Микробиология 1 / Экз.ответы / ИНФЕКЦИЯ(2-ой вопрос)

Полные,неполные Аt: В 1 мол-ле Аt д б 2 активных центра,т е Аt 2-х валентно.Такие Аt им наз полными.Иногда в мол-ле Аt остается недосформированной 1 валентность и тогда образ 1 валентное Аt(появл при резус,некот инф заб-ях)-неплные. Моноклональные Аt-потомство одной кл,облад высоким специф действием,м исп не только как БАВ,воздействуя прямо на кл и молекулы,обладающие соотв антигенами,м использовать как средство доставки до активн субстратов.Положение изменилось после того,как 2 ученых осуществили гибридизацию антителообразующих клеток от животного с культивируемыми в пробирке кл злокач опухоли.Они получили кл, обладающие св-ми обеих кл.Т о были получены теоретически»бессмертные»клоны гибридных кл(гибридомы),способные к образ неогранич кол-ва однородных продуктов одного клона клеток-моноклональных антител.

Местный антиинф им-т:Местный антиинф им-т обеспечивается секреторными Yg класса А. Мол-ла секр YgA им дополнительный секреторный компонент,кот предст собой белок гликопептид.Он защищает Yg от переваривания,действия ферментов.Секр YgА препятствует адгезии м/о на эпит кл слиз об рта,кишечника,респираторных и мочевыводящих путей.Вместе с тем Yg в агрегированной форме активирует С по альтернативному пути,что приводит к стимуляции местной фагоцитарной защиты.Секр Yg препятствуют адсорбции и репродукции V в эпит кл слиз об.Н:при аденоV инф,полиомиелите,кори.Около 40% общего Yg сод в крови.

Динамика образ-я Аt,первич и вторич имм ответ:Попадание в орг-м Аg,с кот чел-к ранее не встречался приводит к первичному имм ответу.Во время такого ответа примерно ч/з 7 дней после попад-я Аg в орг-м в крови появл небольш кол-во специф Аt YgM.повторное попад-е того же Аg в орг-м в более отдаленный срок приводит к вторичному или анамнистическому имм ответу(товет памяти).Появляются уже большие кол-ва специфич YgG.Такой вторичный ответ развивается прим ч/з 4 дня и м продолж неск недель.При выр-ке Аt происх пролиф-я и диф-ка(созревание)В кл,кот становятся лимфобластами и диф-ся в Вл памяти или в плазматич кл,сод в своей цитоплазме развитую эндоплазматич сеть.Аt,циркулирующие в кровотоке в основном выр-ся плазматич кл селезенки,к м,л/у.

Кл имм ответ. Тл реализуют кл имм ответ.Кл имм ответ:АПК(м/ф) производит предварит отбор Аg.Аg асорбируется на пов-ти АПК,затем подвергается эндоцитозу,в рез Аg фрагментируется и форм-ет комплекс Ag МНС.Этот комплекс экспрессируется на пов-ти АПК и стан доступным к контакту с рецептором Тл.Контакт осущ при прямом взаим-и кл либо передаче комплекса ч/з межкл среду.Возд-е на Тл Аg комплекса служит сигналом активации в/икл пр-в,продукции кл цитокинов.При инф заб-ях,при отторж трансплантатнов,защита от опухолей,всегда сопутств ГЗТ. 1 путь: заканчивается образованием кл им пам и пула цитотоксических лимфоцитов,кот несут на себе рец СД-8,кот взаим-ют с кл,несущими чужер инф и прикрепляется к ним.Изнутри отходят гранулы,сод белок перфорин-он выделяется и формир в мембр кл-мишеней поры,ч/з кот вых вода и ионы.Нарушается баланс,кл лизируются..2 путь-вместо цитотоксич лимфоцитов обр Т-лимф,они сод СД-4,распозн чуж Аг,когда микроб явл внутрикл парзитом-т.е.при бакт инф. Тл гзт выд ряд БАВ и лимфокины,приводящих к разв ГЗТ-возн гранулем-скоплен МФ и лимф,кот способствуют ограничению очага распр-я инф.Аллерг метод д-ки:Среди методов выявления имм ответа на Аg широко исп-ся кожные пробы,состоящие в оценке местной восп р-и на нанесение специально подобранной дозы Аg на кожу или введение его в/икожно.Аллергические р-и положительны в тех случаях,когда орг-м обладает повышенной чувствит-ю к введенному Аg.К таким р-ям относ р-и на туберкулине при туберкулезной инф,р-и на аллергены при аллергич заб-ях.М возникать р-и гиперч-ти немедл типа и замедленного типа.

31 Интерфероны как ф-ры пртивовир им-та:ИФ были открыты как противовир агенты.Сущ 3 разновидности:альфа,бета,относимые к первому классу,и гамма(2класс).Альфа продуцируется лейкоцитами.облад противовир,антипролиферативным и противоопухолевым действием.Бетта образ фибробластами,облад противооп,а также антивир действием.Гамма-продукт Т-хелперных,а также СД8 Тл-именуется лимфоцитарным и иммунным.Облад иммуномодулирующим и слабым противовирусным эффектом.Продукцию ИФ 1 класса индуцируют вирусы и препараты двунитчатой ДНК,продукцию гамма-Ag и митогенные преп-ты.Потивовир эффект обусловлен спос-ю активировать в кл синтез ингибиторов и ферм-в,блокирующих репликацию вирусной ДНК и РНК,что приводит к подавлению репродукции вируса.Для усиления противовир защиты исп ср-ва,повышающие продукцию собственного ИФ-интерфероногены.В качестве индукторов эндогенного ИФ применяют противовир вакцины,преп-ты РНК и ДНК. По получению: лейкоцитарный чкловеческий.Получ из лейк-в и лимф-в,форма выпуска сухой порошок,развод кипяченой водой и вводят интраназальною.Рекомбинантный ифн-гены из лимф,м/ф,лейк-в вырезают, присоединяют к дефектным фагам,их исп как вектор.М вып в форме свечей:роферон, реоферон.Данные препараты эффективнее.

32 Р-я аггли в диаг-ке инф:Р-я аггл-и-это склеивание корпускулярных Аg,под действием Аt в прис-и электролитов.Р-я аггл-и исп для:1)определения Аg стр-ры микроба.Для этого необходимы специфич Аt,кот содержатся в диагностических агглютинирующих сыворотках.2)м б использована для обнаружения Аt к опред Аg в сыворотке б-го,и для опред титра Аt(это с/л метод диаг-ки).Титр Аt сыв-ки-это max разведение сыв-ки,при кот идет р-я аггл-и.Однако по однократному опред-ю титра проверить клинич диагноз нельзя.Поэтому исп парные сыв-ки б-го,взятые с интервалом 7-10 дней.Если во 2 сыв-ке титр Аt возрастает в 4 раза и более,это говорит об инф природе Аt и подтверждает клин диагноз.Р-я протекает в 2 фазы.В 1 происх адсорбция Аt на пов-ти кл,несущей соотв Аg.,во 2-образ-е агглютината и выпадение его в осадок.Механизм описывается теорией “решетки”,согласно кот агглютинат образ-ся при прис-и одного активного центра двухвалентного Аt с детерминантной группой одного Аg,а второго активного центра-с детерм гр другого Аg.избыток или недостаток Аt препятствует проявлению аггл-и.Монорецепторные сыв-ки-это сыв,содержащие типоспецифические Аt.Комплексные-сод групповые Аt.Для обнаружения и определения титра Аt исп диагностич преп-ты,сод известные Аt,преп-ты наз диагностикумы.Нагрузочные р-и им-та:В этих р-ях исп специальные диагностикумы,в кот Аg адсорбирован на кл частицы.В качестве носителя Аg Мб эритроциты,частицы активированного угля,целлюлозы,латекса.Наиб часто исп РНГА,в кот применяется эр диагностикум.содержащий эр-ты с нагруженными на их пов-ти Аg.

33 Иммунологич память:Имм память-это спос-ть к быстрому и сильному ответу на повторное возд-е Аg.Т е имм с-ма облад способна не только распозн чужер Аг,но и ускоренно узнавать Аг при повторн контакте с ними. Спос-ть сохранять иммуноположительную память обеспечивает продолжительность и напряженность им-та против многих Аг. Ответственность за это нес кл имм пам-популяция долгоживущих лимф.Эти кл после повторного контакта с Аг быстро пролиферируют и трансформируются либо в плазм кл,либо в кл,осуществляющие кл имм ответ.Есть предпол,что л имм пам-это лимфоциты,застрявшие на опред стадии диф-ки,поэт при повт контакте с Аг очень быстро реагируют на него. Эффект имм пам составляет основу вакцинопроф-ки.

34 Р-я преципитации:Р-я преципитации-это осаждение мелкодисперстного Аг под действием Аt в присутствии электролита.Р-я ставится видимой при высокой концентрации Аt,поэт для постановки р-и разводят Аг и не разводят сыв-ку.титрои преципитирующей сыв-ки считается то наибольшее разведение Аг,при кот идет р-я преципитации.Р-я высокочувствит-на в отношении Аг.с пом р-и м обнаружить,идентиф-ть буквально следы Аг.сущ 2 способа постановки р-и:кольца преципитации(Аг наслаивают на сыв-ку,образ видимые кольца),р-я преципитации в агаре,геле(на чашке Петри-в центр лунку наносят сыв-ку с Аt,в остальные-разл Аг,образ дуги преципитации).Р-я исп для идентиф Аг,а не дляопределения титра Аг.Р-я получила распространение в судебно-мед практике для определения видовой принадлежности белка.также исп при диаг-ке некоторых инф-й для определения токсигенности к-ры.

35 Иммунофлюоресценция:Обнаружение бакт и вирусных Аг в инфиц-х материалах,тканях жив и к-рах кл при пом флюоресцирующих Аt(сыв-к) получило широкое применение в диаг-й практике.приготовление флюоресц сыв-к основано на спос-ти некоторых флюорохромов(Н:изотиоцианат флюорресцеин) вступать в хим связь с сывороточными белками,не нарушая их иммунологич-й специф-ти.При прямом ИФ методе Кунса специф-е флюоресцирующие Аt,связавшиеся с микробными Аг,образуют комплексы,кот светятся при люминисцентной микроскопии преп-в.Недостатком явл необходимость пригот-я широкого набора флюоресцирующих специфич сыв-к п/в каждого изучаемого Аг.Непрямой метод предусматривает исп-е одной универсальной флюоресцирующей сыв-ки-антиглобулиновой,содержащей Аt только п/в кроличьих глобулинов.В связи с тем,что диаг-е антисыв-ки содержат кроличьи глобулины,они реагируют с флюоресцирующей антиглобулиновой сыв-й в кач Аг и вместе с тем соединяются с гомологичным исследуемым Аг как Аt.При этом на образовавшемся комплексе(специф Аt + исслед-й Аг)фиксируются флюоресцирующие антиглобулиновые Аt,вызывая его свечение при люминисцентной микроскопии.

36 Иммуноферментный анализ: В основу метода положено маркирование ферментом Аг или Ат,вступающих в р-ю.Взаим-е метки с субстратом обычно сопровождается измен-ем окраски среды.К настоящему времени созданы многочисл-е модификации базовой методики и наибольшее распр-е получил гетерогенный ИФА на твердой фазе(твердофазный ИФА).Сыв-ку инкубируют с Аг,фиксированном на твердом субстрате(плястиковая микропланшетка).Ат,не связавшие Аг,удаляют многократным промыванием.Затем вносят меченую ферментом сыв-ку к Ат,связавшим Аг.В итоге опред кол-во ферм-та маркера,связавшегося с Ат.На практике метод широко применяют для выявления Аг хламидии трахоматис в мазках из уретры и влагалища,стрептококков группы А в мазках из зева и токсина клостридий в фекалиях.Чувствит-ть метода сост 70% для Аг стрептококков группы А и более 90% для токсина клостридий.

Р-я имм лизиса:специфич Ат взаим-ют с разл кл,в том числе бактериями и простейшими,что приводит к активации с-мы С по классическому пути и последующему лизису кл.среди них известны р-и вибриолиза(редко исп-ся) и р-и гемолиза.Р-я гемолиза:под влиянием р-и с Ат в присутствии С мутная взвесь эр-в превращается в ярко красную прозрачную жид-“лаковую кровь”вследствие выхода гемоглобина.При постановке диаг-й РСК р-я гемолиза исп как индикаторная:для тестирования присутствия или отсутствия(связывания)свободного С.

Р-я связывания комплемента:РСК предложена Ж Бордэ и О Жангу в 1901г.Исп для серодиаг-ки и обнаружения Аг в исследуемом материале,сероидентиф-и выделенных к-р.Она хар-ся выс чувствит-ю и достаточной специфичностью,также возможностью прим-я как корпускулярных,так растворимых Аг.Для постановки РСК берется С,в кач кот исп сыв-ку крови морской свинки с установкой рабочей дозы.Исследуемые сыв-ки крови и Аг обяз-но контролируются на антикомплиментарность.Постановку основного опыта производят в пробирке путем внесения в нее опред обьемов сыв-ки крови,Аг и рабочей дозы С.Смесь инкубируют в термостате при 37 в теч часа.Регистрацию рез-в р-и проводят по гемолизу сенсибилизированных эр-в барана.Их приготавливают при смешивании гемолитической сыв-ки кролика с эр-ми барана.При внесении С в эту смесь происх р-я гемолиза.Т о,в тех случаях,когда С не связывается с исследуемой с-мой Аг-Ат,т е остается свободным,наблюдается полный гемолиз бараньих эр-в,кот свидетельствует об отриц р-и.Отсутствие гемолиза указывает на связывание С с-мой Аг-Ат,т е на положительную р-ю.

Р-я нейтрализации токсина антитоксином: Имм сыв-ка(антитоксин)связывает токсин и блокирует его действие.Для опред антитоксич им-та у чел-ка часто применяют кожные пробы(Н:проба Шика для выявл им-та к дифтерии).Для идентиф-и токсина и определения титра антитоксич Ат их смесь вводят подопытным животным.При соответствии типа токсина и антисыв-ки гибели животных не наблюдают.

Р-я нейтрализации вирусов:При перенесении многих вирусных заб-й или вакцинации в сыв-ке крови людей обнаруживаются Ат,нейтрализующие инфекционные св-ва соответствующих вирусов.Их обнаруживают при смешивании испытуемой сыв-ки с последующим заражением чувствит жив либо кл к-ры.Ч/з неск суток регистрируют рез-ты опытов по гибели подопытного жив или цпд в пробирке с кл к-рой.Р-я нейтр вирусов нашла широкое применение в вирусологической практике для опред вида(типа) исследуемого вируса и титра вируснейтрализующих Ат.В этих случаях исп соотв диаг-е антисыв-ки.

Серологический метод диаг-ки инф заб-й:Принципы основных с/л р-й были заложены исследователями антимикробных факторов факторов сыв-ки крови-бактериолизинов,агглютининов,преципитинов и С.В настоящее время с/л методы остаются важным инструментом в диаг-ке и лечении инф болезней,поскольку они обнаруживают специфич Ат,большая их часть приемлима для идентиф-и Аг возб-ля,они остаются пожалуй единств методом диаг-ки при невозможности или трудностях выделения возб-ля,сровнительно редко дают ложные рез-ты.Все с/л р-и разделяют на простые и сложные.Простые-2компонента-Аг и Ат.Это р-я аггл-и,преципитации,РПГА и опсонно-фагоцитарные р-и, р-я нейтр-и и РТГА.Сложные-включают в себя неск-ко простых.Это РСК,р-и имм лизиса,р-и активации Аг из нейтральной смеси.

Индикация микробных Аг:Для экспресс-диаг-ки инф болезней применяют разнообразные методы,вывляющие бактериальные Аг-компоненты кл стенки,жгутиков,капсул,ДНК, а также токсинов.Из многих тестов наиб распростр и эффективны метод встречного электрофореза,р-я латекс-аггл и иммуно ферментный метод.Встречный иммуноэлектрофорез-разновидность р-и прецип-и в агаре,геле.Контакт обусловлен эффектом постоянного эл поля,что усиливает спос-ть к взаим-ю низкореактогенных Аг и Ат.Латекс-аггл-я.Принцип метода основан на взаим-и Аг,присутствующего в образце,с частицами латекса,нагруженными специфич моноклональными Ат,что ведет к образ-ю видимых агрегатов.ИФА-в основу метода положено маркирование ферментом Аг или Ат,вступающих в р-ю.Взаим-е метки с субстратом обычно сопровождается измен-ем окраски среды.К настоящему времени созданы многочисл-е модификации базовой методики и наибольшее распр-е получил гетерогенный ИФА на твердой фазе(твердофазный ИФА).Сыв-ку инкубируют с Аг,фиксированном на твердом субстрате(плястиковая микропланшетка).Ат,не связавшие Аг,удаляют многократным промыванием.Затем вносят меченую ферментом сыв-ку к Ат,связавшим Аг.В итоге опред кол-во ферм-та маркера,связавшегося с Ат.

43 Принципы иммунопроф-ки и иммунотерапии:Одним из важнейших направлений прикладн микробиол-и явл создание эффективн преп-в для иммунолпроф и имммунотерап инф заб-й. Среди таких1)вакц и анатокс-преп-ты для индукции в орг-ме специф имм ответа с форм-ем активного им-та за счет мобилизации мех-в имм памяти2)имм сыв и иммуноглоб-преп,сод готовые Ат,введение кот приводит к немедленному приобр-ю пассивного гум им-та,спос защ орг-м от интокс или инф.»вакцины»-Л.Пастером-всем прививочным преп.получ из микроорг и их прод. Дженнером-1 жив вакц,сод вир коровь оспы.. вакц первого пок-против беш,туберк,чумы,сиб язвы.кори,полиомиел. Жив вакц созд имм напряж,сходн с постинф. Убит вакц готов из микроорг,облад макс выраж иммуноген.инактив прогрев,УФ,или хим в-вами-против коклюша,лептоспироза,клещ энцефалита.второго пок-химич-менее реактогенны-холерная-сост из 2 комп:холероген-анатокс и ЛПС,извлеч из холерн вибр. Для повыш иммуногенности хим-доб адъюванты:гидрооксид алюм,алюмокал квасцы,фофат алюм. Те же доб к анатокс. Анатокс-утем обраб токс формалином-при 37 в теч 30дней. Токс утрач ядовитость,но сохр спос индуц синтез токс антител. Шир польз для выр активн антитокс имм при специф проф столбняка, дифитерии. Генноинж-гены, контролир нужн Аг переносят в геном др микроорги клонир в них, добиваясь экспрессии этих генов в нов усл.имм сыв-и получ из них Иг-биол преп.сод Ат. Предназн для созд пасс имм. Исп как ср-во серопроф и серотер. В 1-ввод до возм зараж или непоср после него.во 2случ-для леч-нейтрализ токсинов или вир.усиления антимикр защиты. Все сыв преп дел на 2 гр:гетерологичн,получ из кр животн. И гомолог из кр чел.1-явл дляорг чел чужерод Аг.их примен сопровожд разв Ат.кот м вызв в орг тяж аллерг р-ции. Их высок иммуногенность огранич их примен итреб особ вним:не исп ли раньше,нет ли повыш чувств к др Аг?необх предвар контроль чувствит-ти-в/к проба . преп из кр чел-не иммуногены-их преимущ-из донорской или плацентарн кр,предвар смеш сыв.получ из кр разн лиц-конц в них Атневелика. Среди перспектив на будущее-моноклональне Ат