1. Реакция агглютинации

Агглютинация -склеивание и выпадение в осадок микробных тел, при взаимодействии их с агглютининами. Агглютинины сод-ся в крови чел и жив., перенесших инфекцию. Постановка развернутой р-ции: компоненты- 1.сыворотка крови (0,1мл) 2. изотонич р-р хлорида натрия 3.корпускулярный Аг. Приготовление: ряд разведений 1:50 до 1:3200. 2 посление пробирки -контроли. Кроме 1 и последн наливают изотон р-р.,Затем из 1, берут 3мл и по 1мл наливают в 1,2, и последн., Далее из 2пробирки 1 мл в 3, из 3 в 4, 4в5, из 5 в дезинфецир р-р, (тоесть пол-ся ряд 2ухкратных разведений), Затем во все кроме последней добавл Аг. Жидкость мутнеет. Затем встряхивают и ставят на 2ч, t 37гр. Учитывают предварит рез-т. Через18-20ч окончательный. Положителньый рез-т — образование на дне осадка,,с просветлением надосадочной жидкости. Остаток на дне — агглютинат. (различают мелкозернистую(О)(кучка) и хлопчатую(Н)(зонтик) аггл-цию. Р-ция считается положит, если в контрольных пробирках жидкость однородно в 1- мутн. Во 2- прозрачн. Ориентировочная р-ция аг-ци: ( определение микроба) на стекло наносят 2 капли агглютин. сыворотки и 1 каплю изот р-ра. На расстоянии др. от др. Затем в 2 капли вносят бакт. Культуру.а ко 2 капле кульуру не доавл. Перемешивают, при комн.темпер, рез-т учит с пом. лупы ч-з 5-10мин.Положителньая р-ция — склеивание в виде зерн или хлоп. Групповая р-ция аг-ции нек-ые МО содержат групповые Аг.. При парентеральном введние бактер.в орг-ме появл. Антитела-агглютинины: специфические соотв видовым Аг, и не специф. возникающие под действ групповых Аг. Сыворотка сод. групповые агглют-ны агглютинирует родств микроб виды. - это и есть групповая р-ция.

2.Р- ия преципитация, ее механизм.

Реакция преципитации относится к числу наиболее простых и ускоренных методо серологического анализа. В основе реакции лежит образвоание видимого осадка, состоящего из вступивших друг с другом в соединение антител и молекулярных антигенов (например, бактериальн. белков или полисахоридов, образовавшихся при разрушении микробных тел).

Р-ция преципитации является качесвенным методом исследования, при котором диагностические значение имеет появление осадка в реагирующих жидкостях.

Р- ию преципитации используют в след. целях:

Для выявления специфич антител в исследуемой сыворотке на основе применения определенных антигенов

Для обнаружения антигенов белковой или полисахаридной природы с использованием известной, специфической, преципитирующей сыворотки.

Для постановки р-ции преципитирующей необходимо:

Сыворотки (исследуемые или иммунные- преципитирующие)

Антигены (исследуемые иди диагностические)

Изотонический раствор хлорида натрия рH 7,0-7,2

Пастеровские пипетки

Преципитационные пробирки (диаметром 2-3 мм и высотой 2-3 см для р-ции кольцепреципитации, диаметром 4 мм и высотой 4-6 см для р-ции преципитации по типу флокуляции)

Антигены, применяемые для постановки р-ции преципитации, представлят собой, коллоидные в-ва в состоянии тонкой дисперсности, обязательно должно быть в растворимом состоянии. В качестве антигенов в р-ции приципитации использ фильтраты бульонных культур, экстракты микробных тел, полученные различными способами.

Преципитирующие сыворотки, приготовленные против различных видов микробов, реагируют с антигенами, полученными только от этих видов микробов.

При постановке р-ции преципитации титр преципитирующих сывороток определяют по наибольшому разведению, антигена, при котором еще наблюдается образование преципитата.

Техника постановки р-ции преципитации:

В штатив устанавливают 2 ряда преципитационных пробирок. В пробирках первого ряда готовят несколько последовательных разведений антигена (степень начального и конечного, разведений определяется способом приготовления и активностью антигена). Экстракты микробных культур разводят обычно от 2 до 64 раз.

В каждую пробирку второго параллельного ряда вносят 0,5 мл цельной или разведенной 1:2 преципитирующ сыворотки. Затем разведенный антиген, находящий в пробирках первого ряда, переносят в объем 0,5 мл в соответствующие пробирки второго ряда.

Смесь антигена с сывороткой после тщательного перемешивания ставят на 2 ч в термостат, а затем на 18- 20ч оставляют при комн. Температуре.

В случае положительного результата в прозрачной жидкости образуются хлопья преципитата, оседавшие в виде рыхлого осадка на дно пробирки. Предельное разедение антигена, с которым сыворотка образет преципитат, считается титром сыворотки.

Различают след. методы постановки р-ции преципитации

Метод простой диффузии, при котором одно реагирующее в-во(обычно антиген) диффундирует в агар, содержащий постоянную концентрацию др реагирующего в-ва, - иммунную сыворотку

Метод двойной диффузии , при котором антиген и антитело, движутся навстречу др другу через нейтральный слой агара