8

Микробиологическая диагностика оппортунистических заболеваний

урогенитального тракта. Микробиологическая диагностика специфических

заболеваний, передающихся половым путем

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ МОЧИ

Взятие исследуемого материала

Исследованию подлежит средняя порция свободно выпущенной мочи, взятой в количестве 3—5 мл в стерильную посуду после тщательного туалета наружных половых органов. Катетеризация мочевого пузыря для рутинного исследования не применяется, так как она может привести к инфицированию мочевых путей. К катетеризации мочевого пузыря прибегают в некоторых случаях для уточнения локализации инфекции — в мочевом пузыре или в почках. С этой целью мочевой пузырь опорожняют катетером и промывают раствором антибиотика, после чего с интервалом в 10 минут берут пробы мочи для исследования. Если инфекция локализуется в почках, микроорганизмы содержатся во всех порциях мочи. При инфекции мочевого пузыря моча остается стерильной.

Для получения мочи можно использовать метод надлобковой пункции. При этом устраняется контаминация мочи микрофлорой из нижних отделов мочевого тракта и влагалища, облегчается определение инфекции нижних отделов уринарного тракта. Однако, имеется опасность инфицирования больного и поэтому к надлобковой пункции мочевого пузыря прибегают только в случаях необходимости.

Материал для исследования следует брать до начала антибактериальной терапии или в интервалах между курсами лечения.

Содержащиеся в моче микробы быстро размножаются при комнатной температуре, что может дать ложные результаты при определении степени бактериурии. В связи с этим, от момента взятия пробы мочи до начала ее исследования в лаборатории должно проходить не более 1—2 часов при хранении при комнатной температуре и не более 18 часов — при хранении в холодильнике.

Посев исследуемого материала

Питательные среды: питательный агар; 2.5% кровяной агар; сахарный бульон, дифференциально-диагностические среды для энтеробактерий.

Выделение микроорганизмов из мочи не позволяет дифференцировать бактериурию, возникающую в результате загрязнения мочи нормальной микрофлорой дистального отдела уретры, от бактериурии, развивающейся при инфекционных процессах в мочевыводящей системе, возбудителями которых являются условно-патогенные микроорганизмы. С этой целью применяют количественные методы исследования, основанные на определении числа микробных клеток в 1 мл мочи (степень бактериурии). Для определения степени бактериурии используют несколько методов: метод серийных разведении мочи и метод секторных посевов.

Метод секторных посевов. Платиновой петлёй производят посев мочи (30-40 штрихов) на сектор А чашки Петри с простым питательным агаром. После этого петлю прожигают и производят 4 штриховых посева из сектора А в сектор І и аналогичным образом – из сектора І во ІІ и из ІІ в ІІІ. Чашки инкубируют при 37°С 18-24 часа, после чего подсчитывают число колоний, выросших в разных секторах.

Одновременно с подсчетом количества колоний, выросших на чашке Петри, можно выделить чистую культуру возбудителя, идентифицировать ее и определить чувствительность к антимикробным препаратам.

Определение степени бактериурии по количеству выделенных колоний производят по таблице.

А	Количество колоний в секторах			Количество бактерий в 1 мл мочи
	І	ІІ	ІІІ
1-6	-	-	-	менее1000
8-20	-	-	-	3000
20-30	-	-	-	5000
30-60	-	-	-	10000
70-80	-	-	-	50000
100-150	5-10	-	-	100000
не сосчитать	20-30	-	-	500000
-//-	40-60	-	-	1 млн.
-//-	100-140	10-20	-	5 млн.
-//-	не сосчитать	30-40	-	10 млн.
-//-	-//-	60-80	ед. колонии	100 млн.

Метод серийных разведении мочи заключается в посевах определенного количества различных разведении мочи на плотные питательные среды и последующего подсчета числа выросших колоний в 1 мл неразведенной мочи. Метод достаточно точен, но требует большой затраты питательных сред, лабораторной посуды и времени.

Ускоренные методы основаны на определении продуктов метаболизма, образующихся при размножении микроорганизмов в моче. Они дают менее точные результаты, чем метод секторальных посевов, и чаще используются при массовых профилактических обследованиях больших контингентов людей, для экспресс диагностики. При использовании ускоренных методов лаборатория дает предварительный ответ через день после получения результатов и окончательный через 4 дня после выделения чистой культуры микроорганизмов, их идентификации и определения чувствительности к антибактериальноым препаратам.

Нитритный тест. Нитриты, являющиеся продуктами метаболизма представителей семейства Enterobacteriaceae, могут быть обнаружены в моче с помощью реактива Грисса. Для этого смешивают приготовленные растворы с 1 мл мочи. Появление красного окрашивания свидетельствует о присутствии в 1 мл мочи не менее 10⁵ микробных клеток.

Эффективность метода может быть значительно повышена добавлением в мочу нитратов с последующей инкубацией при 37 °С в течение 2—4 часов перед постановкой нитритного теста.

ТТХ-тест. Трифенилтетразолий хлористый (ТТХ) под действием продуктов жизнедеятельности микроорганизмов переходит из бесцветного в красный нерастворимый в воде трифенилформазан. Интенсивность окраски находится в прямой зависимости от степени бактериурии.

Готовят три раствора: 1. Насыщенный раствор двузамещённого фосфорнокислого натрия; 2. 750 мг ТТХ растворяют в 100 мл раствора 1; 3. Рабочий раствор — 4 мл раствора 1 смешивают со 100 мл раствора 2. Хранят растворы в прохладном защищенном от света месте. Срок хранения растворов 1 и 2 — до 2-х месяцев, рабочего раствора — не более 2-х недель.

При постановке реакции пользуются стерильной посудой.

К 2 мл мочи прибавляют 0,5 мл рабочего раствора и помещают после перемешивания в термостат при 37°С. После 4 х часовой инкубации учитывают результаты. Появление на дне пробирки красного осадка свидетельствует о наличии в 1 мл мочи не менее 10⁵ микробных клеток.