Заняття №13

Тема: Гуморальна імунна відповідь. Імуноглобуліни (антитіла): визначення, класи, властивості, практичне використання. Серологічні реакції: реакція аглютинації.

Актуальність теми: Гуморальна Імунна відповідь є однією із головних реакцій на введення (попадання) антигенів в організм людини або тварини. Гуморальну Імунну відповідь визначають для оцінки рівня імуногенності антигенів, а кінцевий результат її - антитіла широко використовують в медичній практиці для діагностики, профілактики та лікування інфекційних та інших захворювань.

Мета (загальна): знати, як в медичній практиці використовуються антигени і антитіла, та уміти оцінювати результати реакції аглютинації.

Конкретні цілі

Вихідний рівень

Уміти:

1 .Уміти поставити та оцінити реакцію аглютинації на склі та розгорнуту.	1. Готувати різні розведення речовин в рідині ( кафедра хімії)
2. Уміти визначити титр антитіл в реакції непрямої (пасивної) гемаглютинації(РНГ А).	2. Визначити титр речовини в рідині (кафедра хімії)

Теоретичні питання:

1. Імунна відповідь, визначення, схема, фази, форми.

2. Клітини і гуморальні фактори, які беруть участь у імунній відповіді.

3. Гуморальна імунна відповідь: схема.

1. Антитіла: визначення, властивості, одержання, практичне використання, моноклональні антитіла.

2. Класи, підкласи імуноглобулінів(Іg): перелік, властивості, функції, визначення їх вмісту в крові.

3. Інфекційні захворювання, при яких провідна роль в захисному імунітеті належить антитілам.

4. Серологічні реакції: мета та принцип постановки.

5. Реакція аглютинації та непрямої (пасивної) гемаглютинації.

При підготовці до заняття користуйтеся літературою:

1. Ярилин А.А. Основы иммунологии: Учебник.- М.: Медицина, 1999.-

с.196-212, 315-338,

2. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: Учебник/

под ред.. А.А.Воробьева.- М.: МИА, 2004. - с.201-215, 235-250, 283-293.

3. Якобисяк М.Імунологія/ переклад з польської за ред. проф. В.В.Чоп'як. - Вінниця: Нова книга, 2004. - с.36-39, 60-97

4. Ройт А.Д., Дж.Бростофф, Д.Мейл. Иммунология. Пер.с англ. - М.: Мир, 2000 с.10-13,18-38, 97-112

5. Климнюк СІ., Ситник І.О., Творко М.С., Широбоков В.П. Практична мікробіологія. - Тернопіль, 2004. с. 137-140.

6. Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология: М.: МИА, 202. - с. 258-288, 322- 339.

7. Пяткін К.Д., Кривошеїн Ю.С. Мікробіологія з вірусологією та імунологією: Підручник .-К.: Вища школа, 1992. с.145-157, 172-183.

8. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология, вирусология.: Учебник. СПб:Спец. Л-ра, 1998, 2001. с. 165- 173, 176- 187,228-239

9. Поздеев О.К. Медицинская микробиология/ под ред. акад. РАМН В.И. Покровского. -М. : ГЗОТАР -МД, 2001. с. 202-217, 246-247.

10. Каплін М.М. Імунна система: фізіологія і патологія, навчальний посібник.- Суми: Вид-во СумДУ, 2002. с.18-60, 67-69.

11. Пояснення до самостійної роботи (додаток 1)

12. Графи логічної структури (додаток 2)

ПРАКТИЧНА РОБОТА СТУДЕНТІВ

1. Поставити реакцію аглютинації на склі для визначення виду бактерій Приготувати препарат з аглютинату, пофарбувати фуксином, мікроскопіювати.

2. Поставити розгорнуту реакцію аглютинації для серологічної діагностики бруцельозу.

3. Записати в протокол реакції і провести облік їх результатів і висновки.

4. Вивчити і записати в протокол демонстрації з висновками.

Алгоритм практичної роботи

Робота 1. На предметне скло нанести краплю аглютинуючої сироватки 1:10 - 1:20, поруч помістити краплю фізрозчину для контролю. Петлею візміть невелику кількість культури зі скошеного агару І рівномірно емульгуйте її у фізрозчині та сироватці. При позитивній реакції аглютинації з’являються пластівці, а контрольна краплина фізрозчину залишається рівномірно мутною.

Робота 2. Для визначення титру протибруцельозних антитіл у реакції" розгорнутої аглютинації візьміть 6 пробірок ( табл.). У першу пробірку внесіть 1 мл вихідного розведення сироватки (1:50) і в усі 6 пробірок також градуйованою піпеткою внесіть по 1 мл фізрозчину. У першій пробірці вийде розведення сироватки 1:100 при обсязі 2 мл . З першої пробірки 1 мл перенесіть у другу пробірку, де розведення стане 1:200. Так зробіть ряд послідовних розведень сироватки в 5 пробірках(1:100,1:200,1:400,1:600). З п’ятої пробірки 1 мл вилийте в дезрозчин. В усі 6 пробірок додайте по 2 краплини бруцельозного діагностикума. Шоста пробірка є контролем

культури, тому що містить тільки фізрозчин і діагностикум. Такий контроль необхідний для виключення спонтанної аглютинації культури. Пробірки струшують і поміщають у термостат при температурі 37° на 2 години, а потім залишають на добу при кімнатній температурі, після чого роблять облік результетів реакції аглютинації.

Таблиця

	Схема постановки реакції розгорнутої					а гл юти най	її
Компонент	1	2	3	4	5	6 контроль сироватки	7 контроль діагности кума
Фізіологічний	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0
розчин, 7 мл Аглютинуюча	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	,.
тифозна
сироватка в
розведенні 1:50, 2мл
Черевнотифо­зний	2	2	2	2	2	„	2 Г
діагностикум ( краплі) Розведення сироватки	1:100	1:200	1:400	1:800	1:1600	1:100
Результат						..
реакції

Висновок:

ДЕМОНСТРАЦІЯ

1. Реакція непрямої гемаглютинації (рнга).

У цій реакції мікробний або розчинний антиген адсорбується на поверхні еритроцитів, які у такому «навантаженому» стані отримують здатність до аглютинації з імунною сироваткою, яка містить специфічні проти мікробного антигену антитіла. Враховується реакція по утворенню аглютинованими еритроцитами осаду у вигляді парасольки на дні планшетів, у той час як у контролі, без Імунної сироватки, вони осідають у центрі, утворюючи «ґудзик» з рівними краями. Реакція гемаглютинації є більш чутливою, ніж аглютинація бактерій, застосовується для діагностики при багатьох інфекційних захворюваннях, особливо у дітей, при необхідності виявлення антитіл у більш низьких титрах. Ця реакція може бути використана І для виявлення антигенів при застосуванні антитільних диагностикумів.

2. Аглютинуючі сироватки.

Аглютинуючу сироватку отримують шляхом Імунізації лабораторних тварин культурами бактерій. У крайову вену вуха кролика вводять 0,5 мл суспензії вбитих мікробів, густиною 1 млрд. мікробних тіл у 1 мл. Ін'єкції проводять багаторазово з проміжками 5-6 днів. Дозу щораз збільшують. На 10-й день після останньої Ін'єкції з тієї ж вени беруть кров. Після згортання крові сироватку відсмоктують: у ній знаходяться антитіла проти бактерій, якими проводилась імунізація. Титром аглютинуючої сироватки вважають найбільше її розведення, що викликає феномен специфічної аглютинації. Аглютинуючі типові І монорецепторні сироватки отримують шляхом імунізації тварин відповідними антигенами. Застосовуються вони для серологічної ідентифікації бактерій (сальмонел, шигел й ін.).

3. Діагностикуми (тифозний, дизентерійний і ін.)

Являють собою суспензію вбитих бактерій певної густини (2 млрд. або 1 млрд. мікробів у 1 мл). При необхідності збереження О-антигенів суспензію бактерій знешкоджують шляхом нагрівання або спиртом. Н-антиген менше руйнується у формалінізованих діагностикумах. Застосовуються для постановки реакції аглютинації з метою серологічної діагностики інфекційних захворювань.

4. Еритроцитарні діагностикуми.

Являють собою суспензію еритроцитів тварин, на поверхні яких адсорбовані антигени мікроорганізмів. Зберігаються в рідкому або ліофільно висушеному вигляді. Застосовуються для постановки РИГА з метою серологічної діагностики Інфекційних захворювань.

Приклади тестових завдань

І.До лікарні Привезли хлопчика 10 років у якого підозрюють захворювання на дифтерію. З початку захвоюрювання пройшло 2 доби. Якщо провести серологічне дослідження, то до якого класу Іg треба віднести виявлені антитіла?

*А. ІgС

В.ІgМ

С.1gІ

Д. ІgD

Е.ІgЕ

2.При ряді інфекційних захворювань, наприклад, кору, формується тривалий стійкий захисний гуморальний імунітет. Який клас імуноглобулінів є провідним в цьому імунітеті?

*А, ІgС

В.ІgМ

С.ІgІ

Д. ІgD

Е..ІgЕ

3. З лікувальною та профілактичною метою використовують головним чином імунні сироватки, які містять антитіла:

А. Антибактеріальні.

В. Комплементи зв’язуючи.

С. Противірусні.

*Д. Антитоксини.

Е. Проти клітинних антигенів бактерій.

4. Під час вагітності у жінки відбулось внутрішньоутробне інфікування плода. Концентрація якого класу імуноглобулінів у новонародженої дитини буде підвищеною?

А, ІgС

*В.ІgМ

С.ІgІ

Д. ІgD

Е..ІgЕ

5. Гуморальна (антитільна) імунна відповідь формується в організмі під впливом:

А.Тh 1

*В. Розчинних антигенів.

С. Антигенів організму, які змінились при попаданні вірусів.

Д. Тільки ендогенних антигенів.

Е. Тільки екзогенних антигенів.

6. В нормі в крові людини містяться імуноглобуліни (Іg) 5 класів, один з них в найбільшій концентрації. При недостатності синтезу цього Іg виникають ознаки імунодефіциту. Який це Іg?

* А, ІgС

В.ІgМ

С.ІgІ

Д. ІgD

Е..Іg Е

7. При ряді захворювань (дифтерія, правець, ботулізм і ін.), збудники яких продукують екзотоксин, з метою специфічної терапії вводять підшкірно специфічну антитоксичну сироватку. Який механізм лікувальної дії цієї сироватки?

А. Введені антитіла відновлюють активний Імунітет.

В.Зв'язують (знешкоджують) збудника.

С. Активують неспецифічні фактори захисту організму: фагоцитоз, систему комплементу.

*Д. Зв'язують (нейтралізують) токсини.

Е. Мають властивості ферментів, тому розщеплюють збудника і молекули токсину.

8. Антибактеріальні імунні сироватки (проти сальмонел, ешеріхій, шигел і ін.) в практиці використовують з діагностичною метою. Який це метод діагностики і яка його конкретна мета?

А. Серологічний метод, визначення специфічних антитіл в крові хворого.

В. Мікроскопічний метод, визначення морфології збудника.

С.Бактеріологічний метод, визначення ферментативних властивостей збудника.

*Д. Бактеріологічний метод, визначення антигенних властивостей збудника.

Е. Імунологічний метод, визначення специфічно сенсибілізованих В-лімфоцитІв.

9. Класи імуноглобулінів (М, О, А, Д Е) визначають:

А. по функції

*В. по типу важких ланцюгів

С. по типу легких ланцюгів

Д. по Рс-фрагменту

Е. по варіабельній частині молекули антитіла

Технологічна карта проведення практичного заняття

№ п/п	Етапи	Час в хвил	Засоби навчання	Обладнання	Місце прове дення
1.	Перевірка вихідного рівня	5	усно		Навчальна кімната
2.	Самостійна робота: постановка серологічних реакцій: 1 )Розгорнутої реакції аглютинації (діагнотика бруцельозу); 2) реакцї аглютинації на склі; 3) Записати в	зо	Алгоритм практичної роботи, таблиці	Набір пробірок, штативів, фізрозчин, піпетки, відповідні сироватки, антигени, діагности- куми,
	протокол поставлені реакції, облік результатів І висновки. 4)Вивчити і записати в протокол демонстрації з висновками.			термостат.
3.	Самоперевірка І корекція засвоєння матеріалу.	20	1) Пояснення до самостійної роботи (додаток 1). 2) Графи логічної структури (додаток 2)
4.	Підсумковий тестовий контроль	20	Збірка тестів		Комп' ютерни й клас
5.	Підведення підсумків заняття	5

Додаток 1 ПОЯСНЕННЯ ДО САМОСТІЙНОЇ РОБОТИ З ТЕМИ: " Гуморальна імунна відповідь. Імуноглобуліни (антитіла): визначення, класи, властивості, практичне використання. Серологічні