Заключение

Уже сейчас ПЦР является незаменимым инструментом в диагностике и исследовании многих возбудителей инфекционных болезней, а количество микробиологических приложений ПЦР продолжает стремительно расти. Дальнейшее развитие и внедрение этого метода в практику клинических диагностических лабораторий может быть связано с совершенствованием и стандартизацией самой технологии, особенно этапов подготовки образцов и анализа продуктов реакции.

Кроме того, возможность использования ПЦР для решения многих практических задач в области микробиологической диагностики зависит от ответов на следующие принципиальные вопросы.

1. Как быстро микробная ДНК элиминируется из различных тканей после гибели возбудителя в результате проводимого лечения и в каких случаях ПЦР может быть использована для контроля эффективности антимикробной терапии?

2. Можно ли при помощи ПЦР дифференцировать состояния колонизации, латентной или активной инфекции и реинфекции?

3. Может ли обнаружение микробной ДНК в «стерильных» в норме биологических жидкостях (кровь, спинномозговая жидкость) служить показателем патологического процесса?

Несомненно, накопление опыта использования ПЦР и сравнение результатов ПЦР-анализа с данными других диагностических методов позволит найти ответы на эти вопросы.

Рекомендуемая литература

1. Воробьев, А.А. Основы медицинской биотехнологии / А.А. Воробьев. - М., 1990.

2. Медицинская микробиология / под ред. В.И. Покровского. - М., 1998.

3. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология / под ред. Л.Б. Борисова. – М., 2001.

4. Микробиология и иммунология / под ред. А.А. Воробьева. - М., 1999.

5. Микробиология и иммунология для студентов ВСО / под ред. А.А. Воробьева. - М., 2000.

6. Микробиология с вирусологией и иммунологией / под ред. Л.Б. Борисова, А.М.Смирновой. - М., 1994.

Тестовый контроль по теме «генетика микроорганизмов и пцр»

1. Генетическая информация у микроорганизмов заключена в следующих структурах клетки, за исключением:

1) нуклеоида;

2) плазмид;

3) ядрышек;

4) транспозонов;

5) IS - последовательностей.

2. Плазмида бактерий - это:

1) клеточный элемент, несущий генетическую информацию, функционирующий и размножающийся независимо от хромосомы хозяина;

2) участок ДНК, способный самостоятельно мигрировать из одной плазмиды в другую внутри бактерии, а также в хромосому или бактериофаг; самостоятельно не реплицируется;

3) участок ДНК, способный перемещаться в различные участки хромосомы бактерии, самостоятельно не реплицируется.

3. IS- последовательность бактерий - это:

1) клеточный элемент, несущий генетическую информацию, функционирующий и размножающийся независимо от хромосомы хозяина;

2) участок ДНК, способный самостоятельно мигрировать из одной плазмиды в другую внутри бактерии, а также в хромосому или бактериофаг; самостоятельно не реплицируется;

3) участок ДНК, способный перемещаться в различные участки хромосомы бактерии, самостоятельно не реплицируется.

4. Транспозон бактерий - это:

1) клеточный элемент, несущий генетическую информацию, функционирующий и размножающийся независимо от хромосомы хозяина;

2) участок ДНК, способный самостоятельно мигрировать из одной плазмиды в другую внутри бактерии, а также в хромосому или бактериофаг; самостоятельно не реплицируется;

3) участок ДНК, способный перемещаться в различные участки хромосомы бактерии, самостоятельно не реплицируется.

5. Перечислите функции плазмид:

а) репарационная (восстановление повреждённого клеточного генома);

б) регуляторная (компенсация метаболических дефектов);

в) кодирующая (внесение в бактерию информации о новых признаках);

г) перенос генетической информации из прокариотической в эукариотическую клетку.

1) если верно а, в;

2) если верно б, в;

3) если верно все.

6. Транспозоны обладают всеми перечисленными функциями, кроме:

1) регуляторной;

2) кодирующей;

3) мутагенной;

4) несут генетическую информацию о транспозиции (о собственном перемещении) с одного репликона на другой;

5) несут генетическую информацию о транспозиции (о собственном перемещении) в различные участки ДНК.

7. Инсертационные последовательности способны выполнять следующие функции, за исключением:

1) перемещаться с одного репликона на другой;

2) перемещаться в различные участки ДНК;

3) кодировать взаимодействие транспозонов, плазмид, фагов между собой и с хромосомой хозяина;

4) «выключать» ген, в который встроилась IS-после­довательность, или служить промотором;

5) индуцировать мутации.

8. Какие типы бактериальных плазмид существуют?

а) F;

б) R;

в) Соl;

г) Нly;

д) tox;

е) биодеградации.

1) если верно а, б, в;

2) если верно а, г, е;

3) если верно все.

9. Какой признак контролируют F-плазмиды?

1) синтез бактериоцинов;

2) синтез половых ворсинок;

3) устойчивость к лекарственным препаратам;

4) синтез гемолизинов;

5) синтез протоксинов;

6) утилизацию некоторых органических соединений.

10. Какой признак контролируют R-плазмиды?

1) синтез бактериоцинов;

2) синтез половых ворсинок;

3) устойчивость к лекарственным препаратам;

4) синтез гемолизинов;

5) синтез протоксинов;

6) утилизацию некоторых органических соединений.

11. Какой признак контролируют Соl-плазмиды?

1) синтез бактериоцинов;

2) синтез половых ворсинок;

3) устойчивость к лекарственным препаратам;

4) синтез гемолизинов;

5) синтез протоксинов;

6) утилизацию некоторых органических соединений.

12. Какой признак контролируют Нly-плазмиды?

1) синтез бактериоцинов;

2) синтез половых ворсинок;

3) устойчивость к лекарственным препаратам;

4) синтез гемолизинов;

5) синтез протоксинов;

6) утилизацию некоторых органических соединений.

13. Какой признак контролируют tox-плазмиды?

1) синтез бактериоцинов;

2) синтез половых ворсинок;

3) устойчивость к лекарственным препаратам;

4) синтез гемолизинов;

5) синтез протоксинов;

6) утилизацию некоторых органических соединений.

14. Какой признак контролируют плазмиды биодеградаций?

1) синтез бактериоцинов;

2) синтез половых ворсинок;

3) устойчивость к лекарственным препаратам;

4) синтез гемолизинов;

5) синтез протоксинов;

6) утилизацию некоторых органических соединений.

15. Бактериоцины - это:

1) синтетические препараты, используемые при химиотерапии инфекционных заболеваний;

2) антибактериальные вещества, синтезируемые бактериями, способные вызывать гибель бактерий того же вида или близких видов;

3) вирусы, способные лизировать бактерии.

16. К синтезу бактериоцинов способны:

а) энтеробактерии;

б) возбудитель чумы;

в) холерный вибрион;

г) стафилококки;

д) коринебактерии.

1) если верно а, в;

2) если верно а, б, г;

3) если верно все.

17. Мутации классифицируют по следующим признакам, кроме:

1) происхождения;

2) числа мутировавших генов;

3) фенотипических последствий;

4) фенотипических проявлений;

5) типа нуклеиновой кислоты, в которой произошла мутация.

18. По происхождению различают мутации:

а) прямые;

б) обратные;

в) спонтанные;

г) индуцированные;

д) генные;

е) хромосомные.

1) если верно а, б;

2) если верно в, г;

3) если верно д, е.

19. По числу мутировавших генов различают мутации:

а) прямые;

б) обратные;

в) спонтанные;

г) индуцированные;

д) генные;

е) хромосомные.

1) если верно а, б;

2) если верно в, г;

3) если верно д, е.

20. По фенотипическим проявлениям (потеря или восстановление признака) различают мутации:

а) прямые;

б) обратные;

в) спонтанные;

г) индуцированные;

д) генные;

е) хромосомные.

1) если верно а, б;

2) если верно в, г;

3) если верно д, е.

21. Каково биологическое значение изменчивости для микроорганизмов?

1) приспособление к условиям существования в окружающей среде и макроорганизме;

2) восстановление повреждённого генотипа;

3) способ передачи генетического материала.

22. Фенотипическими признаками, сообщаемыми плазмидами бактериальной клетке, могут быть:

а) устойчивость к АБ;

б) выработка факторов бактериоциногенности;

в) расщепление сложных органических веществ;

г) продукция факторов вирулентности.

1) если верно а, б;

2) если верно в, г;

3) если верно все.

23. Изменчивость у микроорганизмов может возникать в результате:

1) модификаций;

2) мутаций;

3) рекомбинаций;

4) всего перечисленного.

24. Рекомбинации - это:

1) включение участка хромосомы или эписомальных элементов одного микробного штамма в хромосому другого или обмен участками хромосом между ними;

2) изменения в первичной структуре ДНК микроорганизма, выражающиеся в наследственно закреплённой утрате или изменении какого-либо признака;

3) перенос генетической информации от бактерии-донора к реципиенту посредством «голых» фрагментов ДНК.

25. У бактерий возможны следующие генетические рекомбинации, кроме:

1) конъюгации;

2) модификации;

3) трансдукции;

4) трансформации.

26. Модификация - это:

1) ненаследственные изменения какого-либо признака микроорганизма, приобретаемые им в результате собственной деятельности или воздействия окружающей среды;

2) изменения в первичной структуре ДНК микроорганизма, выражающиеся в наследственно закреплённой утрате или изменении какого-либо признака;

3) перенос генетической информации от бактерии-донора к реципиенту посредством «голых» фрагментов ДНК;

4) перенос генетического материала от бактерии-донора к реципиенту посредством бактериофагов;

5) перенос генетического материала от бактерии-донора к реципиенту при их скрещивании.

27. Мутация - это:

1) ненаследственные изменения какого-либо признака микроорганизма, приобретаемые им в результате собственной деятельности или воздействия окружающей среды;

2) изменения в первичной структуре ДНК микроорганизма, выражающиеся в наследственно закреплённой утрате или изменении какого-либо признака;

3) перенос генетической информации от бактерии-донора к реципиенту посредством «голых» фрагментов ДНК;

4) перенос генетического материала от бактерии-донора к реципиенту посредством бактериофагов;

5) перенос генетического материала от бактерии-донора к реципиенту при их скрещивании.

28. Трансформация - это:

1) ненаследственные изменения какого-либо признака микроорганизма, приобретаемые им в результате собственной деятельности или воздействия окружающей среды;

2) изменения в первичной структуре ДНК микроорганизма, выражающиеся в наследственно закреплённой утрате или изменении какого-либо признака;

3) перенос генетической информации от бактерии-донора к реципиенту посредством «голых» фрагментов ДНК;

4) перенос генетического материала от бактерии-донора к реципиенту посредством бактериофагов;

5) перенос генетического материала от бактерии-донора к реципиенту при их скрещивании.

29. Трансдукция - это:

1) ненаследственные изменения какого-либо признака микроорганизма, приобретаемые им в результате собственной деятельности или воздействия окружающей среды;

2) изменения в первичной структуре ДНК микроорганизма, выражающиеся в наследственно закреплённой утрате или изменении какого-либо признака;

3) перенос генетической информации от бактерии-донора к реципиенту посредством «голых» фрагментов ДНК;

4) перенос генетического материала от бактерии-донора к реципиенту посредством бактериофагов;

5) перенос генетического материала от бактерии-донора к реципиенту при их скрещивании.

30. Конъюгация - это:

1) ненаследственные изменения какого-либо признака микроорганизма, приобретаемые им в результате собственной деятельности или воздействия окружающей среды;

2) изменения в первичной структуре ДНК микроорганизма, выражающиеся в наследственно закреплённой утрате или изменении какого-либо признака;

3) перенос генетической информации от бактерии-донора к реципиенту посредством «голых» фрагментов ДНК;

4) перенос генетического материала от бактерии-донора к реципиенту посредством бактериофагов;

5) перенос генетического материала от бактерии-донора к реципиенту при их скрещивании.

31. Постановку ПЦР производят со следующей целью:

1) обнаружение антигенов возбудителя в материале от больного;

2) обнаружение продуктов жизнедеятельности микроорганизмов в материале от больного;

3) обнаружение соответствующих антител в сыворотке больного;

4) обнаружение специфичных фрагментов ДНК или РНК возбудителя в материале от больного или в чистой культуре микроорганизма.

32. К преимуществам ПЦР не относится:

1) прямое обнаружение возбудителя;

2) высокая чувствительность реакции (выявляет 1-10 возбудителей в пробе материала);

3) возможность определения роли условно-патогенных микроорганизмов (анализ на дисбактериоз);

4) быстрое получение результата, возможность экспресс-диагностики.

33. ПЦР нецелесообразно использовать для определения:

1) трудно культивируемых микроорганизмов (хламидии, микоплазмы и др.);

2) длительно культивируемых микроорганизмов (бруцеллы, микобактерии и др.);

3) вирусов;

4) количества условно-патогенных микроорганизмов в материале.

34. Ложноположительные результаты ПЦР чаще всего обусловлены:

1) контаминированием пробы материала посторонними молекулами ДНК;

2) внесением в пробу материала праймеров;

3) использованием ламинарных боксов для работы с образцами;

4) ингибированием реакции компонентами биологических образцов.

35. К мерам, обеспечивающим защиту ПЦР от загрязнения продуктами предыдущих реакций, можно отнести все, кроме:

1) использования ламинарных боксов для работы с образцами и приготовления ПЦР-смесей;

2) специальных биохимических (урацилгликозилаза) методов инактивации ПЦР-продуктов;

3) специальных физико-химических (УФ излучение + изопсорален) методов инактивации ПЦР-продуктов;

4) исследования отрицательных контролей (не содержащих ДНК-мишень) параллельно с клиническими образцами;

5) осуществления подготовки образцов и их исследования в одном помещении.

Ответы

№ вопр.	ответ	№ вопр.	ответ	№ вопр.	ответ	№ вопр.	ответ	№ вопр.	ответ
1	3	8	3	15	2	22	3	29	4
2	1	9	2	16	3	23	4	30	5
3	3	10	1	17	5	24	1	31	4
4	2	11	1	18	2	25	2	32	3
5	2	12	4	19	3	26	1	33	4
6	5	13	5	20	1	27	2	34	1
7	1	14	6	21	1	28	3	35	5

С.В. Поспелова, М.В. Кузнецова