Основы современной лабораторной диагностики.

Микробиологические методы.

Проводится прямая бактериоскопия мазков из диагностического материала с использованием способов обогащения (осадок и флотация) с окраской мазков по методу Циля-Нильсена (чувствительность микроскопии при окраске мазков по этому методу составляет 100 000 бактериальных клеток в 1 мл материала) или флюорохромами (люминесцентная микроскопия). Микроскопию проводят на люминесцентном микроскопе. Люминесцентная микроскопия при меньшей затрате рабочего времени позволяет дополнительно выявить микобактерий на 17% больше по сравнению с обычной микроскопией и на 8% по сравнению с использованием метода флотации.

Культуральный метод. Сущность метода заключается в получении культуральной массы микобактерий путем засева обработанного диагно-стического материала на питательные среды, предназначенные для роста микобактерий.

Радиометрический метод с использованием аппарата ВАСТЕС-480. Метод основан на регистрации СО₂, выделяемого жизнеспособными микобактериями. Применяется для выявления микобактерий и определения их лекарственной устойчивости.

Биологический метод применяется в лабораториях научно-исследовательских институтов. По своей чувствительности метод превосходит культуральный. При наличии до 1-10 живых микобактерий в 1 мл диагностического материала возможно развитие туберкулезной инфекции у лабораторного животного и последующее выделение из его возбудителя. Наиболее чувствительными животными к туберкулезу являются морские свинки.

Аллергическая проба с туберкулином. Туберкулинодиагностика как специфический диагностический тест применяется при массовых обследованиях населения на туберкулез, а также в клинической практике для диагностики туберкулеза. При массовых обследованиях на туберкулез туберкулинодиагностика применяется для своевременного выявления больных, инфицированных туберкулезом, лиц с повышенным риском заболевания (впервые инфицировавшихся, с гиперэргическими и усиливающимися реакциями на туберкулин), для отбора контингентов, подлежащих ревакцинации против туберкулеза, для отбора контингентов, подлежащих ревакцинации против туберкулеза, для определения инфицированности и риска заражения населения с целью анализа эпидемиологической ситуации по туберкулезу. Для этих целей используется единая внутрикожная туберкулиновая проба Манту с 2 туберкулиновыми единицами (2 ТЕ) очищенного туберкулина (ППД-Л) в стандартном разведении.

В целях клинической диагностики в противотуберкулезных стационар диспансерах кроме пробы Манту с 2 ТЕ очищенного туберкулина в стандарт разведении можно применять пробу Манту с различными дозами туберкулина, другие методы исследования чувствительности к туберкулину (градуированная кожная проба, подкожная проба Коха, определение туберкулинового титра эозинофильно-туберкулиновая, гемо- и белково-туберкулиновая, иммунотуберкулиновые пробы и др.). С этой целью используют сухой очищенный туберкулин и альттуберкулин (AT).

В дифференциально-диагностических случаях также в условиях диспансера или стационара при наличии отрицательной пробы Манту с 2 ТЕ ППД-Л можно ставить пробу Манту со 100 ТЕ ППД-Л или в разведении 1:100 AT. При отрицательном результате последней пробы в большинстве случаев можно считать организм свободным от туберкулезной инфекции.

Рентгенологическое обследование.

Флюорография. Флюорография была и пока остается в России традиционным методом выявления туберкулеза. Флюрографическому обследованию подлежат категории граждан, перечисленных в Методических указаниях Минздравмедпрома РФ, Госкомсанэпиднадзора РФ от| 22.02.1996 № 95/42 «Организация дифференцированного флюорографического обследования населения с целью выявления заболеваний органов грудной полости». Предпочтительно использовать цифровые флюорографы, обеспечивающие хорошее качество обследования при минимальной дозе облучения и не нуждающихся в рентгеновской пленке и проявочных работах.

Рентгенография. Рентгенография органов грудной клетки – важный метод диагностики туберкулёза. Её проводят, если флюорография или другие диагностические исследования выявили изменения, похожие на туберкулез. Обычно выполняют прямую обзорную рентгенографию, боковую рентгенографию со стороны поражения и продольную томографию. По показаниям может быть выполнена компьютерная томография. В соответствии с приложением №1 приказа МЗ РФ от 14.03.96 № 90, при предварительном медицинском осмотре обязательно проводится рентгенограмма органов грудной клетки в прямой проекции, при периодическом осмотре - 1 раз в 3 года.

Бронхоскопия - высокоинформативный метод диагностики туберкулёза бронхов, используется также в сложных случаях для получения биопсии из очага поражения в легком для лабораторных микробиологических и морфологических исследований.

Молекулярно-генетические методы. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) или ДНК-полимеразный метод.

ПЦР - позволяет обнаруживать в исследуемом материале буквально считанные микобактерии (10-1000 особей) путём идентификации участка ДНК и его многократного повторения (амплификации). Результат исследования может быть получен в течение 2-х часов. Несмотря на то, что уже имеются коммерческие тест-системы, пока широкого распространения ПЦР метод еще не получил.

Была также проведена ПЦР с использованием микобактериальной м-РНК, что позволяет судить об определении только живых микобактерий, дифференцируя их от мертвых клеток. Эта возможность снимает дискуссию об ограниченности применения технологии ПЦР в диагностике туберкулеза.

Метод ПЦР-генетического типирования (фингерпринтинг). К настоящему времени разработано несколько вариантов ПЦР-генетического типирования, пригодных для дифференциации штаммов микобактерий туберкулеза.