Работа 3. Проба Квика-Пытеля. Принцип метода

Проба основана на том, что ароматические соединения окисляются в организме до бензойной кислоты, которая в печени путем соединения с гликоколом переходит в гиппуровую кислоту. По количеству выделившейся гиппуровой кислоты после нагрузки бензойнокислым натрием судят о функции печени. Данную пробу применяют только в тех случаях, когда нет изменений функции почек.

При проведении пробы Квика на белых крысах животным подкожно в паховую область вводят 3 мл 5%-го раствора бензойнокислого натрия в физиологическом растворе и 80,1 мг гликокола, растворенного в 3 мл 0,9% раствора хлористого натрия. Затем их помещают в обменные клетки на 18 часов; в течение которых собирают мочу.

В мочу крысы добавляют сернокислый аммоний (0,5 г на 1,0 мл), после растворения которого мочу отфильтровывают. На фильтре обычно остается осадок. В отфильтрованную мочу добавляют крепкую соляную кислоту (1-2 мл) до покраснения красной бумаги Конго. Пробу оставляют стоять для выпадения осадка не менее 2-х часов.

Для определения содержания гиппуровой кислоты титрованием осадок, промытый на фильтре до нейтральной реакции промывных вод, слегка подсушивают, чтобы его удобнее было снять с фильтра. Можно и сразу смыть из промывалки осадок с фильтра в химический стакан, на котором нанесена метка 100 мл. До этой метки наливают воду и доводят почти до кипения. Гиппуровая кислота при этом растворяется. Для титрования берут точно 10 мл и титруют 0,5 н. раствором едкого натра в присутствии фенолфталеина до розовой окраски.

Расчет

При определении количества гиппуровой кислоты методом титрования расчет количества выделившейся гиппуровой кислоты производят следующим образом. Например: объем мочи составляет 10 мл. На титрование 5 мл пошло 1,16 мл раствора NaOH: 1 мл 0,5 н раствора NaOH соответствует 0,0895 г гиппуровой кислоты, отсюда 1,16 мл х 0,0895= 0,104 г гиппуровой кислоты.

В норме у человека выделяется за сутки 2,8-3,0 г гиппуровой кислоты.

Эталоны ответов к тестовым заданиям.

1.1. – 4

1.2. – 1

2.1. – 1Б, 2В

2.2. – 1А,Г; 2Б,В

3.1. – 1, 2, 3

3.2. – 1, 3

4.1. – Д(- + -)

4.2. – А(+ + +)

Эталоны ответов на ситуационные задачи

Задача 1

В печени происходит обезвреживание токсического индола, поступающего из кишечника . В реакции с ФАФС (фосфоаденозин фосфосульфат) образуется менее токсичный индикан, который выводится из организма с мочой. Увеличение содержания индола свидетельствует о нарушении обезвреживающей функции.

Задача 2.

Бензол является летучей, бесцветной жидкостью,хорошо растворимой в маслах. При попадании в организм человека бензол окисляется ферментами микросомального окисления, образуется фенол, который подвергается конъюгации с ФАФС или УДФ-глюкуронатом. Выводится с мочой 30% поступившего бензола в виде фенолсульфата или фенолглюкуроната.

Занятие 44. Перекисное окисление липидов. Активные формы кислорода. Механизмы антиокислительной защиты.

Цель занятия. Изучить химизм этапов зарождения, развития и обрыва цепных реакций окисления липидов.Изучить основные радикалы кислорода, химизм их образования, биологическую роль. Усвоить.роль природных антиокислителей и ферментов с антиоксидантными свойствами

Содержание занятия.

– контроль выполнения заданий по самоподготовке;

– выполнение заданий тестового контроля;

– решение ситуационных задач;

– выполнение работы по обнаружению перекисей в растительном масле, и определению активности каталазы крови;

– заслушивание и обсуждение реферативных сообщений;

– контроль усвоения темы путем устного собеседования с преподавателем.

Примерные темы реферативных сообщений по УИРС:

1. Глутатионсодержащие ферменты – глутатионпероксидаза и глутатионтрансфераза, строение, антиоксидантные свойства.

2. Перекисное окисление липидов и патология мембран.

3. Оксид азота. Механизм образования, биологическая функция.