Микробиологические исследования при раневой анаэробной инфекции. Материал исследования.

Визуальный анализ	Микроскопическое исследование	Микробиологическое исследование			Биопроба
Вид, запах, цвет, консистенция	Окраска мазков: - из материала от больного по Граму; Бурри- Гинсу - из объектов внешней среды по Ожешко	Ускоренное: Лецитиназная проба на среде ЖАС	Посевы на среды: - Китт-Тароцци - Вильсон-Блера - молоко обезжиренное	Классическое (по схеме для анаэробов)	Выделение чистой культуры Заражение морских свинок	Определение токсигенности: реакция нейтрализации на белых мышах

Приложение № 3.

Лабораторные исследования при столбняке.

Микроскопический метод	Микробиологическое исследование	Биопроба-основной диагностический метод
Окраска по Граму и по Ожешко. Ориентировочный диагноз.	- (у больных проводят редко, т.к. клиническая картина весьма типична) Накопление микробов посев на среды Китт-Тароцци № 1, № 2 – гретая + +80^0С 20 мин. Через 2-4-6-10 дней – мазки, наличие типичных форм Изучение роста на среде накопления. Посев на кровяной МПА, +37^0С 24 часа (пред посевом половину чашки следует смочить противостолбнячной антитоксической сывороткой, высушить). – изучение изолированной колонии Предварительный диагноз. отсев на среду Китт-Тароцци (накопление чистой культуры). оценка опыта нейтрализации Изучение чистой культуры, идентификация микробного вида.	1. Материал растереть в ступке с песком, добавить физраствор экстрагирование экзотоксина в физрастворе 1 час фильтровать через ватно-марлевый фильтр; затем – Зейтца ½ фильтрата смешать с антитоксической сывороткой (1:0,5 мл) в разведении 400 АЕ в 1 мл. а) двум мышам в/м вводят по 1 мл фильтрата; б) двум- по 1,5 мл фильтрата с антитоксической сывороткой. Симптомы столбняка (инкубация до 5 дней) – в группе а) ригидность хвоста, взъерошенность шерсти, паралич мышц задних конечностей и далее всех групп мышц. б) мыши здоровы.

Экспресс - методы диагностики:

Лецитиназная проба: для быстрого обнаружения и серологической идентификации α – токсина клостридий в раневом отделяемом определяют его лецитиназную активность в реакции нейтрализации (РН) с моновалентными антисыворотками против токсинов клостридий разных видов. С этой целью исследуемый материал помещают в пробирки с раствором лецитина и добавляют антисыворотки. присутствие лецитиназы в раневом отделяемом выявляется помутнением в пробирке. При нейтрализации лецитиназной активности соответствующей антисывороткой жидкость остается прозрачной.

Биохимические и молекулярно-биологические исследования. Обнаружение в исследуемом материале ДНК возбудителя с помощью ПЦР. Обнаружение в материале от больного специфических метаболитов клостридий, включая летучие жирные кислоты, спирты с помощьюГЖХ (газожидкостной хроматографии).

Обнаружение ботулотоксина в исследуемом материале:постановка реакции Бойдена –РНГАс эритроцитами, нагруженными моновалентными антитоксическими противоботулиническими сыворотками типов А, В, Е;ИФА.

Обнаружение столбнячного токсина в исследуемом материале: ИФА. Метод позволяет получить ответ в течение нескольких часов и обеспечивает своевременную диагностику заболевания.