Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Документ Microsoft Office Word (3).docx
Скачиваний:
64
Добавлен:
19.03.2016
Размер:
411.39 Кб
Скачать

Глава 5. Объекты биотехнологии в пищевой промышленности

Биотехнологические объекты находятся на разных ступенях развития и во всех царствах живых существ. К биообъектам относятся молекулы, микро- и макроорганизмы:

· Вещества: ферменты, простагландины, лектины, нуклеиновые кислоты.

· Частицы: вирусы, вироиды.

· Клетки: простейшие, бактерии, клетки растений, животных и человека, культуры клеток.

· Ткани: ткани и органы растений, животных и человека,.

· Организмы: водоросли, лишайники, грибы, растения.

Таким образом, биотехнология изучает и применяет самые разнообразные объекты - от вирусов до человека. [17]

Вирусы

В настоящее время существует такой способ лечения заболеваний, как генная терапия. Для этого в клетки больного надо доставить определенные гены, которые исправляют генетические нарушения. При этом возникает вопрос - как преодолеть иммунологический барьер клетки. Было решено использовать для этого вирусы. Ведь именно они могут проникать в клетку и внедрять в нее чужеродный генетический материал. Такие полезные вирусы называются векторами, т. е. переносчиками.

Бактерии

Существует три направления использования бактерий в биотехнологии: источники генов, продуценты полезных веществ и объекты исследования.

Преобразование веществ

) Органические кислоты и спирты: уксуснокислые бактерии Gluconobacter и Acetobacter - уксусная кислота, молочнокислые бактерии Leuconostoc, Streptococcus и Lactobacillus - молочная кислота, этанол.

) Микробные инсектициды: Bacillus thuringiensis.

) Белок: бактерии Methylomonas и азотфиксирующие цианобактерии - носток, анабена, спирулина, триходесмиум.

) Витамины: Clostridium - рибофлавин.

) Растворители: Clostridium acetobutylicum - ацетон, этанол, изопропанол и n-бутанол.

) Аминокислоты: Corynebacterium glutamicum - лизин.

) Фиксация атмосферного азота: азотобактер, ризобии, актиномицеты и др.

) Биогаз и фотоводород.

) Выщелачивание руд

) Биодеградация отходов

Грибы

Грибы нашли в биотехнологии широкое и разнообразное применение. В первую очередь это продуценты антибиотиков - актиномицеты (Streptomyces, Micromonospora) и пенициллы.

Как известно, взрослому человеку при умеренной физической нагрузке ежедневно необходимо с пищей получать около 12,5 кДж (3 тыс. кал). Эту потребность в энергии могут покрыть 75 г сахара. Но пища обеспечивает нас не только калориями. Организму нужен материал для роста и регенерации устаревших клеток и тканей, поэтому пища должна содержать белки, жиры, углеводы и витамины. По самым скромным подсчетам в масштабах планеты дефицит пищевого белка оценивается в 15 млн т в год.[3]

Такими источниками пищевого белка могут быть биомасса грибов. Съедобные грибы являются строго сапрофитными организмами. В ходе эволюции грибы сформировали сложные симбиотические взаимоотношения с другими обитателями почвы - микроорганизмами и растениями. Это учли биотехнологи, когда в середине 50-х годов начали эксперименты по выращиванию мицелия высших грибов в биореакторе подобно тому, как удалось в индустриальных условиях выращивать мицелий микромицетов.[6]

Дрожжи давно заняли свою нишу в пищевой промышленности. Это производство спиртных напитков и хлеба (Saccharomyces cerevisiae), пищевой белок (Saccharomycopsis lipolytica), каротиноид астаксантин (Phaffia rhodozyma).

Также немыслима пищевая промышленность и без плесневых грибов. И это не только сыры с плесенью, хотя в сыроделии пенициллы широко используются. Плесневые грибы сбраживают сою, рис, солод, пшеницу, производя соевый соус (Aspergillus oryzae), саке, ферментированные бобы. Получают из них и органические кислоты, и промышленные ферменты (амилаза, пектиназа).

Простейшие

Простейшие пришли в биотехнологию недавно и не сразу были оценены по достоинству. Сначала их использовали только для очистки сточных вод. Затем стали выращивать на кормовой белок. И лишь в последнее время в них увидели источник биологически активных веществ.[18]

Водоросли

Народы Тихоокеанского побережья с давних пор употребляют в пищу морские и океанские водоросли. Жители Гавайских островов из 115 видов водорослей, обитающих в местных океанских пространствах, используют в питании 60 видов. В Китае также высоко ценят съедобные водоросли. Особенно ценятся сине-зеленые водоросли Nostocpruniforme, по внешнему виду напоминающие сливу и по вкусовым качествам причисленные к китайским лакомствам. В кулинарных справочниках Японии встречается более 300 рецептур, в состав которых входят водоросли. На Дальнем Востоке весьма интенсивно используют водоросли в пищевых целях и плантации не успевают восстанавливаться естественным путем. В связи с этим все чаще водоросли культивируют искусственно, в подводных садах. Выращивание аквакультур - процветающая отрасль биотехнологии. Водоросли используют также в виде сырья для промышленности

В последнее время внимание специалистов, занимающихся вопросами питания, привлекает сине-зеленая водоросль спирулина (Spirulinaplatensis и Spirulinamaxima), растущая в Африке (оз. Чад) и в Мексике (оз. Тескоко). Для местных жителей спирулина является одним из основных продуктов питания, так как содержит много белка, витамины А, С, D и особенно много витаминов группы В. Биомасса спирулины приравнивается к лучшим стандартам пищевого белка, установленным ФАО. Спирулину можно успешно культивировать в открытых прудах или в замкнутых системах из полиэтиленовых труб и получать высокие урожаи (примерно 20 г биомассы в пересчете на СВ с 1 м3 в сут).[13]

В пищевой промышленности водоросли ценятся не только как источник белка, но и маннита - шестиатомного спирта, получаемого из бурых водорослей. Маннит востребован также в фармацевтике и производстве бумаги.

Еще одно перспективное направление - получение из бурых водорослей биогаза.[20]

Растения

В биотехнологии используют как одноклеточные, так и многоклеточные растения.

Из одноклеточных особенно удобны для выращивания сине-зеленые водоросли: хлорелла, спирулина, анабена. Применяют их обычно как источник белка для людей и животных. Кроме того, водоросль анабена в симбиозе с водным папоротником азоллой способна накапливать азот. Поэтому анабену-азоллу выращивают в качестве азотного удобрения на рисовых полях.

Многоклеточные растения выращивают в виде культур клеток, например суспензионных культур, а также протопластов. Также с помощью растительных гормонов можно получить каллус - неорганизованную массу делящихся клеток. Каллус используют для промышленного производства растений.

Животные

Ткани животных также можно выращивать в виде культуры клеток. Расщепляют их на отдельные клетки протеолитическими ферментами. Помещенные в питательную среду, клетки начинают делиться и образуют клеточный монослой.

Культура клеток, способная к неограниченному росту in vitro, называется устойчивой клеточной линией. Она может расти и делиться в течение 50-100 поколений.

Эти искусственно выращенные клетки сохраняют некоторые свойства исходной ткани. Поэтому их можно использовать как для исследований (изучать свойства тканей, их взаимодействие с вирусами), но и в промышленности - для производства вакцин и рекомбинантных белков.

Пищевая биотехнология является новым и перспективным направлением в перерабатывающей промышленности (мясная, молочная, рыбная и др.). Пищевая биотехнология изучает биотехнологический потенциал сырья животного происхождения и пищевых добавок, в качестве которых используются ферментные препараты, продукты микробиологического синтеза, новые виды биологически активных веществ и многокомпонентные добавки.

С помощью пищевой биотехнологии в настоящее время получают такие пищевые продукты, как пиво, вино, спирт, хлеб, уксус, кисломолочные продукты, сырокопченые и сыровяленые мясные продукты и многие другие. Кроме того, пищевая биотехнология используется для получения веществ и соединений, используемых в пищевой промышленности: это лимонная, молочная и другие органические кислоты; ферментные препараты различного действия - протеолитические, амилолитические, целлюлолитические; аминокислоты и другие пищевые и биологически активные добавки.[19]

Биотехнология позволяет улучшить качество, питательную ценность и безопасность как сельскохозяйственных культур, так и продуктов животного происхождения, составляющих основу используемого пищевой промышленностью сырья.

Кроме того, биотехнология предоставляет массу возможностей усовершенствования методов переработки сырья в конечные продукты: натуральные ароматизаторы и красители; новые технологические добавки, в том числе ферменты и эмульгаторы; заквасочные культуры; новые средства для утилизации отходов.

клетка синтез целевой пищевой

03. 00. 23 – биотехнология *

03.00.23 – биотехнология * * Приказ Высшей аттестационной комиссии Республики Беларусь 7 июня 2007 г. № 108 Цель программы-минимум Цель настоящей программы-минимум – выявить уровень знаний экзаменуемого теоретических основ биотехнологии и смежных наук, необходимых для успешного проведения научно-исследовательской работы в рамках специальности 03.00.23 - «биотехнология» - биологические науки.

Требования к уровню знаний экзаменуемого

Экзаменуемый соискатель должен: иметь представление

  • об истории возникновения биотехнологии и ее месте среди других наук, предмете, основных достижениях и перспективах развития биотехнологии;

  • об основных биологических объектах, используемых в биотехнологии: вирусах, бактериях, грибах, водорослях, клетках высших растений и животных;

  • об изменчивости организмов, ее значении в биотехнологии и о современных подходах к созданию и усовершенствованию промышленных биотехнологических объектов;

  • о методах культивирования микроорганизмов, клеток растений и животных;

  • о методах выделения и очистки продуктов ферментации;

  • о возможностях применения биохимических, биофизических, генетических методов в биотехнологии;

  • о биокаталитическом потенциале микроорганизмов и его использовании для получения различных биологически активных соединений;

  • об экологических аспектах биотехнологии, малоотходных и безотходных технологиях, роли биотехнологии в защите и оздоровлении окружающей среды;

знать

  • структурно-функциональные особенности объектов биотехнологии;

  • основные характеристики генетического аппарата у акариот, про- и эукариот;

  • основные этапы генно-инженерных работ (получение генов, включение генов в состав вектора, перенос генов в клетки-реципиенты, амплификация и экспрессия клонируемых гомологичных и гетерологичных генов);

  • основные практически значимые метаболиты микроорганизмов;

  • основные этапы технологии получения этилового спирта, пива, вина, молочной кислоты, уксуса и др. продуктов;

  • основные этапы технологии получения ферментных препаратов, основные методы иммобилизации ферментов и полиферментных систем;

  • основные этапы технологии культивирования молочнокислых бактерий и получения профилактических и лечебных препаратов. Использование молочнокислых бактерий в процессах силосования кормов, квашения овощей, сыроварении,

  • современные способы обезвреживания отходов биотехнологических производств, схемы биологической очистки сточных вод, утилизации отходов биотехнологических производств

уметь

  • использовать полученные знания для анализа экспериментальных данных, касающихся всех сторон подбора, характеристики и совершенствования объектов биотехнологии, а также и их использования в разнообразных технологических процессах;

  • давать оценку существующим производственным процессам и предложения по их усовершенствованию.

^

1.История, предмет, цели и задачи биотехнологии.

Биотехнология как научная дисциплина. Предмет, цели и задачи биотехнологии. Основные этапы развития биотехнологии. Роль Луи Пастера в становлении и развитии общей, промышленной, медицинской, химической и санитарной микробиологии. Работы Коха, Мечникова, Гамалеи, Ивановского, Заболотного, Стенли, Клюйвера и Перкина, Виноградского, Кребса, Моно, Берга, Уотсона и Крика, Костычева, Шапошникова, Буткевича Основные достижения и перспективы развития биотехнологии. Современные направления биотехнологии. Возникновение и становление биотехнологической науки и промышленности в Беларуси. 2.      Объекты биотехнологии. ^ 2.1.   Основные биологические объекты, используемые в биотехнологии. Вирусы, бактерии, грибы, водоросли, клетки высших растений, клетки животных. Культура тканей и клеток высших растений. Культуры клеток животных и человека. ^ 2.2.   Микроорганизмы, используемые в биотехнологии. Требования, предъявляемые к промышленным штаммам микроорганизмов и др. биотехнологическим объектам. Современные методы создания и усовершенствования промышленных штаммов микроорганизмов. 3.      Сырье и питательные среды. ^ 3.1    Основные компоненты питательных сред. Источники углерода: углеводы, целлюлоза и гидролизаты полисахаридов, побочные продукты производств, органические кислоты, спирты, углеводороды. Источники минерального питания, минеральный азот, минеральные соли. Ростовые факторы. Кислород и вода. Рецептуры питательных сред для культивирования микроорганизмов. Среды для выращивания клеток растений и животных. ^ 3.2.   Значение асептики в биотехнологических процессах. Методы стерилизации жидких и твердых питательных сред. Термическая стерилизация. Химическая стерилизация. Стерилизация фильтрованием. Стерилизация ионизирующим излучением. 4.      Инженерная энзимология. ^ 4.1.   Структура, биосинтез и свойства ферментов. Номенклатура и классификация ферментов. Структура и принцип действия ферментов. Источники ферментов. Особенности биосинтеза ферментов микроорганизмами. Механизмы регуляции синтеза ферментов: индукция и репрессия синтеза ферментов. Катаболитная репрессия, циклический 3’,5’-аденозинмонофосфат и белок-рецептор ц-АМФ.. Регуляция активности ферментов. Аллостерия. Регуляция активности ферментов по принципу обратной связи. Основные методы выделения и очистки ферментов. Способы определения и выражение активности ферментов. Стационарная кинетика ферментативных реакций, уравнение Михаэлиса-Ментен. Влияние температуры, рН, ингибиторов и активаторов на скорость ферментативных реакций. ^ 4.2.   Иммобилизованные ферменты. Иммобилизованные ферменты. Органические и неорганические носители для иммобилизации ферментов. Иммобилизация ферментов путем адсорбции на нерастворимых носителях, путем включения в полимерные структуры. Инкапсулированные и поперечно сшитые ферменты. Иммобилизация с использованием полупроницаемых мембран, двухфазных систем. Химические методы иммобилизации. Преимущества и недостатки методов иммобилизации. Стабильность иммобилизованных ферментов. Ферментативный катализ в органических растворителях. ^ 4.3.   Иммобилизованные клетки микроорганизмов. Способы иммобилизации клеток микроорганизмов. Приемы использования иммобилизованных клеток микроорганизмов, преимущества перед другими биокатализаторами. 5.      Изменчивость организмов и ее значение в биотехнологии. ^ 5.1.   Мутации и модификации. Наследственность, изменчивость и отбор как факторы эволюции. Формы изменчивости организмов. Факторы, вызывающие мутации. Молекулярные механизмы спонтанного мутагенеза. Кето-енольная и амино-иминная таутомерия азотистых оснований. Классы мутагенов (физические, химические, биологические). Действие ультрафиолетовых лучей, ионизирующих излучений, химических соединений. Биологические мутагены. Мутагены окружающей среды и методы их тестирования. Антимутагены. Процессы репарации ДНК. ^ 5.2.   Селекция. Традиционные способы увеличения продуктивности штаммов микроорганизмов. Основные подходы, используемые в селекции. Методы выделения мутантов. Селективные среды. 6.      Генетическая инженерия. 6.1.   Генная инженерия in vivo. Основные характеристики генетического аппарата у акариот, прокариот и эукариот. Понятия о генной, геномной и хромосомной инженерии. Плазмиды и коньюгация. Трансформация. Бактериофаги и трансдукция (генерализованная и специализированная). Применение транспозонов. Получение и слияние протопластов. 6.2.   Генная инженерия in vitro (технология рекомбинантных ДНК). Ферменты генной инженерии. Основные этапы генно-инженерных работ (получение генов, включение генов в состав вектора, перенос генов в клетки-реципиенты, амплификация и экспрессия клонируемых гомологичных и гетерологичных генов. Локализованный и сайт-специфический мутагенез. Суперпродуценты и проблема стабильности векторов. Секреция чужеродных белков. Конструирование штаммов – продуцентов первичных и вторичных метаболитов. 7.      Микробиотехнология. 7.1.   Общая характеристика микробной биотехнологии. Принципы культивирования микроорганизмов. Твердофазное, поверхностное и глубинное культивирование Периодическая культура. Непрерывная культура. Отъёмно-доливной метод. Дробное дозирование субстрата. Способы получения посевного материала для поверхностного и глубинного культивирования. Основные типы ферментационной аппаратуры для поверхностного и глубинного культивирования. Устройство типичного ферментёра. Влияние условий культивирования на рост микроорганизмов. Хемостат и турбидистат. Получение посевного материала. Требования, предъявляемые к посевному материалу. Предферментация. 7.2.   Технические средства для реализации процессов ферментации. Основы асептики в биотехнологических производствах. Системы подготовки стерильного сжатого воздуха и очистки отработанного воздуха. Пенообразование и пеногашение. Системы контроля и управления процессом ферментации. 7.3.   Выделение конечных продуктов ферментации. Экзо- и эндометаболиты как целевые продукты биотехнологии. Дезинтеграция. Сепарация. Осаждение. Флотация. Упаривание. Современные методы выделения метаболитов из растворов: мембранные процессы (ультрафильтрация и обратный осмос), ионный обмен, гельпроникающая и аффинная хроматография, экстракция, кристаллизация, вымораживание, сорбция, кристаллизация, микрофильтрация и т.д. Аппаратурное оформление процессов выделения и очистки продуктов ферментации. 7.4.   Оценка процесса ферментации. Оценка продуктивности по биомассе для периодического и непрерывного процессов. Определение продуктивности по целевому продукту. Расчет удельной скорости роста, удельной скорости образования целевого продукта и скорости потребления субстрата. Расчет величин экономического коэффициента и выхода целевого продукта. 7.5.      Методы контроля микробиологических процессов. Методы определения концентрации микроорганизмов. Методы и приборы для контроля технологических параметров процесса культивирования – температуры, рН, содержания растворенных газов. Применение методов планирования эксперимента при исследовании биотехнологических процессов. Использование компьютерной техники для управления биотехнологическими процессами. 7.6.   Микробиотехнологические процессы. Общая характеристика брожения. Характеристика процессов получения этилового спирта, пива, вина. Ацетоно-бутиловое брожение. Биотехнологические процессы получения органических кислот. Бродильные процессы получения молочной и пропионовой кислот. Использование молочнокислых бактерий в процессах силосования кормов, квашения овощей, сыроварении, приготовлении профилактических и лечебных препаратов. Окислительные процессы. Получение уксуса. Получение лимонной кислоты. Получение микробных препаратов – биоудобрений, стимуляторов и регуляторов роста растений. Технология получения препаратов для биологического метода борьбы с вредителями и болезнями растений. Научные основы применения таких препаратов. 8.      Ферментная биотехнология. Производство ферментных препаратов. Схема получения технических и очищенных препаратов ферментов: ГХ, ПХ, Г2Х, П2Х, П3Х, Г3Х, Г10Х, П10Х, Г20х, П20Х. Товарные формы ферментных препаратов. Применение ферментных препаратов. 9.      Фитобиотехнология. Бобовые культуры и симбиотическая фиксация азота. Дедифференцировка и каллусогенез как основа создания пересадочных клеточных культур. Вегетативное размножение растений методом культуры тканей. Культивирование клеток растений в глубинных условиях. Микроклональное размножение растений. Использование культуры тканей для получения безвирусного посевного материала и оздоровления растений. Использование протопластов в селекции растений. Цитопласты. Цибридизация. Использование методов генетической инженерии в фитобиотехнологиии. получение трансгенных растений Использование протопластов в селекции растений. Технология микробиологического производства биогаза и удобрений. 10.    Зообиотехнология. Возможности и перспективы использования культур тканей животных и человека в биотехнологии. Использование эмбриональных тканей для репродукции вирусов и получения вирусных вакцин. Трансплантация эмбрионов животных. Получение трансгенных животных; Гибридомы. 11.    Биотехнология и медицина. 11.1. Получение антимикробных веществ. Биотехнологическое получение антисептиков, дезинфектантов и химио-терапевтических средств. Классификация антибиотиков. Производство b-лактамных, О-, S- и N-гликозидных, пептидных, полиеновых и др. антибиотиков. Получение аминокислот и витаминов. Использование трансформирующей активности микроорганизмов при производстве стероидных гормонов. 11.2. Получение вакцин. Получение вакцин на основе живых и убитых клеток патогенных микробов. Вакцины из клеточных компонентов патогенных микробов. Генно-инженерные вакцины. ДНК-вакцины. 11.3. ^ Проблема качества биотехнологической продукции. Системы GLP (Good Laboratory Practice; «хорошая лабораторная практика») и GMP (Good Manufacturing Practice; «хорошая производственная практика») в связи с качеством биотехнологических продуктов. Цель функционирования систем GLP и GMP, их распространение и основные требования. 11.4. ^ Применение методов молекулярной генетики и технологии рекомбинантных ДНК в медицинской диагностике и лечении патологий. Пренатальная диагностика наследственных болезней. Использование ферментов в процессах получения лекарственных препаратов. Получение интерферонов и моноклональных антител. Иммунизация нуклеиновыми кислотами (ДНК-вакцинация). Иммунотерапия рака с помощью рекомбинантной ДНК. Полимеразная цепная реакция и ее использование в научной и практической медицине. Антисмысловые олигонуклеотиды в качестве лекарственных средств. Направленное введение лекарственных препаратов. Радиоиммунологический (РИА) и иммуноферментный (ИФА) анализ. Теломераза и старение. Перспективы использования теломеразы в медицине будущего. 12.    Биогеотехнология (получение ископаемых с использованием микроорганизмов). Обогащение руд и угля. Обессеривание угля. Удаление метана из угольных пластов. Увеличение добычи нефти. 13. Технологическая биоэнергетика. Биоконверсия энергии; получение водорода, этанола, метана и др. видов топлива из возобновляемого природного сырья; повышение эффективности фотосинтетических систем; биотопливные элементы. 14. Экологические аспекты биотехнологии. Представления о круговороте веществ в природе. Характеристика процессов круговорота углерода, азота, фосфора, железа, марганца. Особенности реакций, осуществляемых в аэробных и анаэробных условиях. Воздействия микроорганизмов на нефть, торф, уголь. Участие микроорганизмов в деструкции органических остатков в почве (белков, нуклеиновых кислот, полисахаридов лигнина и т.д.). Обезвреживание отходов биотехнологических производств. Схема биологической очистки сточных вод. Утилизация отходов биотехнологических производств. Роль биотехнологии в защите и оздоровлении биосферы. Биодеградация ксенобиотиков в окружающей среде. Понятие о малоотходных и безотходных технологиях. Литература

  1. Ермишин А.П. и др. Биотехнология. Биобезопасность. Биоэтика / под. ред. А.П.Ермишина. Мн.: Тэхналогiя, 2005.

  2. Елинов Н.П. Основы биотехнологии. СПБ: "Наука", 1995.

  3. Бокуть С.Б., Герасимович Н.В., Милютин А.А. Курс лекций по молекулярной биологии клетки. Мн.: "Вышэйшая школа", 2005.

  4. Белясова Н.А. Биохимия и молекулярная биология: Учеб пособие.-Мн.: Книжный дом, 2004.

  5. Щелкунов С.Н. Генетическая инженерия: Учеб-справ. пособие. Новосибирск: Сиб. унив. изд-во, 2004.

  6. Бекер М.Е., Лиепиньш Г.К., Райнулис Е.П. Биотехнология. М.: "Агропромиздат", 1990.

  7. Бейли Д., Оллис Д. Основы биохимической инженерии, в 2-х частях. М.: "Мир", 1989.

  8. Биотехнология, в 8-ми томах. Под ред. Н.С.Егорова, В.Д.Самуилова. М.: "Высшая школа", 1987-1988.

  9. Виестур У.Э., Шмите И.А., Жилевич А.В. Биотехнология: биотехнологические агенты, технология, аппаратура. Рига: "Зинатне", 1987.

  10. Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. М. «Мир», 2002.

  11. Овчинников Ю.А. Биоорганическая химия. М.: "Просвещение", 1987.

  12. Грачева И.М. Технология ферментных препаратов. М.: "Агропромиздат", 1987.

  13. Гриневич А.Г., Босенко А.М. Техническая микробиология. Мн.: "Вышэйшая школа", 1986

Скачать, 170.55kb.

Поиск по сайту:

Начало формы

Конец формы

Добавить текст на свой сайт

Маленькая грудь? Я увеличила грудь дома на 2 размера за 15 мин! Смотри..

Читать далее »

Это уберет весь жир в теле! Через месяц уйдет до -30 кг! Читай пока не удалили!

Читать далее »

Этой японке 53 года, а кожа на лице как у ребенка! Секрет в том, что мажет

Читать далее »

Эффективное быстрое похудение! -12 кг за неделю! Этот способ работает! Записывай рецепт:...

Простой способ сделать носик идеальным! Просто 1-2 раза делай...

Врачи "ахнули" когда увидели! От косточки не осталось и следа, после простой...

База данных защищена авторским правом ©ДуГендокс 2000-2014 При копировании материала укажите ссылку наши контакты DoGendocs.ru

Дивное портмоне из натуральной кожи

Уже в 20 лет я стала миллионершей с системой Quick Cash

Нет более короткого пути к богатой жизни

SmartWatch - часы-телефон с щедрой скидкой + подарок

Категории:

Лекции

Доклады

Урок

Справочники

Сценарии

Рефераты

Курсовые работы

Авторефераты

Программы

Учебное пособие

Самостоятельная работа

Конспект

Практикум

Документы

Опубликовать

Бинарные опционы. Одно движение - и я МИЛЛИОНЕРША

Уже в 20 лет я стала миллионершей с системой Quick Cash

В свои 20 лет я стала миллионершей благодаря бинарным ...

Будь первым с этим современным гаджетом. Сейчас дешевле

Звони с руки! Скидка + часы CURREN в подарок при заказе ...


Разработка сайта — Веб студия Адаманов