Приготовление сред Посуда для приготовления сред

Посуда для приготовления сред не должна содержать посторонних веществ, например щелочей, выделяемых некоторыми сортами стекла, или окислов железа, которые могут попасть в среду при варке её в ржавых кастрюлях. Лучше пользоваться стеклянной, эмалированной или алюминиевой посудой. Перед употреблением посуду необходимо тщательно вымыть, прополоскать и высушить. Новую стеклянную посуду предварительно кипятат 30 минут 1-2% растворе хлороводородной кислоты, после чего в течение часа прополаскивают в проточной воде.

Сырьё

Исходным сырьём для приготовления большинства сред служат продукты животного и растительного происхождения, а также готовые полуфабрикаты.

Этапы приготовления

1. варка: среды варят на открытом огне, водяной бане,автоклаве или варочных котлах.

2. установление pH: ориентировочно производят с помощью индикаторной бумаги, для точного определения пользуются потенциометром или компаратором. При стерилизации pH снижается на 0,2, поэтому сначала готовят более щелочной раствор.

3. осветление производят, если при варке среды мутнеют или темнеют. Для этого используют белок куриного яйца или сыворотку крови.

4. фильтрация жидких и расплавленных желатиновых сред производят через влажный бумажный или матерчатый фильтры. Фильтрация агаровых сред затруднена - они быстро застывают. Обычно их фильтруют через ватно-марлевый фильтр.

5. разливают среды не более чем на ¾ емкости, т.к. при стерилизации могут намокнуть пробки и среды утратят стерильность.

6. стерилизация: режим стерилизации зависит от состава среды и указан в её рецепте.

7. Контроль

• для контроля стерильности среды ставят на 2 суток в термостат, после чего их просматривают.

• химический контроль окончательно устанавливает pH, содержание общего и амминого азота, пептона, хлоридов.

• для биологического контроля несколько образцов среды засевают специально подобранными культурами, и по их росту судят о питательных свойствах среды.

Желточно-солевой агар (Ж С А). Содержит повышенные концентрации хлорида натрия (8—10%), которые не препятствуют размножению стафилококков, что создает элективность этой среды для данных микробов. Среда дифференцирует стафилококки, продуцирующие лецитовител-лазу, от стафилококков, не выделяющих этот фермент, по      Состав сред. Кровяной агар с генциановым фиолетовым 2%питательный агар с 5—10% дефибринированной крови лошади, кролика или барана и генциановый фиолетовый (1 50 ООО). Желточно-солевой агар 2% питательный агар с 10% хлорида натрия, 20% (по объему) желточной взвеси (1 желток куриного яйца на 200 мл изотонического раствора хлорида натрия .      Для приготовления желточно-солевого агара готовят впрок мясо-пептонный агар (pH 7,2—7,4) с содержанием 10% хлорида натрия. После разливки во флаконы по 100— 200 мл агар стерилизуют в автоклаве в течение 20 мин при температуре 120°С. Перед употреблением растапливают, охлаждают до 45—50°С и добавляют 20% (по объему) стерильной желточной взвеси (1 желток куриного яйца на 150— 200 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия). Среду быстро перемешивают, разливают в стерильные чашки, которые продолжительное время могут сохраняться в холодильнике.      Стафилококки могут находиться в воздухе операционных перевязочных, родильных палат и других больничных помещений. Для их обнаружения делают посевы воздуха на желточно-солевой агар.      Нетребовательны к питательным средам, хорошо растут на простых средах, дают пигментные колонии. Элективной средой для стафилококков является желточно-солевой агар, реже — молочно-солевой агар.