Genetika_cheloveka_Shevchenko

92		Глава 4. ПЕРЕДАЧА ГЕНЕТИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА
Фаза		Механизм деления		Тип половых клеток			Число хромосом
развития					Клетка зачаткового
							46
					эпителия
Р				( § )	• ( § )
а					Щ®
з		Митоз
н
м
о			®			Сперматогонии
ж				Повторные			46
е
н				деления
и
е
Р
о
с
т	Первое деление мейоза					Сперматоцит
						первого порядка
С							46
	Второе деление мейоза					Сперматоцит
о						второго порядка
3
р							23
е
в							Сперматиды
а
						(претерпевающие
н		Спермогенез
и							изменения)
е							23

Сперматозоиды

(спермин)

23

Рис. 4.15. Схема сперматогенеза у человека

ществования спермия во влагалище достигает 2,5 ч, а в шейке матки — 48 ч.

Функция яичек человека не ограничена сперматогенезом. Велика их роль и в обеспечении организма гормонами. В специальных клетках, находящихся между семенными канальцами яичка, синтезируется главный андрогенный гормон — тестостерон. Он необходим для образования жизнеспособных спермиев, а также для развития и под-

держания вторичных половых признаков. К этим признакам относятся: образование наружных мужских половых органов и придаточных желез репродуктивной системы, усиленное развитие мускулатуры, увеличение гортани и соответственно более низкий голос, рост и распределение волосяного покрова, особенности поведения, связанные с половой жизнью и родительскими заботами.

Оогенез

93

Оогенез

Оогенез происходит в яичниках. У половозрелой женщины они представляют собой уплощенные овальные тела длиной 2,5-5,0 см, шириной 1,5-3,0 см. Яйцеклетки расположены в корковом слое яичника в эпителиальных пузырьках, называемых фолликулами. Вне беременности примерно каждые 28 дней в одном из яичников созревает очередной фолликул, который лопается, высвобождая ооцит второго порядка. Этот процесс называется овуляцией.

Развитие яичников у эмбриона начинается, как было оказано выше, в возрасте 5 недель. Примерно в то же время, когда закладываются яичники, среди клеток коркового слоя выявляются первичные половые клетки. Они мигрируют в развивающийся яичник из эндодермы желточного мешка. Женские половые клетки, мигрирующие в яичник и располагающиеся в его строме, называют оогониями. В начале развития яичников эти клетки размножаются митозом, и число их возрастает. Однако еще в пренатальном периоде большинство первичных половых клеток погибает. В момент рождения девочки их количество равно примерно 2 млн. в обоих яичниках. К моменту полового созревания большинство из них дегенерирует, так что в яичниках их остается только около 40000. Лишь примерно 450 из них достигают стадии ооцитов второго порядка и выходят из яичника в процессе овуляции.

В развивающемся яичнике первичные половые клетки покрываются тонким слоем эпителиальных клеток, образуя фолликулы (рис. 4.16). Клетки, окружающие ооцит одним слоем, называются фолликулярными. До третьего месяца жизни плода происходят только митотические деления. При-

мерно к концу третьего месяца оогонии, находящиеся в фолликуле, начинают активно расти и дифференцироваться, в результате чего каждый оогоний превращается в ооцит первого порядка. Ооциты первого порядка вступают в мейоз. Первое редукционное деление мейоза в ооцитах первого порядка начинается в пренатальном периоде к концу третьего месяца жизни плода. Число ооцитов, вступивших в это время в мейоз, невелико. На препаратах их идентифицируют по лептотене и зиготене. Начиная с седьмого месяца в мейоз вступают новые ооциты первого порядка. Первые пахитепы и диплотены наблюдаются у семимесячного плода.

Ооциты первого порядка вступают в профазу первого деления мейоза, но не завершают его. Мейоз задерживается в конце профазы, и клетки вступают в "фазу покря" - диктиотену. Ко времени рождения девочки ооциты первого порядка продолжают находиться на этой стадии. Их деление завершается только после наступления половой зрелости.

Между рождением и наступлением половой зрелости яичник увеличивается в размере, но лишь отдельные фолликулы начинают расти и развиваться. Изменения, которые происходят в организме женщины в период полового созревания,обусловлены половой функцией яичников, которые стимулируются гонадотропными гормонами гипофиза.

Каждый из нескольких тысяч первичных фолликулов, расположенных в корковом веществе яичника, ко времени полового созревания состоит из ооцита первого порядка диаметром 25-30 мкм, окруженного одним слоем фолликулярных клеток. Ядро ооцита первого порядка остается в профазе первого

94	Глава 4. ПЕРЕДАЧА ГЕНЕТИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА

1 - первичный фолликул; 2 - ооцит первого порядка; 3 - фолликулярные клетки; 4 - полость созревающего фолликула; 5 - zona pellucida; 6 - лучистый венец (corona radiata); 7 - первое полярное тельце; 8 - ооцит второго порядка; 9 - метафаза второго мейотического деления; 10 - оауляция; 11 - разрывающийся Граафов пузырек; 12 - желтое тело

Рис. 4.16. Схема последовательных стадий развития, роста и созревания фолликула и ооцита в яичнике женщины

деления мейоза: ядрышко хорошо выражено, хромосомы вытянуты в тонкие нити. В таком виде они остаются, пока, спустя годы, не завершится мейоз. В цитоплазме ооцита можно наблюдать желточные зерна. В электронном микроскопе в цитоплазме ооцита видны обычные органеллы.

Примерно каждые 28 дней в яичнике половозрелой небеременной женщины развивается несколько фолликулов. Они увеличиваются в размере и приближаются к поверхности. Однако обычно только один из них созревает, прорывает поверхность яичника и высвобождает ооцит второго порядка.

Развитие зрелого фолликула связано с двукратным увеличением размеров ооцита и образованием блестящей оболочки (zona pellucida) вокруг него.

Стадия роста ооцита сопровождается активным делением фолликулярных клеток и накоплением фоллику-

лярной жидкости внутри фолликула. Когда фолликул разрывается, находящийся в нем ооцит второго порядка окружен фолликулярными клетками. Эти клетки формируют вокруг ооцита лучистый венец (corona radiata).

Период роста ооцита сопровождается образованием большого количества разных типов РНК. Для этого в клетке существуют разнообразные механизмы. Накопление рибосомной РНК и образование множества ядрышек, где происходит сборка и созревание субъединиц рибосом, обеспечивается механизмом амплификации генов. Амплификация рибосомных генов представляет собой процесс множественной редупликации участков ДНК, кодирующих рибосомную РНК. В результате такой локальной редупликации ДНК количество копий рибосомных генов увеличивается до 1-2 тысяч, и каждая из них является районом ядрышкового

Оогенез

95

организатора. В результате образуется более тысячи дополнительных ядрышек, где синтезируются и созревают рибосомные РНК, необходимые для сборки рибосом. Рибосомы, в свою очередь, необходимы для синтеза белка.

Быстрое увеличение количества разнообразных информационных РНК происходит за счет активации транскрипции в локально деспирализованных участках хромосом, когда хромосомы приобретают структуру "ламповых щеток". Такая структура характерна для созревающих ооцитов у многих видов животных (рис. 4.17). Известно, что начинает она проявляться в пахитене, а наиболее выражена в диплотене и диктиотене.

Увеличение количества разнообразных РНК обеспечивает накопление питательных веществ в цитоплазме ооцитов. Этому же процессу способствуют и фолликулярные клетки, образующие несколько слоев вокруг ооцита первого порядка.

Процесс овуляции предваряется быстрым завершением первого мейотического деления в ооците первого порядка. В результате образуются две гаплоидные клетки, окутанные лучистым венцом. Распределение цитоплазмы между ними происходит неравномерно: одна из дочерних клеток — ооцит второго порядка, — получает почти всю цитоплазму материнской клетки, тогда как на долю второй - первого полярного тельца — не достается почти ничего. Ооцит второго порядка вступает во второе мейотическое деление, но оно доходит только до стадии метафазы и останавливается до тех пор, пока не произойдет оплодотворение. (Отметим, что вероятность этого мала). Поскольку во время первого деления мейоза число хромосом сокращается вдвое, ооцит второго порядка, а

Рис. 4.17. Микрофотография хромосом типа "лампоаых щеток"

следовательно, и яйцеклетка несет гаплоидный набор хромосом. Такой же набор хромосом имеет и первое полярное тельце. Общая схема оогенеза представлена на рисунке (рис. 4.18).

Таким образом, в отличие от образования спермиев, которое начинается у мужчин только при наступлении полового созревания, образование яйцеклеток у женщин начинается еще до рождения и завершается для каждой яйцеклетки только после ее оплодотворения. Созревающие ооциты пребывают в профазе первого мейоза долгие годы. Кроме того, у мужчин из одного диплоидного сперматоцита первого порядка образуется 4 гаплоидных сперматозоида, а у женщин — из одного диплоидного ооцита первого порядка образуется лишь одна зрелая гаплоидная яйцеклетка. То обстоятельство, что полярные тельца почти не получают цитоплазмы, позволяет ооциту снабдить зиготу полным набором цитоплазматических компонентов, таких, как митохондрии и расположенные определенным образом информационные РНК.

Оплодотворение

Оплодотворение — это сложный процесс, приводящий к слиянию яйцеклетки и сперматозоида, объедине-

96

Фаза

развития

Р

а

з

м

н

о

ж

е

н

и

е

Р

о

с

т

С

о

3

р

е

в

а

н

и

е

Глава 4. ПЕРЕДАЧА ГЕНЕТИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА

Механизм

деления

Митоз

Профаза

Мейоза

МейозI

Полярное

тельце

Стадия Число жизненного хромосом

цикла

	В	46
Оогонии	н
	У
	т
	Р
	и
	У
	т
	р
	о
	б
	н
	а
	я	46
Ооцит
первого
порядка	До	23
	Овуляции
Ооцит Овуляция		23
второго
порядка

	Оплодо-	23 +
Мейоз II	творение	23 = 46

Рис. 4.18. Схема оогенеза человека

нию их ядер и образованию диплоидной зиготы, из которой впоследствии будет развиваться новый организм. Генетическое значение процесса оплодотворения состоит в объединении гаплоидных наборов хромосом отцовских и материнских гамет. Отличающая их высокая степень генетического разнообразия (несмотря на количе-

ственное постоянство хромосомного набора), обеспечивает генетическое разнообразие особей. В результате процесса оплодотворения восстанавливается динлоидность зиготы, что становится толчком к последующим митотическим делениям. У человека, как и у других млекопитающих, процесс оплодотворения, начинающийся

Оплодотворение

97

с проникновения сперматозоида в ооцит второго порядка, запускает механизм созревания яйцеклетки. Как уже говорилось выше, в ооците второго порядка второе мейотическое деление останавливается на стадии метафазы, а завершение развития яйцеклетки происходит только после оплодотворения.

Оплодотворение подразделяется на три последовательных этапа: в первом сперматозоид и яйцеклетка сближаются для возникновения контакта. Второй этап начинается с прикрепления сперматозоида к поверхности яйцеклетки и осуществления контактных взаимодействий между ними. События третьего периода разворачиваются после проникновения сперматозоида в яйцеклетку и завершается объединением их ядер.

Оплодотнорение происходит в верхних концах фаллопиевых труб, куда сперматозоиды проходят из влагалища всего за несколько минут. Столь высокой скорости их движения способстнуют активные сокращения матки и труб, инициируемые биологически активными соединениями, выделяющимися во время полового акта. Кроме того, на направленность движения сперматозоидов сильно влияет градиент рН среды в женских половых путях.

Жизнес пособность внутри организма сперматозоиды сохраняют в течение 1-3 суток, но период высокой фертильности длится лишь 12-24 часа. Сама способность к оплодотворению ооцита появляется только после того, как он проведет несколько часов в половых путях. За это время изменяются структура акросомы и свойства мембраны, ее ограничивающей.

Когда спермии скапливаются вокруг ооцита второго порядка, в головке одного из них происходит очень

быстрая (не более 20 секунд) акросомальная реакция. Она состоит в том, что мембраны головки спермия и акросомы разрываются, так что излившиеся наружу ферменты акросомы "переваривают" клеточные слои, окружающие ооцит, включая zona pellucida. Затем внутренняя мембрана акросомы выворачивается наизнанку, и спермий проникает внутрь ооцита. У человека сперматозоид входит в ооцит целиком (рис. 4.19).

После того, как один нермий проник в яйцеклетку, под ее мембраной разрываются многочисленные вакуоли, освобождая вещество, под действием которого zona pellucida утолщается и образует поверх яйцеклетки непроницаемую для спермиев преграду — оболочку оплодотворения. Так предотвращается проникновение в ооцит других спермиев. У человека проникновение сперматозоида в ооцит является сигналом для завершения второго мейотического деления, ведущего к образованию гаплоидной яйцеклетки и сопутствующих клеток — полярных телец, виоследствие дегененрирующих. В это же время в цитоплазме ооцита рассасывается хвост сперматозоида. Следующий этап процесса оплодотворения связан с объединением генетического материала яйцеклетки и сперматозоида в одно диплоидное ядро.

Высококонденсированное ядро сперматозоида начинает набухать, его хроматин разрыхляется, и ядро превращается в структуру, называемую мужским пронуклеусом. Аналогичные изменения происходят в женском ядре, что приводит к образованию женского пронуклеуса. В процессе формирования пронуклеусов и в мужском, и в женском ядре, происходит синтез ДНК (In 2С), в результате чего каждая хромосома удваивается и состоит из

98	Глава 4. ПЕРЕДАЧА ГЕНЕТИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА

Плазматическом

мембрана

еривителлин\

овое

пространстю

Рис. 4.19. Упрощенная схема оплодотворения

Внехромосомное цитоплазматичвскм наследование

99

двух сестринских хроматид. После того, как репликация ДНК закончена, пронуклеусы перемещаются к центру яйцеклетки (рис. 4.19). Постепенно мембраны нронуклеусов разрушаются, а отцовские и материнские хромосомы, состоящие каждая из двух хроматид, прикрепляются к нитям сформировавшегося веретена деления. Затем хромосомы выстраиваются по экватору веретена, создавая характерную для метафазы митоза картину.

Объединение отцовских и материнских хромосом в общем митозе переводит оплодотворенную яйцеклетку в качественно новое состояние — зиготу. Зигота проходит стадии анафазы и телофазы и завершает свое первое митотическое деление. В результате образуются две дочерние диплоидные клетки — два бластомера. Генетический материал бластомеров представляет собой совокупность хромосом отца и матери: в каждой паре гомологичных хромосом одна хромосома отцовская, а другая — материнская.

Внехромосомное цитоплазматическое наследование

Хромосомная теория наследственности Т. Моргана — одна из основополагающих теорий генетики, но постепенно накапливающиеся факты приводили к представлению о существовании генов и вне хромосом, в цитоплазме. Такими носителями внехромосомной последовательности оказались митохондрии. Выяснилось, в частности, что цитоплазматическое наследование человека связано прежде всего с митохондриальной ДНК.

В организме человека митохондрии обеспечивают дыхание всех клеток, за исключением эритроцитов. Это самовоспроизводящиеся полуавтономные органеллы содержат кольцевые моле-

кулы ДНК. Имеют митохондрии и собственный аппарат белкового синтеза в виде рибосом, транспортных РНК и информационных РНК. Установлено, что аппарат белкового синтеза митохондрий отличается от цитоплазматического: он более близок к аппарату белкового синтеза прокариот.

Как уже говорилось выше, в процессе оплодотворения человека участвуют две клетки: яйцеклетка и сперматозоид. Яйцеклетка — это крупная клетка с большим объемом цитоплазмы, в которой с помощью электронного микроскопа обнаруживают все органеллы, в том числе и множество митохондрий. Сперматозоид же, хотя и имеет упакованные специальным образом в области шейки четыре митохондрии, утрачивает их вскоре после того, как проникает внутрь яйцеклетки, поскольку его хвостовая часть быстро растворяется. Практически, в процесе оплодотворения принимает участие только ядро сперматозоида. Таким образом, диплоидная зигота, дающая начало новому организму, несет митохондрии, полученные только от яйцеклетки, т.е. все митохондрии во всех клетках любого индивида имеют материнское происхождение. Следовательно, генетический материал, локализованный в кольцевых молекулах митохондриальной ДНК, наследуется по материнской линии.

В настоящее время полностью расшифрована последовательность ДНК и выяснена организация генов в митохондриях человека. Геном митохондрии представлен кольцевой молекулой ДНК, содержащей 16569 нуклеопротеидов. В его состав входят гены 12 S- и 16 S-рибосомной РНК, 22 различных тРНК, субъединицы I, II и III оксидазы цитохрома С, шесть субъединиц АТФ-синтетазы, цитохрома b и девять

100	Глава 4. ПЕРЕДАЧА ГЕНЕТИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА

Принцесса Алиса дочь королевы Виктории

Николай II

- ф	Царица	ф .
^	Александра	^

I

Принц Филипп, герцог Эдинбургский

Рис. 4.20. Родство царской семьи Николая II по анализу митохондриальной ДНК. Окрашенные кружки и квадраты обозначают родственников женского и мужского пола, имеющих одинаковую митохондриальную ДНК, передающуюся по материнской линии

других, пока неизвестных белков. В транскрибируемых и транслируемых областях цепей митохондриальной ДНК по сравнению с ядерной ДНК выявлено мало некодируюпих участков. Установлено также, что по ряду характеристик генетический код митохондриальной ДНК человека отличается от универсального.

ДНК в митохондриях является материнской основой наследственности. Известно, что генетический материал

вмолекулах ДНК, способен мутировать. В митохондриях окислительные процессы, связанные с синтезом АТФ, сопровождаются образованием большого количества свободных радикалов, которые могут вызывать мутации

вмитохондриальной ДНК, а процесс репарации митохондриальной ДНК развит, вероятно, не так хорошо, как ДНК ядерной. Так, частота мутаций в митохондриальной ДНК примерно в 10 раз выше, чем в ядерной. Для митохондриальной ДНК известны точечные мутации, делеции, вставки и выпадения.

Встает естественный вопрос: может ли мутация в митохондриальной ДНК быть причиной наследственных заболеваний? Отличительным признаком

такой патологии должна служить ее передача от матери всем ее детям. Одни авторы считают, что подобный тип наследования маловероятен, поскольку каждый ооцит содержит множество митохондрий, и если в одной из них произошла мутация, то все другие остаются немутантами, и, следовательно, не должно быть никакого фенотипического эффекта. Но этот вопрос рассматривается учеными и с другой стороны. Один из подходов к изучению генома митохондрий основан на обработке их ДНК рестриктазами и исследовании полученных рестриктов — фрагментов кольцевой молекулы ДНК. В результате было показано, что митохондрии одного индивида генетически однородны. Кроме того, они способны с большой скоростью обмениваться между собой своими митохондриальными ДНК. Причина этого явления пока до конца не выяснена. Некоторыми исследователями установлено, что для митохондрий характерен динамический процесс слияния и дробления. Как, однако, при фрагментации митохондрий митохондриальная ДНК распределяется между фрагментами, неизвестно. На основе новейших иследований митохондриальной ДНК в ме-

Тератология

101

дицинс ныне формируется целая новая область — мигохондриальная медицина. Ее основатели считают, что мутации в митохондриальной ДНК являются причиной более ста болезней: диабета, некоторых видов миопатии, кардиомиопатии, энцефаломиопатии, кислотного ацидоза, динамического нарушения мозгового кровообращения. эпилепсии и др.

Недавно обнаружено, что в редких случаях встречается отцовская наследственность митохондриальной ДНК. По-видимому, это возможно тогда, когда, после оплодотворения яйцеклетки, содержащий митохондрии хвост сперматозоида не лизируется.

Анализ рестриктов митохондриальной ДНК показал, что различные человеческие популяции отличаются друг от друга их составом. Это явление получило название полиморфизма митохопдриальных ДНК в популяциях человека. Использование еще одного нового метода в исследованиях митохондриальной ДНК — ДНК-полимераз- ной реакции, — позволило использовать параметры митохондриальной ДНК для характеристики популяций человека и изучения филогенетически закономерностей в процессах развития. Оказалось также, что митохондриальная ДНК способна сохраняться в ископаемых останках на протяжении многих веков. В этом случае ее характеристики могут служить веским научным доказательством родства, как между популяциями, так и между индивидами. Так, идентификация царской семьи Николая II по ископаемым останкам была осуществлена на базе анализа именно митохондриальной ДНК (рис. 4.20). В процессе исследования установили общность митохондриальной ДНК из клеток крови здравствующего принца Филиппа гер-

цога Эдинбургского и митохондриальной ДНК, выделенной из останков царицы Александры Федоровны и трех ее дочерей. Все перечисленные лица являются родственниками по материнской линии — потомками принцессы Алисы, дочери королевы Виктории. Родословная этой семьи представлена на рисунке (рис. 4.20).

Тератология

Индивидуальное развитие организма начинается с момента оплодотворения. Сначала зигота делится митотически, затем следуют этапы препатального развития: бластула, гаструла, нейруляция, имплантация в стенку матки, закладка и формирование органов и их систем, рост плода. Пренатальный период сменяется перинатальным, который начинается с 28 недели беременности, включает роды и заканчивается через 7 дней после рождения. Далее идет постнатальпый период, вмещающий в себя всю жизнь человека до смерти.

В процессе индивидуального развития имеется ряд критических периодов, когда организм наиболее уязвим по отношению к действию различных факторов. В литературе, посвященной оценке токсического воздействия окружающей среды на человека, достаточно редко рассматривается проблема возникновения пороков развития, связанных с тератогенными факторами. Так называются факторы, которые, действуя в период беременности, приводят к возникновению врожденных пороков развития у детей, не вызывая нарушения наследственных структур.

По современным данным, не менее 182 тыс. веществ, искусственно введенных в окружающую среду человеком, в том числе и лекарственные препараты, обладают токсическим эффек-