% N₂ – газогенераторные пакеты), в течение 3-10 суток, первые колонии появляются на 3 день, диаметр до 0,5-2мм, в виде “капель росы”, при сплошном росте образуют прозрачную плёнку.

Идентификация по морфологии и биохимической активности, опре­деляют уреазную активность биоптата в жидкой или гелеобразной среде, содержащую субстрат, буфер и индикатор.

4. Серологический метод:

- реакция связывания комплемента (РСК)

- реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)

- метод иммуноферментного анализа (ИФА);

6. Профилактика и лечение.

Для лечения используют полусинте­тические пенициллины, аминогликозиды, фторхинолон.