- •Полимеразная цепная реакция: принципы и практические рекомендации по использованию в клинической практике врача
- •Введение
- •Принцип метода пцр
- •Преимущества пцр как метода диагностики
- •Недостатки метода пцр
- •Общеклиническое и практическое значение пцр
- •Общий методический подход к проведению пцр
- •Диагностика частной патологии методом пцр
- •Вирусные гепатиты (вг)
- •Общие характеристики вирусных гепатитов
- •Вирусный гепатит в (hbv - от англ. Hepatitis b Virus)
- •Маркеры вируса в в репликативную и интегративную фазы развития hbv-инфекции
- •Вирусный гепатит c (hc - от англ. Hepatitis c Virus)
- •Вирусный гепатит d (нd V - от англ. Hepatitis d Virus)
- •Вирусный гепатит g (нg V - от англ. Hepatitis g Virus)
- •Герпетическая инфекция
- •Цитомегаловирус (цмв)
- •Вирус Эпштейна-Барр (вэб)
- •Папилломавирусная инфекция человека
- •Типы hpv, обнаруженные при различных поражениях кожи и слизистых оболочек (VilMers e.M., 1989)
- •Хламидиозная инфекция
- •Число микроорганизмов в пробе
- •Относительный предел измерения (аналитическая чувствительность) прямых методов диагностики c. Trachomatis (Carolyn m. Black, 1997). Микоплазменная инфекция
- •Хеликобактерная инфекция
- •Туберкулёз
- •Результаты анализа клинических образцов на наличие возбудителей туберкулеза микробиологическими методами и методом пцр
- •Онкологические заболевания
- •Опухоли и прогностические днк-маркеры или их рнк продукты
- •Наследственные заболевания и пренатальная диагностика
- •Принципиальная схема пренатальной диагностики наследственных болезней. Институт акушерства и гинекологии им. Д.О.Отта рамн
- •Судебно-медицинская практика
- •Транспланталогия
- •Заключение
- •Литература
Министерство здравоохранения Украины Днепропетровская государственная медицинская академия Клинико-диагностическая лаборатория
Полимеразная цепная реакция: принципы и практические рекомендации по использованию в клинической практике врача
(руководство для врачей)
Днепропетровск 2002 г.
Авторы: ШОСТАКОВИЧ-КОРЕЦКАЯ ЛЮДМИЛА РОМАНОВНА, доктор медицинских наук, профессор, заведующая кафедрой факультетской педиатрии и детских инфекционных заболеваний МАВРУТЕНКОВ ВИКТОР ВЛАДИМИРОВИЧ, кандидат медицинских наук, доцент кафедры факультетской педиатрии и детских инфекционных заболеваний БРАТУСЬ ЕЛЕНА ВАСИЛЬЕВНА, кандидат биологических наук, заведующая клинико-диагностической лабораторией МАВРУТЕНКОВА ТАТЬЯНА ВИКТОРОВНА, кандидат биологических наук, зав. ПЦР-отделением клинико-диагностической лаборатории
Введение
Молекулярная клиническая диагностика - наука, выявляющая причины и механизмы инфекционных и соматических заболеваний на молекулярном уровне, который включает в себя определение генов и продуктов их деятельности – протеинов и нуклеиновых кислот.
Как отдельное направление она начала бурно развиваться в начале 70-х годов после фундаментальных открытий в области молекулярной биологии: во-первых, создание моноклональных антител, взаимодействующих только с определёнными эпитопами (антигенными детерминантами); во-вторых, изобретение метода гибридизации на фильтрах (Саузерн-блотт), названного так по фамилии учёного, предложившего данный способ разделения нуклеиновых кислот (НК). И, наконец, ещё одним “критическим'' научным событием стало открытие в 1985 году метода полимеразной цепной реакции (ПЦР). Эти достижения коренным образом изменили содержание всей молекулярной клинической диагностики.
В современной лабораторной диагностике ПЦР занимает особое место. Метод ПЦР поднял клиническую лабораторную диагностику на принципиально иную высоту - уровень определения нуклеиновых кислот (ДНК и РНК), что позволяет провести прямое обнаружение инфекционного агента или генетической мутации в любой биотической или абиотической среде. При этом способом ПЦР, теоретически, может быть обнаружена всего одна искомая молекула НК среди миллионов других молекул НК. В связи с этим возникает один немаловажный вопрос, принципиальный для инфектологии, насколько тождественны понятия - “НК” и “возбудитель”. С точки зрения общей микробиологии это неравнозначные понятия, т.к. возбудитель это сложная биологическая система, включающая в себя НК, цитоплазму, оболочку и продукты жизнедеятельности микроорганизма. Но при этом НК не может обойтись вне этой сложной структуры, как и сам патоген не может существовать без НК. Поэтому с позиции клинической медицины определение НК является эквивалентом обнаружения/не обнаружения возбудителя в объекте исследования.
Разнообразны области применения метода ПЦР: общая и частная биология, ветеринария, фармация, экология - как способ контроля за качеством объектов окружающей среды и продуктов питания, криминалистика (идентификация личности и отцовства). Особенно эффективным оказалось применение метода в клинической медицине.
Цель данного методического пособия ознакомить широкий круг практикующих врачей различных специальностей (клиницистов, лаборантов, судебных и санитарных медиков и т.п.) с принципами и практическими возможностями метода ПЦР для диагностики различных инфекционных, генетических и онкологических заболеваний.