Дослід № 3. Бензидинова проба на кров.

Принцип методу: реакція базується на окисненні бензидину до п-хінондііміду киснем, який утворюється при розкладі гідрогену пероксиду під дією гемоглобіну крові.

Матеріальне забезпечення: патологічний шлунковий сік, 10 % розчин бензидину в оцтовій кислоті, 3 % H₂O₂, піпетки, пробірки, штатив.

Хід роботи: До 1 – 2 мл патологічного шлункового соку з підвищеною кислотністю додають 4 – 5 крапель 10 % розчину бензидину в оцтовій кислоті та 2 – 3 краплі 3 % розчину гідрогену пероксиду. У присутності крові утворюється синє або зелене забарвлення внаслідок окиснення бензидину.

Зробити висновок.

Клініко-діагностичне значення. У шлунку кров може з’являтися внаслідок кровотечі з його стінок при виразковій хворобі шлунка, з варикозно розширених вен стравоходу, при легеневих і носових кровотечах, екстирпації зуба, а також може потрапляти в шлунок з їжею.

Дослід № 4. Уреазний метод виявлення в шлунковому соку Helicobacter pylori.

Принцип методу: у гастробіоптаті виявляють ензим уреазу, яка каталізує гідроліз сечовини. Аміак, що утворюється, зміщує рН розчину в лужний бік і в присутності фенолфталеїну утворюється рожеве забарвлення.

Матеріальне забезпечення: патологічний шлунковий сік, 0,5 % спиртовий розчин фенолфталеїну, 1 % розчин сечовини, піпетки, пробірки, штатив.

Хід роботи: До 1 – 2 мл патологічного шлункового соку додають 1 – 2 мл сечовини і 2 – 3 краплі фенолфталеїну. Вміст пробірок перемішують, залишають на декілька хвилин при кімнатній температурі і спостерігають за появою рожевого забарвлення в пробірці.

Зробити висновок.

Клініко-діагностичне значення. За умов норми шлунок натще майже не містить бактеріальної флори. Не зважаючи на бактерицидну дію хлоридної кислоти, у шлунку в невеликій кількості наявні ентерококи, молочнокислі бактерії, стрептококи, стафілококи, гриби, а кількість мікроорганізмів не перевищує 1 000 мікробних тіл у 1 мл шлункового соку. Мікробна флора шлунка змінюється при дуодено-гастральному рефлюксі та зниженні моторики тонкої кишки. Спіралеподібний грамнегативний мікроорганізм Неlісоbасtеr руlоrі (Нр) може спричинювати розвиток хронічних захворювань травного тракту. Основною причиною цього є висока адгезивна спорідненість цих бактерій до мембран епітеліальних клітин слизової оболонки шлунка, яка створює умови для дії бактеріальних ензимів, що виділяються Нр у великій кількості (уреаза, ліпаза, фосфоліпаза, протеаза та каталаза) і пошкоджують слизову оболонку. Нр виявляють при виразці дванадцятипалої кишки у 92 – 100 % хворих, гастритах – у близько 90 %, виразці шлунка – у 70 – 80 %, раку шлунка – до 80 %, диспепсії без виразок у 40 – 70 % хворих.

Контроль виконання лабораторної роботи

1. Пояснити принцип методу визначення кислотності шлункового вмісту: загальної кислотності, вільної та зв'язаної соляної кислоти. Клініко-діагностичне значення цих показників.

2. Пояснити принцип методу виявлення в шлунковому вмісті молочної кислоти. Пояснити причини появи у шлунковому вмісті молочної кислоти?

3. Пояснити принцип методу виявлення в шлунковому вмісті "кров'яних пігментів" бензидиновою пробою. Пояснити причини появи їх у шлунковому вмісті. Яка чутливість цього методу?

4. Пояснити принцип уреазного методу виявлення в шлунковому соку Helicobacter pylori. Клініко-діагностичне значення визначення цієї бактерії у шлунковому вмісті.

5. У гастробіоптаті пацієнта Д. з виразковою хворобою шлунка виявлено Нelicobacter руlori. Котрий з перелічених ензимів має бути наявним у ньому також?

А. Уреаза