- •Электронное оглавление
- •ПРЕДИСЛОВИЕ
- •Глава 1. ГЕНЕТИКА: ПРОШЛОЕ, НАСТОЯЩЕЕ И БУДУЩЕЕ
- •Поиски порядка и смысла
- •Современный образ науки
- •Перспективы современной генетики
- •Глава 2. ОТ МИФА К СОВРЕМЕННОЙ НАУКЕ
- •Примитивный интерес к наследственности
- •Одомашнивание растений и животных в зеркале мифа
- •Научные теории наследственности
- •Откуда берутся дети?
- •Глава 3. ЧТО ЖЕ ИМЕННО ПЕРЕДАЕТСЯ ПО НАСЛЕДСТВУ?
- •Строение клеток
- •Рис. 3.1. На тонких срезах под микроскопом видно, что сложные организмы состоят из многочисленных клеток:
- •Рис. 3.2. Строение клетки эукариотических организмов (растений и животных)
- •Молекулярная структура
- •Рис. 3.3. Разнообразие органических молекул, основным элементом которых служат атомы углерода, как правило, соединенные в цепи.
- •Таблица 3.1. МОНОМЕРЫ БЕЛКОВ, АМИНОКИСЛОТЫ
- •Рост и биосинтез
- •Ферменты
- •Рис. 3.4. Структура фермента карбоксипептидазы.
- •Рис. 3.5: а — клеточная мембрана представляет собой тонкий двойной слой молекул липидов с вкраплениями разного рода белков.
- •Синтез полимеров
- •Клетки как фабрики по самовоспроизводству и самообновлению
- •Глава 4. РЕВОЛЮЦИОННОЕ ОТКРЫТИЕ: ЗАКОНЫ МЕНДЕЛЯ
- •Открытия Менделя
- •Рис. 4.1. Объяснение результатов, полученных Менделем.
- •Родословные
- •Другой пример: тестеры и нетестеры
- •Группы крови
- •Множественные аллели и доминантность
- •Тестовые скрещивания
- •Вероятность
- •Два гена и более
- •Рис. 4.2. Решетка Пеннета, показывающая возможные генотипы потомства от скрещивания двух индивидов, гетерозиготных по двум независимым признакам.
- •Первый закон Менделя и определение отцовства
- •Глава 5. ХРОМОСОМЫ, РАЗМНОЖЕНИЕ И ПОЛ
- •Клетки и размножение
- •Рис. 5.1. Микрофотография яйцеклетки, окруженной многочисленными сперматозоидами в момент оплодотворения
- •Митоз и клеточный цикл
- •Рис. 5.2. Стадии митоза: профаза—хромосомы становятся видимыми, а оболочка ядра распадается
- •Кариотип
- •Рис. 5.3. Для составления кариотипа делящиеся клетки распределяют на пластине
- •Мейоз
- •Рис. 5.4. Процесс мейоза (в общих чертах) в клетке с двумя парами хромосом
- •Рис. 5.5. При сперматогенезе из начальной клетки образуются четыре сперматозоида, а при оогенезе только одна клетка.
- •Мейоз и законы Менделя
- •Местонахождение генов
- •Половые хромосомы
- •Нерасхождение хромосом
- •Мужчины XYY: «хромосома преступности»
- •Попытки определения пола
- •Глава 6. ФУНКЦИЯ ГЕНОВ
- •Гены и нарушения метаболизма
- •Рис. 6.1. Метаболические пути тирозина и фенилаланина в организме человека.
- •Гены и ферменты
- •Белки и информация
- •Рис. 6.2. Трехмерная структура белка миоглобина.
- •Рис. 6.3. Трехмерная структура гемоглобина.
- •Рис. 6.4. Электронная микрофотография красных кровяных клеток человека, больного серповидноклеточной анемией.
- •Рис. 6.5. Последовательность первых 28 аминокислот нормальной бета-цепи гемоглобина человека
- •Исправление наследственных нарушений
- •Диетическое питание при фенилкетонурии
- •Химическая коррекция серповидноклеточной анемии
- •Перспективы эвфеники
- •Глава 7. НАСЛЕДСТВЕННЫЙ МАТЕРИАЛ, ДНК
- •Бактерии
- •Рис. 7.1. Большая бактерия Clostridium welchii имеет приблизительные размеры 4 х 1 мкм (микрометров).
- •Рис. 7.2. Если раствор с бактериями нанести на поверхность питательной среды в чашке Петр
- •Первые шаги
- •Вирусы
- •Бактериофаги
- •Рис. 7.3. Общее строение вирусных частиц, или вирионов, вирусов бактерий и вирусов животных
- •Рис. 7.4. Фаги выращивают в чашках Петри, смешивая их образец с бактериями, в которых они могут размножаться, и с агаром.
- •Эксперимент Херши—Чейз
- •Рис. 7.5. Схема протекания фаговой инфекции
- •Строение ДНК
- •Рис. 7.6. Форма двойной спирали ДНК, по Уотсону и Крику
- •Модель ДНК и генетика
- •Рис. 7.7. При репликации ДНК комплекс ферментов разъединяет цепи двойной молекулы
- •Проверка модели
- •Глава 8. СТРОЕНИЕ ГЕНА
- •Распределение генов
- •Рис. 8.1. Генетическая карта плодовой мушки Drosophila melanogaster
- •Кроссинговер внутри генов
- •Генетика фагов
- •Тонкая структура гена
- •Комплементация и определение границ гена
- •Рис. 8.2. С помощью комплемвнтационного теста можно определить, происходят ли две мутации внутри одного гена или нет.
- •Что же такое ген?
- •Рестрикционные ферменты и палиндромы
- •Рис. 8.3. Молекулы ДНК можно легко разделить
- •Рис. 8.4. Один из методов определения последовательности молекулы ДНК
- •Рестрикционное картирование
- •Глава 9. РАСШИФРОВКА КОДА ЖИЗНИ
- •Как строятся белки!
- •Рис. 9.1. Эндоплазматическая сеть клеток эукариот состоит из мембран, обычно расположенных параллельно друг другу и покрытых крохотными частицами — рибосомами, которые служат фабриками по производству белка
- •Молекулы РНК: инструменты для синтеза белка
- •РНК-транскрипция
- •Рис. 9.2. В процессе транскрипции на одной из цепей ДНК образуется комплементарная ей цепь РНК.
- •Рис. 9.3. Электронная микрофотография транскрипции РНК. ДНК имеет вид тонкой нити, проходящей через центр каждого участка, похожего по форме на перо.
- •Трансляция
- •Рис. 9.4. Общая структура молекулы транспортной РНК.
- •Сложные гены эукариот
- •Рис. 9.5. Общие принципы синтеза белка.
- •Генетический словарь
- •Таблица 9.1. Генетический код
- •Колинеарность генов и белков
- •Рис. 9.6. Колинеарность гена и синтезируемого им белка.
- •Терминирующие кодоны
- •Универсальность кода
- •Глава 10. НАСЛЕДСТВЕННОСТЬ В МИРЕ БАКТЕРИЙ
- •Бактерии-мутанты
- •Пол у E.coli
- •Рис. 10.1. Перенос ДНК при скрещивании Hfr х F.
- •Рис. 10.2. Карта хромосомы Е. coli.
- •Факторы резистентности и устойчивость к антибиотикам
- •Лизогения
- •Гены, переносимые вирусом
- •Трансдукция и геном человека
- •Отбор мутантов
- •Глава 11. РЕГУЛЯЦИЯ ГЕНОВ И РАЗВИТИЕ ОРГАНИЗМА
- •Регуляция генов у бактерий
- •Белки, которые связываются
- •Регуляция генов эукариот
- •Эмбриональное развитие в общих чертах
- •Рис. 11.1. Формирование глаза эмбриона цыпленка начинается с чашечковидного отростка мозга.
- •Регуляция по времени и развитие крыла цыпленка
- •Регуляция по положению и развитие тела мухи
- •Рис. 11.3. Начальные взаимодействия генов, определяющих пространственную ориентацию эмбриона плодовой мушки.
- •Формирование глаза мухи
- •Рис. 11.4. Восемь клеток, которые становятся фоторецепторами в омматидии глаза дрозофилы, специализируются в определенном порядке, который зависит от взаимодействия нескольких генов и кодируемых ими белков
- •Глава 12. ВМЕШАТЕЛЬСТВО В СТРОЕНИЕ ДНК: ВОЗВРАЩЕНИЕ ЭПИМЕТЕЯ?
- •Рекомбинантная ДНК и рестриктазы
- •Изучение отдельных клонированных фрагментов
- •Рис. 12.1. Для запуска полимеразной цепной реакции отрезок ДНК нагревают до разделения его на две цепи.
- •Трансгенные организмы
- •Рис. 12.2. Метод ДНК-отпечатков использован для установления невиновности одного из двух обвиняемых в изнасиловании.
- •Генная терапия
- •Геномика — изучение всего генома
- •Функциональная геномика
- •Глава 13. ГЕНЕТИК В РОЛИ ДОКТОРА ФРАНКЕНШТЕЙНА
- •Контроль над исследованиями рекомбинантных ДНК
- •Генетически модифицированные организмы
- •Технологии в контексте
- •Аргументы против генетически модифицированных продуктов
- •Непредсказуемость генетических изменений
- •Влияние генетически модифицированных продуктов на здоровье
- •Возможный экологический урон
- •Неестественность ДНК-технологий (ученые в роли «богов»)
- •Этические аспекты клонирования
- •Клонирование ДНК
- •Ответственность ученых
- •Геномика и здравоохранение
- •Глава 14. ИСТОЧНИК ПЕРЕМЕН: МУТАЦИИ
- •Частота мутаций
- •Мутации у людей
- •Излучение
- •Корпускулярное излучение, или радиация,
- •Таблица 14.1 Примерные дозы излучений
- •Что представляют собой мутации?
- •Мутация — это изменение в ДНК.
- •Аналоги оснований
- •Рис. 14.1. Дезаминирующий агент, такой как азотистая кислота (NH02), удаляет аминогруппу двух оснований, превращая их в основания, образующие неправильные пары
- •Система восстановления ДНК
- •Генетические последствия радиации
- •Хромосомные аберрации
- •Хромосомы человека
- •Анеуплоидия
- •Дупликация и делеция
- •Инверсии
- •Транслокации
- •Глава 15. ЭВОЛЮЦИОННАЯ ГЕНЕТИКА
- •Доказательства эволюции
- •Эволюция как процесс
- •Популяционная генетика
- •Эволюция человека
- •Миграция и разнообразие Homo sapiens
- •Цвет кожи
- •Форма тела
- •Сопротивляемость малярии
- •Приспособленность к высоте
- •Евгеника
- •ПРИМЕЧАНИЯ
- •Глава первая
- •Глава вторая
- •Глава третья
- •Глава четвертая
- •Глава пятая
- •Глава шестая
- •Глава седьмая
- •Глава восьмая
- •Глава десятая
- •Глава тринадцатая
- •Глава четырнадцатая
- •СЛОВАРЬ
- •ОГЛАВЛЕНИЕ
Янко Слава (Библиотека Fort/Da) || http://yanko.lib.ru |
159 |
одну клетку проникает только одна молекула. После посева в чашки клетки растут и делятся, увеличивая количество плазмид и вставок в них. Каждая из получившихся колоний бактерий является клоном ДНК, то есть популяцией идентичных бактериальных клеток, в которой размножается фрагмент донорской ДНК.
Ученые ведут учет этим колониям и сохраняют их. Вместе они образуют геномную библиотеку (банк). Если выведено и собрано достаточное количество колоний, то существует вероятность, что каждая отдельная часть донорского генома представлена в библиотеке хотя бы один раз. Так можно составить библиотеку геномной ДНК мыши, фрагменты которой представлены в виде вставок в плазмидные векторы внутри клеток бактерий.
Следующий шаг во многом зависит от цели эксперимента. С некоторыми возможностями мы познакомимся ниже.
Изучение отдельных клонированных фрагментов
Часто внимание экспериментаторов сосредотачивается на отдельном донорском гене, который ученые хотят исследовать или использовать. При
300
определенной удаче такой ген может уже содержаться в геномной библиотеке, но как его опознать? Для определения гена, который в данном случае можно уподобить иголке в стоге сена, были разработаны различные хитроумные методы. Если библиотека составлена на основе геномной ДНК дикого типа, то можно добавлять ДНК из каждого клона в организмы, мутантные по интересующему нас гену. Затем можно исследовать эти клетки в поисках тех, что приобрели дикий фенотип. Данный метод, названный функциональной комплементацией, основан на том, что клетки большинства организмов внедряют в себя ДНК. ДНК может войти внутрь клетки пассивно либо при помощи электростимуляции. Если клеткиреципиенты достаточно велики, то ДНК можно ввести внутрь них. Существуют даже «генные пушки», которые выстреливают в клетку ДНК, связанную с металлическими частичками. В каждом случае введенная ДНК имеет все шансы внедриться в геном клетки-реципиента и начать функционировать в качестве обычного гена. Если клонированная ДНК, которую внедрили в клетку, имеет аллель дикого типа, а ген клетки — мутированный аллель, то клетка может превратиться в клетку дикого типа. Это свидетельствует о том, что данный клон ДНК переносит именно тот ген, который нужен.
Как только ген опознан, перед исследователями открываются многочисленные возможности. Одна из самых очевидных — секвенирование вставленного фрагмента ДНК и определение последовательности аминокислот кодируемого им белка. Сейчас в базах данных имеются сведения о строении огромного количества белков, и на их основании можно судить, какой тип белка кодирует данный ген.
301
Если функция гена определена, то с его помощью можно выявить схожие гены в родственных организмах, поскольку существует эволюционная связь последовательностей ДНК между различными видами. Один из способов определения родственных генов — довольно эффективная технология,
которую называют полимеразная цепная реакция (polymerase chain reaction,
PCR), разработанная Кэри Маллисом в 1984 году. Она основана на том, что репликация ДНК начинается с праймера — короткого участка ДНК (или
Генетика / Бартон Гуттман, Энтони Гриффитс, Дэвид Сузуки, Тара Куллис. — М.: ФАИР-
ПРЕСС, 2004. — 448 с: ил.
Янко Слава (Библиотека Fort/Da) || http://yanko.lib.ru |
160 |
РНК), от которого продолжается синтез молекулы при помощи ДНКполимеразы. Последовательность клонированных генов можно использовать для составления коротких праймеров на каждом конце интересующего сегмента. Эти праймеры указывают друг на друга на противоположных цепях ДНК и служат отправной точкой для полимераз, которые быстро передвигаются в противоположных направлениях и достраивают фрагменты между праймерами (рис. 12.1). Если удается получить достаточное количество фрагментов нужного размера, то их можно секвенировать и сравнить с последовательностью изначальной клонированной ДНК.
Метод PCR также применим при выявлении дефектных аллелей человека. Большинство рецессивных аллелей в популяции находятся в скрытом гетерозиготном виде, и болезнь проявляется только у гомозиготного потомства гетерозиготных организмов. Поэтому врачам так важно обнаружить гетерозигот. Если установлена последовательность специфического аллеля заболевания, то при помощи метода PCR его можно обнаружить, даже если его сопровождает аллель дикого типа.
302
Рис. 12.1. Для запуска полимеразной цепной реакции отрезок ДНК нагревают до разделения его на две цепи.
Затем к участкам на двух цепях присоединяются праймеры, и цепи реплицируются при помощи ферментов, устойчивых к высоким температурам. Получившиеся молекулы вновь разделяют посредством нагревания, и цикл повторяется, в результате чего число молекул удваивается
Некоторые доминантные дефектные аллели, например тот, что вызывает болезнь Геттингтона, иногда проявляются на довольно поздней стадии жизни. Метод PCR помогает обнаружить их заранее.
303
Таким образом, клонирование и связанные с ним технологии, такие как PCR, постепенно внедряются в медицинский обиход.
Кроме того, клонированный ген можно использовать в качестве зонда для
Генетика / Бартон Гуттман, Энтони Гриффитс, Дэвид Сузуки, Тара Куллис. — М.: ФАИР-
ПРЕСС, 2004. — 448 с: ил.