93. Идентификация возбудителей колибактериоза и сальмонеллёзов.

Тест Бикена. Он пригоден для идентификации E.coli, синтезирующих ТЛ-энтеротоксин. Для постановки теста испытуемые изоляты E.coli выращивают на обычной питательной среде и затем в форме бляшек наносят на специальную агаровую среду Бикена, разлитую в чашки Петри. Агаровая среда состоит из 2 г гидролизата казеина, 1 г дрожжевого экстракта, 0,25 г NaCl, 1,5 г К2НРО4, 0,5 г глюкозы, 0,05 мл смеси микроэлементов и дистиллированной воды до 100 мл. Величину рН среды доводят до 7,5. В состав смеси микроэлементов входит 5 г MgSO-i, 2 г СаСЬ'бНгО, 0,5 г FeCb и 100 мл дистиллированной воды. Для усиления продукции ТЛ-энтеротоксина изолятами E.coli в чашки Петри после остывания питательной среды до 50-60°С вносят поО,5 мл раствора линкомицина (концентрация линкомицина в растворе - 2,7 мг/мл).

Идентифицируемые изоляты E.coli наносят в чашки Петри со средой Бикена по кругу на расстоянии около 4 мм от центра чашки и инкубируют при 37°С в течение 48 ч. Затем в центре чашки Петри в питательном агаре делают лунку, а выросшие в ней 4-5 бактериальных колонии покрывают бумажными дисками, пропитанными полимиксином В (500ЕД/диск), способствующим выходу ТЛ-энтсротоксина из бактериальных клеток, и снова инкубируют при 37ºС в течение 5-6 ч. После этого в лунку вносят 20 мкгсыворотки с антителами против ТЛ-энтеротоксина E.coli.

Учет результатов проводят через 24 и 48 ч после внесения в лунку специфической иммунной сыворотки. Если изоляты E.coli продуцируют ТЛ-энтеротоксин, то между исследуемыми бактериальными колониями и лункой со специфической сывороткой образуется четкая линия преципитации.

Другие тесты для идентификации изолятов E.coli, синтезирующих ТЛ-энтеротоксин: твердофазный радиоиммунологический метод, ганг-лиозид-иммуноферментный метод с применением иммуносорбента, пробы на культурах клеток опухоли надпочечника мышей (клеточная линия Y) и яичника китайского хомячка.

При определении вида сальмонелл сначала ставится реакция агглютинации с поливалентной сывороткой, дающей возможность определить принадлежность выделенной культуры к роду сальмонелл, затем определяется группа с помощью отдельных групповых адсорбированных сывороток, а затем и вид сальмонелл — в реакции агглютинации с монореценторными специфическими Н-сыворотками.

Исследование сыворотки больных может проводиться в первые дни заболевания обнаружением неполных антител с помощью реакции Кумбса и с 4—5-го дня — полных антител в реакции Видаля, которую ставят повторно через несколько дней с целью определения нарастания титра антител. Однако наряду с преимуществами постановки реакции Видаля (простота реакции, получение быстрого ответа, возможность ретроспективного диагноза) метод имеет и недостатки: не является ранним, антитела могут быть и у переболевшего (анамнестическая реакция) и у привитого («прививочный Видаль»). Нужно учитывать и тот факт, что Н-антитела сохраняются длительно, а О-антитела исчезают из крови переболевшего довольно быстро.

С целью обнаружения антител в сыворотках крови больных брюшным тифом применяется реакция непрямой гемагглютинации (РНГА).

Большую трудность представляет выявление бактерионосителей. Бактериологические исследования, носящие массовый характер при периодических обследованиях работников пищевых предприятий и детских учреждений, занимают много времени и не всегда результативны, так как даже от заведомо известного носителя трудно бывает выделить микроб. В настоящее время для обнаружения носителя широко используют серологический метод—реакцию Vi-гемагглютинации с сывороткой носителя. Vi-антиген по химической природе является полисахаридом, его извлекают в чистом виде и адсорбируют на поверхности эритроцитов 0 группы крови человека. Сыворотка носителя вызывает реакцию гемагглютинации при взаимодействии с Vi-эритроцитарным диагностикумом. У носителя реакция положительна в небольших разведениях. Выявленные реакцией Vi-гемагглютинации носители обследуются бактериологическими методами (выделение культуры из испражнений, дуоденального содержимого).

При необходимости для эпидемиологической расшифровки заболеваний проводится дифференцирование выделенных культур с помощью Vi-бактериофагов, обладающих строгой типоспецифичностью. При фаготипировании используется 78 типов Vi-бактериофагов, с помощью которых выявляется такое же количество фаготипов этих бактерий. Метод фаготипирования дает возможность устанавливать или исключать предполагаемые источники инфекции, прослеживать эпидемиологические связи, отличать местные случаи от «привозных» и спорадические заболевания от эпидемических.