37Пробы на совместимость при переливании крови.

Определение группы крови с помощью моноклональных антител (цоликлонов)

нанести цоликлоны анти-A и анти-B на белый планшет по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями; рядом нанести по одной малой капле (0,01 мл) исследуемой крови;перемешать и наблюдать за реакцией в течение 2-3 мин.

Оценка результатов:

отсутствие агглютинации с обеими цоликлонами - кровь I(0) группы;наличие агглютинации с цоликлоном анти-А и отсутствие с анти-B -кровь A(II) группы;наличие агглютинации с цоликлоном анти-B и отсутствие с анти-A -кровь B(III) группы;агглютинация с обеими цоликлонами - кровь AB(IV) группы.

определение резус-фактора экспресс-методом В пробирку помещают 1 каплю сыворотки, добавляют 1 каплю исследуемых эритроцитов и после 3-минутного покачивания заливают 3-5 мл изотонического раствора хлорида натрия, трижды переворачивают пробирку и определяют результат в отраженном свете. Наличие агглютинации свидетельствует о наличии Rh-антигена.  определение резус-фактора желатиновым экспресс-методом?  Широко применяется также желатиновый экспресс-метод, основанный на добавлении к крови 1 капли 10 % раствора желатина и 10-минутной инкубации пробирок при +37 'С и добавлении теплого изотонического раствора хлорида натрия; производят перемешивание содержимого пробирки. Желатин способствует исчезновению неспецифической агглютинации. 

На этом же принципе основан метод определения Rh с папаином. 

Определение резус-фактора с помощью моноклонального реагента (Цоликлон анти-D Супер)

На тарелку наносят большую каплю реагента (около 0,1 мл). Рядом помещают маленькую каплю (0,01-0,05 мл) исследуемой крови и смешивают кровь с реагентом. Реакция агглютинации начинает развиваться через 10-15 сек, четко выраженная агглютинация наступает через 30-60 сек. (резус положительная, нет агглютинации – резус отрицательная). Результаты реакции учитывают через 3 мин.

Тарелку после смешивания реагента с кровью рекомендуется покачивать не сразу, а через 20-30 сек, что позволяет за это время развиться более полной крупнолепестковой агглютинации.

Стандартные сыворотки для определения группы крови (источники, требования, титр).

На тарелку или предметное стекло наносятся пипетками (разными!) по 1-й крупной капле сыворотки О(I), А(II), В(III). Заметив время, чистой стеклянной палочкой или чистым углом предметного стекла капли сывороток соединяются с каплями крови. Определение длится 5 минут, покачивая тарелку, затем к каждой смеси капель добавляют по 1-й капле физраствора и оценивают результаты. Лучше, если сыворотка будет 2-х различных серий. Результаты групп крови должны совпадать в обеих сериях сыворотки.

Оценка результатов изогемагглютинации:

при работе с 3-я сыворотками групп О(I), А(II), В(III) возможны 4 комбинации реакций:

5. если все 3 сыворотки дали отрицательную реакцию, то есть смесь равномерно окрашена в розовый цвет - это О(I) группа крови;

6. если отрицательную реакцию дала только сыворотка группы А(II), а сыворотки О(I) и В(III) дали положительную реакцию, то есть появились зерна - это А(II) группа крови;

7. сыворотка группы В(II) дала отрицательную реакцию, а сыворотки группы О(I) и А(II) дали положительную - это В(III) группа крови.

8. все 3 сыворотки дали положительные реакции - испытуемая кровь АВ(IV) группы. В этом случае проводится исследование с сывороткой АВ(IV) группы.