Методы микробиологической диагностики боррелиозов

Бактериоскопический: берут кровь из пальца и готовят препарат толстой капли и мазок. Препарат толстой капли окрашивают по Романовскому-Гимзе: боррелии имеют вид тонких нитей сине-фиолетового цвета с несколькими большими неравномерными завитками. В мазках длина боррелии превосходит поперечник эритроцита в 2 и более раз. При темнопольной микроскопии боррелии совершают беспорядочные движения.

Биологический: используют для дифференциации возбудителей клещевого и возвратного тифа. Для этого 0,5-1 мл цитратной крови от больного вводят подкожно морским свинкам. В случае клещевого тифа через 5-6 дней в крови животного появляется большое количество боррелий, возбудитель возвратного тифа является непатогенным для морских свинок.

Серологический: реакция нагрузки боррелий тромбоцитами. Сыворотку крови больного смешивают с цитратной плазмой крови гвинейских свинок в одинаковых объемах. К этой смеси добавляют культуру боррелий, тщательно перемешивают, инкубируют 15 мин в термостате, а затем готовят препарат "раздавленной капли" и исследуют в темнопольном микроскопе. В присутствии специфических антител тромбоциты гвинейской свинки облепляют тела боррелий и последние перестают двигаться.

Ультрамикроскопическое строение спирохет в виде схемы. Указать название структур этих микроорганизмов. (рисунок увеличьте)

Спирохеты состоят из наружной клеточной стенки, которая окружает цитоплазматический цилиндр. Поверх наружной стенки располагается прозрачный чехол гликозамингликановой природы. Под наружной стенкой располагаются фибриллы, закручивающийся вокруг цитоплазматического цилиндра, придавая бактериям винтообразную форму. Число фибрилл варьирует: у трепонем – 3-4, боррелии – 7-20, лептоспиры – 2.

Ультраозвученный трепонемный антиген

предназначен для серодиагностики сифилиса в реакции Вассермана (РСК). Ультраозвученный трепонемный антиген приготовлен из культур бледных трепонем, подвергнутых действию ультразвука. Ультраозвученный трепонемный антиген выпускают лиофильно высушенным во флаконах по 5 и 10 мл; хранят его в холодильнике при 4 град. Антиген растворяют и разводят изотоническим раствором натрия хлорида соответственно объему и титру, указанному на этикетке флакона.

Кардиолипиновый антиген.

Кардиолипиновый антиген для реакции Вассермана представляет собой очищенный от балластных примесей спиртовый экстракт липидов из мышц бычьего сердца. Активность антигена обусловливается присутствием трех компонентов - фосфолипида, лецитина и холестерина.

Перед употреблением антиген из ампулы переносят в сухую чистую пробирку, плотно закрывают корковой или притертой стеклянной пробкой.

В случае выпадения кристаллов холестерина антиген необходимо прогреть на водяной бане при 56 град. или в термостате при 37 град. до полного растворения кристаллов.

Для постановки реакции антиген разводят соответственно титру, указанному на этикетке ампулы. Разведенный антиген должен быть слегка опалесцирующим, но не мутным.

Инактивированная лептоспирозная вакцина.

Способ получения вакцины включает выращивание биомассы лептоспир на полусинтетической среде с белками крови человека, инактивирование ее формальдегидом, концентрацию микробной массы методом ультрафильтрации на полых полиамидных волокнах, очистку биомассы от компонентов среды культивирования путем двукратного отмывания физиологическим раствором, стандартизацию микробной массы по оптическому кишечному стандарту мутности 10 единиц и консервирование формальдегидом. Применение: с целью специфической иммунопрофилактики лептоспироза вакцинируют людей в очагах инфекции.

Эритроцитарный трепонемный диагностикум.

Препарат представляет собой 5%-ную взвесь формалинизированных танизированных эритроцитов барана, сенсибилизированных ультраозвученным антигеном культуральных бледных трепонем или патогенных бледных трепонем штамма Никольса. Используется для диагностики сифилиса путем определения уровня антитрепонемных антител в сыворотке крови обследуемых людей в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА).

Гемолитическая кроличья сыворотка к эритроцитам барана.

Используется в РСК. Получают путем иммунизации кроликов суспензией эритроцитов барана. Кроликов иммунизируют путем введения им в вену уха 50%-й взвеси отмытых эритроцитов барана. Через 7 дней после последней инъекции получают пробную сыворотку. Если титр сыворотки не ниже 1:1200, то делают кровопускание. Сыворотку прогревают 30 мин при 56С. Для предупреждения бактериального роста в гемолитическую сыворотку добавляют консервант (1% борная кислота)

Единый бруцеллезный диагностикум.

Применяется для определения антител в сыворотках крови больных бруцеллезом людей и животных в реакциях агглютинации Райта и Хеддльсона. Препарат представляет собой взвесь бруцелл в физиологическом растворе, содержащем в 1 мл 10 млрд. микробных тел, убитых 0,5 % формалином или нагреванием с последующим добавлением в качестве консерванта карболовой кислоты.Штаммы для изготовления диагностикума должны обладать всеми характеризующими бруцеллы свойствами. Выращивание бруцелл производят на обычном мясопептонном агаре с добавлением 1 % глюкозы и 2 % глицерина или на печеночном агаре при температуре 37 °С в течение 48-72 часов. После этого производят смыв бруцелл 0,5 % формалинизированным физиологическим раствором, устанавливают стандарт в 10 млрд. микробных тел в 1 мл. Формалинизированную взвесь - диагностикум ставят в термостат при 37 °С на 48 часов для инактивирования. Препарат разливают в ампулы, контролируют на стерильность, стандарт и агглютинабельность. Препарат представляет собой белую, слегка желтоватую гомогенную взвесь. Для постановки реакции Райта диагностикум разводят в десять раз (до конечной концентрации в 1 млрд. микробных тел), для реакции агглютинации на стекле - используют цельный (0,03 мл).Срок годности диагностикума - 1 год.

Бруцеллезные вакцины.

Накожная сухая живая бруцеллезная профилактическая вакцина представляет собой взвесь живой культуры вакцинного штамма B. abortus в сахарозо-желатиновой среде, высушенную методом сублимационной сушки. Сухая вакцина имеет вид аморфной или кристаллической массы молочно-белого или слегка желтоватого цвета. Вакцину высушивают в вакуумных ампулах емкостью 6-8 мл. Вакцину проверяют на отсутствие бактериальной загрязненности, безвредность и иммуногенность.Бруцеллезную живую сухую вакцину применяют для вакцинации и ревакцинации людей против бруцеллеза. Вакцинацию проводят накожно однократно. Непосредственно перед прививкой вакцину разводят стерильным физиологическим раствором.

Поливалентная бруцеллезная лечебная вакцина используют для лечения острых и хронических форм бруцеллеза. Этот препарат приготавливается из хорошо проверенных штаммов B. melitensis и B. abortus bovis. Вакцина представляет собой взвесь в физиологическом растворе бруцелл овечьего и коровьего видов, убитых нагреванием при 60 °С в течение 1 часа. Контролируется вакцина на стерильность, чистоту и стандарт, а маточная взвесь - на токсичность и специфическую безвредность.

Группы риска по бруцеллезу. Определение восприимчивых и невосприимчивых лиц Чабаны, пастухи, ветеринарные работники, рабочие мясокомбинатов и консервных заводов, шерстеперерабатывающих предприятий составляют группу риска.