Инозинмонофосфат
Синтетаза |
+асп |
ДГ (НАД+) |
|
+ГТФ |
|
Аденилоянтарная кислота |
Ксантиловая кислота |
|
Лиаза |
фумарат |
+глн |
|
|
+АТФ Синтетаза |
АМФ |
ГМФ |
|
АДФ |
|
ГДФ |
АТФ |
|
ГТФ |
Рис. 19.3. De novo синтез пуриновых нуклеотидов
Ключевой фермент синтеза пуринов: амидотрансфераза. Регуляция:
1)аллостерическая: избыток конечных продуктов (АТФ, ГТФ) ингибирует ключевой фермент; избыток пиримидиновых нуклеотидов его активирует;
2)ГМФ ингибирует образование ксантиловой кислоты, а АМФ — аденилоянтарной;
3)перекрестная: для синтеза АМФ требуется ГТФ, а для синтеза ГМФ требуется
АТФ.
Наиболее распространенной формой нарушения обмена пуринов является подагра. Основная причина — повышение уровня мочевой кислоты в крови (гиперурикемия) и ее отложение в суставах и почках. Причины:
а) избыточный синтез пуриновых нуклеотидов (нечувствительность ферментов к регуляторам);
б) дефект ферментов реутилизации пуринов; в) патология почек (недостаточное выведение). Способствует избыточное потребление пу-
ринов с пищей. В лечении подагры используется аллопуринол — ингибитор ксантиноксидазы.
De novo синтез пиримидиновых нуклеотидов
В отличие от пуринов, при биосинтезе пиримидинов de novo (рис. 19.4) вначале образуется пиримидиновое кольцо, а лишь затем к нему присоединяется рибозо-5-фосфат. Источниками атомов для пиримидинового кольца являются глутамин, аспартат и СО2. Синтез начинается с образования карбамоилфосфата:
Глутамин + СО2 + 2 АТФ 
Карбамоилфосфат + Глутамат + 2 АДФ + Фн
Карбамоилфосфатсинтетаза II
В отличие от карбамоилфосфатсинтетазы I, фермент синтеза пиримидинов использует амидный азот глутамина (а не свободный аммиак), локализован в цитоплазме и присутствует во всех органах и тканях.
79
Карбамоилфосфат + Аспартат |
|
Карбамоиласпарагиновая |
|||
|
|
Аспартаткарбамоил- |
к-та |
|
|
|
|
трансфераза |
|
Дигидрооротаза |
|
|
|
|
Дигидрооротовая к-та |
||
|
|
|
|
ДГ(НАД+) |
|
|
|
|
Оротовая к-та |
||
|
|
|
+ФРПФ |
Трансфераза |
|
|
|
Оротидин-5/-мономофосфат |
|||
ДГФК |
метилен-ТГФК |
-СО2 |
Декарбоксилаза |
||
дТМФ |
|
дУМФ |
УМФ |
|
|
|
Тимидилат |
|
|
|
|
дТДФ |
синтаза |
дУДФ |
|
УДФ |
|
дТТФ |
|
|
|
УТФ |
|
|
|
|
+NH2 (Глн) |
ЦТФ-синтетаза |
|
|
|
|
+АТФ |
ЦТФ |
|
Рис. 19.4. De novo синтез пиримидиновых нуклеотидов
Ключевой фермент — аспартаткарбамоилтрансфераза.
Регуляция: избыток пиримидиновых нуклеотидов ингибирует ключевой фермент, а избыток пуриновых — активирует.
Образование дезоксирибонуклеотидов
Образование дезоксирибонуклеотидов, необходимых для биосинтеза ДНК, происходит на уровне нуклеозиддифосфатов (рис. 19.5). С участием специального белка тиоредоксина фермент редуктаза восстанавливает 2/-ОН группу в рибозе и образуется дезоксирибоза. Затем: дНДФ 
дНТФ 
синтез ДНК.
Н2О
Рис. 19.5. Образование дезоксирибонуклеотидов
Тема 20. БИОСИНТЕЗ ДНК, РНК И БЕЛКА
Центральная догма молекулярной биологии отражает поток информации в клетке: ДНК 
РНК 
БЕЛОК
ДНК
80
БИОСИНТЕЗ ДНК
Репликация — процесс удвоения ДНК (синтез ДНК на матрице ДНК) (рис. 20.1). Принципы репликации:
1)комплементарность;
2)антипараллельность;
3)однонаправленность;
4)потребность в праймере (затравке);
5)прерывистость;
6)полуконсервативность.
Первые 3 принципа можно сформули- |
|
|
ровать одной фразой: синтез каждой дочер- |
|
|
ней цепи ДНК идет комплементарно и анти- |
|
|
параллельно матричной цепи и всегда в |
|
|
направлении 5/ |
3/. |
Рис. 20.1. Репликация ДНК |
Ферменты и белки, участвующие в ререпликации (их > 40), объединены в единый комплекс — реплисому.
Хеликаза — раскручивает двойную спираль ДНК в репликационной вилке. Топоизомераза — снимает напряжение, возникающее в репликационной вилке, и
предотвращает обратное скручивание цепей.
Праймаза — синтезирует праймеры. Праймаза является РНК-полимеразой, поэтому образующиеся праймеры представляют собой олигорибонуклеотиды.
ДНК-полимераза — главный фермент процесса. Компоненты, необходимые для еѐ работы: матрица, затравочный олигонуклеотид (праймер), субстраты (активированные нуклеотиды — дАТФ, дГТФ, дЦТФ, дТТФ), ионы магния. ДНК-полимераза катализирует реакцию образования фосфодиэфирной связи:
Для образования фосфодиэфирной связи используется энергия макроэргического субстрата. Большинство ДНК-полимераз обладают способностью исправлять ошибки, допущенные при синтезе, путем отщепления неправильно присоединенного нуклеотида и замены его на нужный.
81
Поскольку цепи ДНК антипараллельны, а |
|
|
синтез идет только от 5/-конца к 3/-концу, одна из |
|
|
дочерних цепей синтезируется прерывисто, обра- |
|
|
зуются фрагменты Оказаки (рис. 20.2). Впослед- |
|
|
ствии праймеры (участки РНК) из дочерней цепи |
|
|
удаляются, на их месте достраивается ДНК. |
|
|
ДНК-лигаза — сшивает фрагменты, обра- |
|
|
зующиеся после удаления праймеров и достройки |
|
|
ДНК. |
|
|
После окончания репликации ДНК под- |
|
|
вергается метилированию (защита от нуклеаз). |
|
|
У прокариот есть три ДНК-полимеразы |
|
|
— ДНК-полимераза III (непосредственно ведет |
|
|
репликацию), ДНК-полимераза II (участвует в |
|
|
репарации), ДНК-полимераза I (отвечает за уда- |
|
|
ление праймеров и достройку на их месте ДНК). |
|
|
У эукариот одновременно с репликацией |
|
|
идет синтез гистонов. Ферменты: ДНК-полиме- |
|
|
раза α (синтезирует праймеры), β (репаративная |
|
|
и достраивает ДНК на месте удаленнных прай- |
Рис. 20.2. Репликативная вилка |
|
меров), γ (митохондриальная), δ (синтезирует |
||
|
лидирующую цепь), ε (синтезирует отстающую цепь). На концах линейных хромосом эукариот имеются теломеры (неинформативные повторяющиеся последовательности нуклеотидов). В соматических клетках с каждым актом репликации теломеры укорачиваются из-за невозможности достроить ДНК на месте 5/-праймера. Это своеобразные «молекулярные часы» клетки.
БИОСИНТЕЗ РНК
Транскрипция — биосинтез РНК на матрице ДНК. В отличие от репликации, транскрипции подвергается не вся молекула ДНК. Единицей транскрипции является оперон (у прокариот) (рис. 20.3) или транскриптон (у эукариот).
Рис. 20.3. Строение оперона
Фермент транскрипции — РНК-полимераза — не требует праймера, синтезирует РНК в направлении от 5/-конца к 3/-концу, комплементарно и антипараллельно матричной цепи ДНК. Субстратами для синтеза РНК являются активированные нуклеотиды (АТФ, ГТФ, ЦТФ, УТФ). Структура РНК-полимеразы прокариот и функции ее субъединиц представлены в таблице 20.1.
Инициация транскрипции: холофермент РНК-полимеразы связывается с матрицей в области промотора, вызывает локальное плавление ДНК и начинает синтез РНК. Одна из субъединиц фермента (ζ-фактор) отвечает только за узнавание промотора и после инициации синтеза отсоединяется от других субъединиц.
|
|
Таблица 20.1 |
|
|
Структура РНК-полимеразы прокариот |
||
|
|
|
|
Субъединица |
К-во |
Функция |
|
α |
2 |
Взаимодействие с регуляторными белками, инициация синтеза |
|
β |
1 |
Образование фосфодиэфирных связей (инициация и элонгация) |
|
β/ |
1 |
Связь с ДНК-матрицей |
|
σ |
1 |
Узнавание промотора |
|
|
|
|
|
82
Элонгация: наращивание цепи РНК осуществляет коровая полимераза.
Терминация: в гене имеются терминирующие последовательности; белковый ρ (ро)-фактор вызывает отсоединение РНКполимеразы от матрицы. Образовавшаяся молекула РНК у прокариот содержит информацию о нескольких белках (полицистронный транскрипт) и сразу же подвергается трансляции.
В ядре у эукариот имеется 3 типа РНК полимераз (I — синтезирует рРНК, II — для иРНК, III — для тРНК). Все виды РНК синтезируются в виде предшественников и нуждаются в процессинге (созревании). После процессинга РНК транспортируется из ядра в цитоплазму.
Созревание иРНК (рис. 20.4). Во время синтеза пре-иРНК происходит модификация концов молекулы — кэпирование на 5/-конце и полиаденилирование на 3/- конце. Кэп («шапочка» из трифосфометилгуанозина) и полиадениловый «хвост» защищают иРНК от действия нуклеаз. Следую-
щим этапом созревания РНК является сплайсинг — удаление интронов (неинформативных вставок) и сшивание экзонов (информативных участков). В сплайсинге участвует малая ядерная РНК, которая содержит последовательности, комплементарные интронам.
Созревание тРНК. От предшественника тРНК отщепляются дополнительные олигонуклеотиды на 3’- и 5’-концах, вырезаются интроны, достраивается акцепторный участок (ЦЦА), формируется петля антикодона, проводится модификация нуклеотидов (образуются псевдоуридин, дигидроуридин и т. п.).
Созревание рРНК. рРНК синтезируется в виде крупных предшественников, из которых затем удаляются интроны, молекулы разрезаются на фрагменты разного размера, метилируются, объединяются с белками (образуются малая и большая субъединицы рибосом).
Ингибиторы транскрипции:
актиномицинД — препятствует раскручиванию ДНК и продвижению РНК-поли- меразы;
рифампицин — ингибирует РНК-полимеразу прокариот на этапе инициации; α-аманитин (токсин бледной поганки) — ингибирует РНК полимеразу II эукариот.
БИОСИНТЕЗ БЕЛКА
Трансляция — биосинтез белка на матрице иРНК. Участники трансляции: иРНК, рибосомы, белковые факторы инициации, элонгации и терминации, ГТФ, аминоацил-тРНК.
Последовательность нуклеотидов иРНК определяет последовательность включения аминокислот в синтезируемый белок. При этом одну аминокислоту кодирует последовательность из трех нуклеотидов (триплет, кодон). Существует 43 = 64 кодона (3 из них не кодируют аминокислоты — бессмысленные или нонсенс-кодоны). Общий набор кодонов составляет генетический код. Свойства генетического кода: триплетность; специфичность (1 кодон —
83
1 аминокислота); вырожденность (или избыточность, 61 кодон для 20 аминокислот); однонаправленность; неперекрывае-мость; отсутствие знаков препинания; универсальность.
Роль тРНК в биосинтезе белка: 1) транспорт аминокислот на рибосомы; 2) адапторная функция, т. е. тРНК является посредником при переводе с языка нуклеиновых кислот (последовательность нуклеотидов) на язык белков (последовательность аминокислот). Адапторная функция осуществляется благодаря наличию в структуре тРНК акцепторного участка для аминокислоты и антикодона для связи с иРНК.
Рекогниция — процесс узнавания аминокислотой своей тРНК. Специфичность связывания обеспечивает фермент АРСаза (аминоацил-тРНК-синтетаза), который катализирует 2 реакции:
|
Собственно трансляция проходит в три |
||
|
этапа: инициация, элонгация и терминация. |
||
|
Инициация: иРНК поступает на малую |
||
|
субъединицу рибосомы 5/-концом, к иниции- |
||
|
рующему кодону (АУГ) присоединяется первая |
||
|
аминоацил-тРНК (мет-тРНК), и комплекс «за- |
||
|
крывается» большой субъединицей рибосомы. |
||
|
В образовании |
инициирующего комплекса |
|
|
(рис. 20.5) участвуют белковые факторы ини- |
||
|
циации (IF-1, 2, 3) и используется энергия ГТФ. |
||
|
Элонгация: в аминоацильный участок |
||
Рис. 20. 5. Инициирующий комплекс |
поступает следующая аминоацил-тРНК. Фер- |
||
мент пептидилтрансфераза образует пептидную |
|||
|
|||
связь между активированной карбоксильной группой |
|
||
первой аминокислоты и аминогруппой второй амино- |
|
||
кислоты (рис. 20.6). Образованный при этом дипептид |
|
||
«зависает» в аминоацильном центре. Затем с помощью |
|
||
транслоказы и энергии ГТФ рибосома перемещается по |
|
||
иРНК на один кодон, аминоацильный участок освобож- |
|
||
дается, туда поступает новая аминокислота. |
|
|
|
Терминация наступает тогда, когда в аминоа- |
|
||
цильном участке оказывается один из терминирующих |
|
||
(нонсенс) кодонов. К таким кодонам присоединяются |
|
||
специальные белки (рилизинг-факторы), которые вы- |
|
||
свобождают синтезированный пептид и вызывают дис- |
|
||
социацию субъединиц рибосомы. |
|
|
|
Многие белки синтезируются в неактивном ви- |
|
||
де (в виде предшественников) и после схождения с ри- |
|
||
босом подвергаются постсинтетической модификации. |
|
||
Виды модификации белков: |
|
|
|
1) частичный протеолиз (удаление N-концевого |
|
||
мет и сигнального пептида, образование активных форм |
Рис. 20.6. Образование |
||
ферментов и гормонов); |
|
пептидной связи |
|
|
|
||
2) объединение протомеров и формирование четвертичной структуры белков;
84
3)образование внутри- и межцепочечных S–S связей;
4)ковалентное присоединение кофакторов к ферментам (пиридоксальфосфат, биотин);
5)гликозилирование (гормоны, рецепторы);
6)модификация остатков аминокислот:
гидроксилирование про и лиз (коллаген); йодирование тир (тиреоидные гормоны); карбоксилирование глу (факторы свертывания крови);
7)фосфорилирование (казеин молока, регуляция активности ферментов);
8)ацетилирование (гистоны);
9)пренилирование (G-белки).
Регуляция биосинтеза белка в клетке
Синтез белка в клетке можно регулировать на этапе транскрипции, созревания иРНК, транспорта ее из ядра в цитоплазму, изменяя стабильность иРНК, в процессе трансляции и посттрансляционной модификации. Регуляция на самых ранних этапах (на уровне экспрессии генов) является наиболее выгодной и потому широко используется.
Примером регуляции экспрессии генов является работа lac-оперона у E. coli. Lac-опе- рон содержит 3 структурных гена ферментов, участвующих в метаболизме лактозы. В отсутствие лактозы оперон заблокирован белком репрессором (рис. 20.7).
Рис. 20.7. Работа lac-оперона в отсутствие лактозы
В присутствии индуктора (лактозы) репрессор меняет свою конформацию и отсоединяется от ДНК. Однако если в этот момент в среде имеется глюкоза (более доступный источник энергии), транскрипция не идет. В том случае, если глюкоза отсутствует, в клетке увеличивается уровень цАМФ (сигнал «голода») и цАМФ в комплексе со специальным белком (catabolite activator protein) связывается с промотором. Только в присутствии этого белка РНК-полимераза может образовать прочную связь с промотором и начать транскрипцию
(рис. 20.8).
Белковые факторы, которые способствуют связыванию РНК-полимеразы с промотором, называются факторами транскрипции.
Рис. 20.8. Работа lac-оперона при наличии лактозы и в отсутствие глюкозы
85
Регуляторная часть генов эукариот устроена более сложно. Имеются энхансеры (элементы, усиливающие транскрипцию), сайленсеры (ослабляющие), адапторные элементы. Факторы транскрипции могут связываться с любым из этих элементов, тем самым регулировать функции генов. В качестве индукторов биосинтеза белка на генетическом уровне могут выступать не только субстраты (лактоза для лактазы), но и стероидные гормоны, витамин Д, тиреоидные гормоны, ионы металлов и др.
Тема 21. СОВРЕМЕННЫЕ МЕТОДЫ МОЛЕКУЛЯРНОЙ БИОЛОГИИ
Основными инструментами в работе молекулярного биолога с нуклеиновыми кислотами являются ферменты. Используют рестриктазы (эндонуклеазы, которые узнают специфические последовательности в ДНК и разрезают молекулу ДНК в этом месте), ДНК-
полимеразы, ДНК-лигазы, экзонуклеазы и др.
В настоящее время в основе большинства методов ДНК-диагностики лежит полимеразная цепная реакция (ПЦР). Она позволяет быстро получить большое количество копий молекул ДНК (или их фрагментов), достаточное для их дальнейшего анализа (рис. 21.1).
Этапы проведения:
1.Нагревание до 90 С (денатурация ДНК).
2.Добавление праймера и охла-
ждение до 55 С (присоединение или «отжиг» праймера).
3. Добавление нуклеотидов (субстратов для синтеза) и ДНК-полимеразы, которая проводит удвоение ДНК; затем цикл повторяется.
Метод широко используется для диагностики инфекционных заболеваний (туберкулез, хламидиоз, цитомегаловирусная инфекция, СПИД и др.). ПЦР позволяет обнаружить возбудителя в биологическом материале даже тогда, когда другие методы оказываются неэффективны. Второе направление использования
метода ПЦР — генетическое тестирова- ние (обнаружение мутаций в генах и диа- Рис. 21.1. Полимеразная цепная реакция (ПЦР)
гностика наследственной патологии).
Клонирование — способ получения большой популяции идентичных молекул, клеток, организмов — потомков одного предка.
Проводятся эксперименты по клонированию стволовых клеток человека и их использованию в стоматологической практике (заместительная клеточная терапия).
Для клонирования отдельных генов используются технологии рекомбинантных ДНК: нужный ген на специальном носителе вводят в бактериальную клетку. В процессе размножения бактерий получают огромное число копий гена.
Вектор — носитель (плазмида или бактериофаг), в который может быть введена чужеродная ДНК с целью клонирования.
Плазмида — небольшая кольцевидная двухцепочечная ДНК, которая реплицируется независимо от ДНК хозяина.
86
Принципиальный подход к клонированию генов: в плазмиде создают дефект (разрез) с помощью рестриктазы. С помощью этой же рестриктазы вырезают участок ДНК с нужным геном. Благодаря «липким концам» происходит включение чужеродной ДНК в вектор, ДНК-лигаза восстанавливает целостность плазмиды и образованная гибридная молекула помещается в бактериальную клетку (рис. 21.2).
Рис. 21.2. Генная инженерия. Полу-
чение рекомбинантной ДНК
Экспрессия гена, закодированного в чужеродной ДНК, приводит к образованию бактериями нужного белка, его можно выделить и использовать. Технологии рекомбинантных ДНК позволяют получать для медицинской практики вакцины, инсулин, соматотропный гормон, интерфероны, эритропоэтин, белки эмали и др.
Тема 22. ГОРМОНЫ. ОБЩИЙ МЕХАНИЗМ ДЕЙСТВИЯ ГОРМОНОВ
Гормоны — это класс регуляторных молекул, синтезируемых специальными клетками.
Особенности биологического действия:
1)низкая концентрация в крови (10–6–10–12 М);
2)обязательная связь с рецептором — (R), включающим каскадный механизм усиления гормонального сигнала;
3)изменение скорости синтеза ферментов или их активности;
4)регуляция секреции по принципу прямой и (или) обратной связи.
Взаимодействие гормона и рецептора характеризуется высокой специфичностью, которая обеспечивается комплементарностью между структурой гормона и активного центра рецептора. В результате эффекта кооперативности, возникающего при взаимодействии гормона и рецептора, существенно изменяется активность последнего — это есть феномен амплификации (усиления) гормонального сигнала. Механизм амплификации включает участие специальных ферментов и молекул — вторичных посредников. Гормональный сигнал способен «выключаться» в результате инактивирования рецептора путѐм фосфорилирования, либо удаления его с поверхности клетки (эндоцитоз) и т. д. Множество разных сигналов, воспринимаемых клеткой, суммируется в один определѐнный ответ.
Клеточные рецепторы в зависимости от их локализации делятся на 2 большие группы: 1) плазматической мембраны; 2) внутриклеточные.
Рецепторы плазматической мембраны клеток обеспечивают узнавание, связывание
ипередачу регуляторного сигнала внутрь клетки. Среди них различают:
1.7-ТМС-(R) — это интегральные мембранные белки с семью трансмембранными спиральными сегментами, соединенными гидрофильными внеклеточными и внутриклеточными петлями. Внутриклеточные петли содержат центры связывания G-белка.
87
2.1-TMС-(R) — это интегральные мембранные белки с одним трансмембранным сегментом и глобулярными доменами на вне- и внутриклеточной поверхностях мембраны. Внеклеточный домен содержит участок узнавания и связывания гормона, а внутриклеточный обладает каталитической активностью. Когда он активируется гормоном, его внутриклеточный домен катализирует образование внутриклеточных вторичных посредников.
3.Каналообразующие рецепторы — состоят из белковых субъединиц, каждая из которых содержит несколько трансмембранных сегментов.
Внутриклеточные рецепторы расположены в цитозоле или ядре клетки. После связывания с гормоном они изменяют скорость транскрипции и трансляции определѐнных генов.
По химической природе гормоны делят на:
1)пептиды (глюкагон, кортикотропин) и белки (сложные белки — тиреотропин, гонадотропины; простые белки — соматотропин, инсулин);
2)производные аминокислот (адреналин, серотонин, тироксин);
3)стероиды (альдостерон, кортизол, половые гормоны, витамин Д3) и ретиноевая
кислота;
4)производные липидов (эйкозаноиды).
МЕХАНИЗМ ДЕЙСТВИЯ ГОРМОНОВ, ВЗАИМОДЕЙСТВУЮЩИХ С 7-ТМС-РЕЦЕПТОРАМИ
Первый этап действия гормона заключается во взаимодействии гормона с 7-ТМС-(R) (к ним относятся α- и β-адренергические рецепторы, рецепторы гистамина, серотонина, соматостатина, гликопротеиновых гормонов, глюкагона, паратирина, кальцитонина, гормонов гипоталамуса).
Второй участник передачи гормонального сигнала — G-белки. Обнаружены:
1)большие, состоящие из нескольких субъединиц G-белки (связаны с мембранами);
2)низкомолекулярные, состоящие из одной полипептидной цепи (цитозольные).
Все G-белки обладают ГТФазной активностью, и их конформация зависит от того, связаны ли они в данный момент с ГДФ или ГТФ. Мембранный G-белок состоит из 3 субъ-
единиц: α, β и γ (рис. 22.1).
В неактивном состоянии три субъединицы соединены вместе, и α-субъединица связана с ГДФ. После присоединения гормона к 7-ТМС-(R) и взаимодействия гормонрецепторного комплекса с G-белком в последнем происходит замена ГДФ на ГТФ, вследствие чего G-белок диссоциирует с образованием свободной α-субъединицы и димера субъединиц β, γ. Затем α-субъединица перемещается по мембране и взаимодействует с мембраносвязанными ферментами (аденилатциклазой или фосфолипазой С), катализирующими образование низкомолекулярных вторичных посредников. Продол-
жительность эффекта G-белка определяется ГТФазной активностью его α-субъединицы: после гидролиза ГТФ до ГДФ действие субъединицы прекращается и G-белок возвращается в исходное тримерное состоя
Аденилатциклаза. Различные типы аденилатциклаз реагируют с α-субъединицами, выполняющими разные функции: если связывание осуществляется с αs-субъединицей G-белка, то фермент активируется, если с αI-cубъединицей, то ингибируется. Аденилатциклаза катализирует образование цАМФ из АТФ. Уровень цАМФ в клетках очень низок, но при активировании аденилатциклазы он может быстро и значительно увеличиваться. Однако это повышение кратковременно. Распад цАМФ катализируется цАМФ-фосфодиэстеразами (ФДЭ), гидролизующими фосфодиэфирную связь в молекуле цАМФ. ФДЭ — регули-
руемый фермент (его ингибирует кофеин, что приводит к повышению уровня цАМФ).
88