20. Спермоагглютинация, ее причины и профилактика

Под агглютинацией сперматозоидов понимают такое явление, как склеивание сперматозоидов между собой. Данный процесс хорошо визуализируется при исследовании нативных и окрашенных препаратов.

Выделяют истинную и ложную (неспецифическую) агглютинацию. Под вторым типом понимают слипание сперматозоидов с эпителиальными клетками, макрофагами, с фрагментами разрушенных клеток или комками слизи.

При истинной же агглютинации происходит прилипание сперматозоидов друг к другу, причем это слипание может быть разным – некоторые сперматозоиды соединяются головками, некоторые хвостами, а некоторые в виде головка-хвост. Однако, если имеется большое значение, то это может говорить о наличии иммунологических причин бесплодия. Также это встречается при аутоиммунных процессах и хронических воспалениях. 

Сперматозоид обладает электрическим зарядом. Его спермий получает, находясь в придатке семенника. Спермии по всей поверхности имеет ♂, а яйцеклетка ♀. Это необходимо для того, чтобы они не склеивались (т.к. одноименные заряды отталкиваются). Снижение электрического заряда приводит к склеиванию сперматозоидов. Это называется агглютинацией. Агглютинация – возникает в результате нейтрализации заряда при увеличении кислотности спермы и наличии в ней ионов некоторых металлов. При наличии агглютининов: а) изоагглютинины – активные вещества которые вызывают агглютинацию спермиев своего вида сыворотка крови коров может агглютинировать сперму быка); б) гетероагглютинины (действуют на спермиев других видов животных но не действуют производителя своего вида).

Агглютинация может быть: – обратимой (сперматозоиды склеиваются только головками, а хвостики подвижны – звездчатая); – необратимая (спермии склеиваются беспорядочно – это массовая коагуляция). Образование спермиоагглютининов это защитная реакция самки, особенно при многократном и обильном введении спермы в половые пути самки. У молодых самок спермиоагглютининов нет, а у многорожавших они есть.

 

21. Дыхание и гликолиз сперматозоидов

Источники энергии движения спермиев Энергия берется в результате в результате осуществления 2-х процессов: а) за счет расщепления сахара (гликолиз или фруктолиз). Этот процесс осуществляется по формуле С6 Н12 О6 – 2С3 Н6 О3 . При гликолизе из молекулы сахара образуется две молекулы молочной кислоты и энергия. При расщеплении грамм-молекулы сахара выделяется 50 ккал энергии. При гликолизе энергии выделяется в 20 раз энергии меньше чем при окислении в присутствии кислорода. б) дыхание – это расщепление энергетических субстратов в присутствии кислорода. Окисляются в основном сахара, затем жиры и белки. Химизм в следующем: С6 Н12 О6 +6О2 – 6СО2 + 6Н2О + 670 ккал энергии. Движение спермиев обусловлено наличием в них сократительного белка – спермозина. Источником для его работы служит АТФ (аденозинтрифосфат) который отдает энергию и превращается в АДФ (аденозиндифосфат), Для перехода опять в АТФ используется – гликолиз или дыхание спермы. Сперма – быка, барана - содержит много сахаров, густая и доступ кислорода затруднен и в ней преобладает гликолиз; а в сперме хряка и жеребца – мало сахара и идет в основном дыхание.

22. Преимущества длительного хранения спермы

1 Неограниченно долгое сохранение спермы в жидком азоте в замороженном состоянии даёт возможность более рационального использования ценных производителей – устраняется сезонность использования быков.

2 Замораживание спермы позволяет применить метод оценки быков по качеству потомства, т.е. повышается уровень селекционно-племенной работы.

3 Высокая эффективность использования спермы (отход до 5%).

4 Экономия средств на транспортировку.

5 Экономия за счёт ликвидации малоценных производителей.

6 Систематическое использование производителей по графику положительно отражается на их здоровье.

23. Теоретические основы сохранения спермы

Для сохранения спермы вне организма используют специальные синтетические среды. Среды увеличивают объём спермы, что имеет важное практическое значение для интенсивного использования производителей, а также защищают спермии от неблагоприятных воздействий внешней среды и поддерживают их биологическую полноценность. Разбавители должны иметь определённые физико-химические свойства и такую концентрацию составных частей, при которой осмотическое давление было бы наиболее благоприятным для жизни спермиев того или иного вида животных. При приготовлении среды должна соблюдаться строгая дозировка компонентов среды. В качестве основы возможно использование только бидистиллированной воды с рН 5,0-7,0. В состав разбавителей входят:

- Неэлектролиты (глюкоза, фруктоза, лактоза), которые служат энергетическим материалом для спермиев, обладают бактериостатическими свойствами, предупреждают агглютинацию, выполняют роль экзоцеллюлярных криопротекторов.

- Электролиты предохраняют спермии от набухания и ослизнения, поддерживают буферность спермы.

- Нейтрализатор температурного шока – желток куриного яйца, моноэтаноламин-хлорида, экстракты бобов и сои. Яйцо должно быть получено из хозяйств, благополучных по заразным заболеваниям (туберкулёз, сальмонеллёз, грипп), от здоровой с хорошим витаминным питанием птицы, диетическое.

- Антибиотики и сульфаниламиды добавляют к разбавителю для предупреждения развития микрофлоры в бактериостатической концентрации и подавляют образование молочной кислоты.Синтетические среды готовят в день разбавления спермы. Сухие заготовки, выпускаемые промышленностью, готовят в соответствии с ТУ. Санирующие препараты вносят в среды после полного растворения входящих в их состав компонентов, а затем добавляют глицерин, желток куриного яйца и тщательно перемешивают до получения однородной жидкости. Яйца перед использованием моют, протирают тампоном, смоченным 700 спиртом. Подготовленный желток без примеси белка вносят в колбу с синтетической средой. Среда должна быть использована в течение 3-4 часов с момента её приготовления. Во время разбавления спермы среду держат в водяной бане или термостате с целью поддержания необходимой температуры тела.

При разбавлении всегда разбавитель небольшими порциями добавляют к сперме, а не наоборот.Широкое применение нашел метод замораживания и длительного хранения спермы быков в жидком азоте (-196°). Замороженную сперму можно доставлять в хозяйства 1—2 раза в год и использовать ее по мере надобности. Один раз в месяц сосуды, в которых содержится сперма, необходимо пополнять жидким азотом. На племпредприятиях (станциях) по искусственному осеменению сельскохозяйственных животных сперму замораживают при помощи специального оборудования (приборов, аппаратов и т. д.) и хранят в стационарных емкостях, находящихся в хранилищах станций (филиалов). Отсюда ее отправляют в обслуживаемые хозяйства.

Для замораживания спермы на племпредприятиях (станциях) применяют следующие методы: Метод двухмоментного разбавления и трехступенчатого режима замораживания спермы быков при помощи специальных аппаратов (АХК-4, ПЗСС и др.). К замораживанию допускают сперму с подвижностью спермиев не ниже 8 баллов и их концентрацией не менее 0,8 млрд. в 1 мл. Затем сперму разбавляют глюкозо-цитратно-желточной средой (35—37°) двухмоментно: сначала без глиперина, а спустя 4 ч после охлаждения к разбавленной сперме путем подслаивания добавляют такую же среду, имеющую температуру плюс 2—5° и содержащую 16% глицерина. Сперму в глицеринизированной среде выдерживают в бытовом холодильнике 6—12 ч при температуре 2—5°. После эквилибрации (уравновешивания) проверяют подвижность спермиев (она должна быть не ниже 7 баллов), расфасовывают в стеклянные или полиэтиленовые ампулы по 1—1,2 мл. Ампулы запаивают и вкладывают в емкости, которые помещают в аппараты для замораживания. Замораживают сперму по трехступенчатому режиму со следующей скоростью: от 0 до 15° по 0,5° в 1 мин, от 15 до 50° по 2—3° в 1 мин и от 50 до 80° по 5—7° в 1 мин, после чего емкости (канистры) переносят в жидкий азот для хранения.