6.Реакция связывания комплемента (рск)

Реакция связывания комплемента (РСК) заключается в том, что при соответствии друг другу антигенов и антител они образуют иммунный комплекс, к которому через Fc-фрагмент антител присоединяется комплемент (С), те происходит связывание комплемента комплексом антиген - антитело. Если же комплекс антиген - антитело не образуется, то комплемент остается свободным. PCK проводят в две фазы 1-я фаза - инкубация смеси, содержащей антиген + антитело + комплемент, 2-я фаза (индикаторная) - выявление в смеси свободного комплемента путем добавления к ней гемолитической системы, состоящей из эритроцитов барана, и гемолитической сыворотки, содержащей антитела к ним. В 1-й фазе реакции при образовании комплекса антиген - антитело происходит связывание им комплемента, и тогда во 2-й фазе гемолиз сенсибилизированных антителами эритроцитов не произойдет (реакция положительная). Если антиген и антитело не соответствуют друг другу (в исследуемом образце нет антигена или антитела), комплемент остается свободным и во 2-й фазе присоединится к комплексу эритроцит - антиэритроцитарное антитело, вызывая гемолиз (реакция отрицательная).

Схема рск с сывороткой больного.

Схема рск с сывороткой здорового человека.

7. Ифм.

Метод используется в лабораторной клинической иммунологии для диагностики инфекционной патологии, включая ВИЧ-инфекцию, дефектов гуморального и клеточного звеньев иммунной системы.

В качестве метки ферменты наиболее чувствительны и универсальны.

Иммуноферментный твердофазный вариант метода

Осуществляют выявление антигенов или антител с помощью соответствующих им антител, конъюгированных с ферментом меткой(пероксидазой хрена, щелочной фосфатазой).

После соединения антигена с меченной ферментом иммунной сывороткой в смесь добавляют субстрат пероксидазы – перекись водорода.

Субстрат расщепляется ферментом, что в конечном итоге приводит изменению цвета продукта реакции: интенсивность окраски прямо пропорциональна кол-ву связавшихся молекул антигена и антител.

Твердофазный ИФА –вариант теста, когда один из компонентов иммунной реакции(АТ или АГ) сорбирован на твердом носителе, в лунках планшеток из полистирола.

­­

Конкурентный твердофазный ИФА.

При наличии в исследуемой сыв. спец АТ происходит их связывание с антигеном на твердой фазе, субстрате, в результате чего специф. АТ, меченые ферментом, не взаимодействуют со связанным антигеном – отмечается низкое содержание маркера.

При отсутствии спец АТ в исследуемой сыворотке , иммунного комплекса АГ-АТ не образу-

-ется , а так как АГ, находящийся на твердом субстрате, не связался, то специфические АТ

меченные ферментом, взаимодействуют с ним, в результате чего определяют высокое содержание маркера.

8. Реакции фагоцитоза. Практическое использование реакции фагоцитоза при оценке иммунного статуса.

Фагоцитоз осущ-ся микрофагами и макрофагами. Стадии фагоцитоза: приближение, прилипание, погружение, переваривание.

Оценка функциональной активности фагоцитирующих клеток.

Колич. оценку фагоцитарной активности гранулоцитов и моноцитов производят в цельной крови, в лейкоцитарной взвеси или в обогащенных фракциях фагоцитирующих клеток. В качестве стандартных объектов фагоцитоза используют монодисперсные частицы латекса диаметром 1,0-2,0 мкм, суспензию убитых нагреванием бактерий или дрожжеподобных грибов.

Фагоциты смешивают с фагоцитируемым материалом в соотношении 1:10 или 1:100 и инкубируют при 37°С в течение 30 мин при постоянном перемешивании. Затем пробирки центрифугируют и осадок ресуспензируют в капле сыворотки крови для приготовления мазка. В мазках, фиксированных краской Май-Чрюнвальда и окрашенных по Романовскому-Гимзе, подсчитывают процент фагоцитирующих клеток (ФП – фагоцитарный показатель) и кол-во поглощенных частиц на 1 клетку (ФЧ – фагоцитарное число).

У здорового человека ФП=40-80%, ФЧ=1-5.