- •4.Методы выделения чистых культур бактерий.
- •5.Особенности культивирования анаэробных бактерий. Методы создания анаэробиоза.
- •6.Принципы культивирования микроорганизмов.
- •8.Требования к условиям культивирования бактерий
- •25) Методы индикации вирусов при культивировании их в организме лабораторных животных
- •26)Что такое цпд? Виды цпд?
- •27) Механизм рга и ргАдс
- •28)Цветная реакция механизмы
- •Вопрос 42
- •Вопрос 43
- •Вопрос 45
- •47. Особенности
- •54 Мутагены
- •55 Репарации
- •56 Рекомбинационная изменчивость у бактерий
4.Методы выделения чистых культур бактерий.
I. Методы, основанные на механическом разобщении.
метод посева штрихом
метод посева газоном
метод посева по Дригальскому(шпатель не стерелизуют!)
метод посева по Голду(количественный)
30-40 штрихов, петлю стерилизуют перед каждым след разнесением
метод разведений(количественный)
1:10,1:100,1:1000, потом-посев методом газона из каждой пробирки
метод Коха(пластинчатых разводок)
1л,в нем- 1-10мл материала
Разливают ̴ 50 чашек
II. Методы, основанные на биологических свойствах микробов
метод прогревания для выделения спорообразующих микробов
материал прогревают при Т=80 ͦ , 20 мин, вегетативные клетки гибнут, споры остаются, при высеве прорастают
метод щукевича
для выделения ползучего роста микробов(Proteus, сем. Enterobacteriaceae)
обработка материала
а)кислотами для выделения кислотоустойчивых бактерий
б)антибиотиками(пенициллином) – гибнут грамм+, остаются грамм-
в)бактериофагами
посев на элективные питательные среды
а)ЖСА(9-10% NaCl для выделения стафилококков)
б)на 1% пептонную воду(pH=8) для выделения холерного вибриона
культивирование при определенной температуре
а)+5 ͦ выделение психрофилов
б) +60 ͦ выделение термофилов
5.Особенности культивирования анаэробных бактерий. Методы создания анаэробиоза.
Физические
культивирование в анаэростате (выкачивается воздух) или аппарате Киппа (замещается инертным газом, например азотом)
трубки Виньяль-Вийона (смешивание с расплавленной и охлаждённой питательной средой с её последующим застыванием – глубинное культивирование)
засев уколом в высокий столбик (полужидкой среды)
культивирование под слоем масла
регенерация жидкой питательной среды перед засевом (кипячение с последующим быстрым охлаждением)
метод Перетца (в чашку Петри заливается охлаждённая среда, смешанная с культурой, на поверхность – предметное стекло, сняв которое можно легко добраться до выросшей культуры)
Химические
в замкнутом объёме протекает химическая реакция с поглощением кислорода
метод Аристовского (сыпучие ингредиенты)
метод Омелянского (жидкие ингредиенты)
включение в питательную среду редуцирующих веществ (связывают растворённый в среде кислород)
глюкоза
тиогликолевая кислота и др.
Биологические
метод Фортнера (в замкнутом объёме культивируются анаэробы и жадный аэроб – после прекращения роста которого в безкислородной среде начинают расти анаэробы)
Метод Кита-Тароцци
среда Китта-Тароцци
МПБ с глюкозой
на поверхности – масло
на дне – кусочки печени
6.Принципы культивирования микроорганизмов.
Метод культивирования |
Микроорганизмы |
In vivo:
|
Облигатные паразиты:
|
In vitro:
|
Почти все патогенные бактерии |
7.Классификация искусственных питательных сред
Агар – полисахарид, добываемый из морских водорослей определенных видов; используется для уплотнения питательных сред в бактериологии по такому же алгоритму, как в быту крахмал или желатин
Свернутые питательные среды – это плотные среды, содержащие сыворотку крови или обогащенные белком (яичные, например), которые уплотняются при прогревании в процессе стерилизации
Натуральные среды готовятся на основе отваров, экстрактов мяса, рыбы, овощей и др. натуральных продуктов
Простые натуральные среды представляют собой такие отвары или экстракты
Сложные натуральные среды получают путем добавления в простые натуральные среды любого вещества (красителя, сахара, антибиотика, крови и т.д.)
Синтетические питательные среды получают, смешивая чистые химические вещества (как правило, соли)
Элективные (селективные, избирательные, обогащения) питательные среды – это среды, содержащие вещества, используемые бактериями определенных видов и не благоприятствующие или даже препятствующие росту других бактерий
Дифференциально-диагностические питательные среды – это среды, позволяющие отличать одни виды бактерий от других по их ферментативной активности или культуральным свойствам
Консервирующие питательные среды – это среды, используемые, например, при доставке патологического материала в бактериологическую лабораторию – так как метаболическая активность на них бактерий сводится практически к нулю, то бактерии сохраняются, но не размножаются
По консистенции
Жидкие
Полужидкие (0,5% агара)
Плотные (1,5-2% агара, свернутые)
По составу
Натуральные
простые
мясо-пептонный агар и бульон (МПА и МПБ)
желатин
молоко
кусочки овощей
сложные
простые + добавка
Синтетические
По назначению
Основные:
Универсальные (простые натуральные)
Специальные (сложные натуральные)
Элективные (селективные)
Дифференциально-диагностические
Консервирующие