Исследуемый материал и реактивы
1. Кровь. 2. Спирт. 3. Вата. 4. Скарификатор. 5. Перекись водорода (3%).
Ход работы
Взятие крови. Кровь для клинического анализа берут обычно после укола скарификатором в мякоть пальца. Перед взятием крови мякоть пальца должна быть высушена и обезжирена. Для этого кожу протирают спиртом и вытирают насухо стерилизованной марлей или ватным тампоном (см. Приложение).
Укол не должен быть слишком поверхностным: от того, как нанесен укол, зависит интенсивность и длительность кровотечения. Первую выступившую каплю крови стирают и дают появиться второй. Выдавливать кровь их пальца не рекомендуется.
В пробирку вносят 10-15 капель 3% Н2О2 и 1 каплю крови. Отмечают бурное выделение пузырьков кислорода и пена заполняет всю пробирку.
Указания к оформлению лабораторной работы
В тетради для лабораторных работ запишите принцип метода, реакцию, катализируемую каталазой крови, ход работы, зарисуйте полученные результаты и сделайте выводы.
Контрольные вопросы
Какова биологическая роль фермента каталазы?
Что является простетической группой фермента каталазы?
Где в организме содержится каталаза?
Лабораторная работа №14 Открытие пероксидазы
Как и каталаза, пероксидаза – геминсодержащий фермент. Пероксидаза катализирует окисление некоторых веществ (фенолы, полифенолы, ароматические амины) в присутствии перекиси водорода. От субстратов под действием пероксидазы переносятся электроны на перекись водорода. Образуется окисленный субстрат и вода. В организме млекопитающих слабой пероксидазной активностью обладают гемоглобин, миоглобин и цитохромы. Пероксидаза содержится почти во всех растительных клетках.
Принцип метода. От бензидина под действием пероксидазы переносятся электроны и протоны на перекись водорода. В результате образуется окисленный бензидин и вода. Окисленный бензидин приобретает зеленую, синюю, постепенно переходящую в бурую окраску.
Исследуемый материал и реактивы
1. Кровь. 2. Спирт. 3. Вата. 4. Скарификатор. 5. Раствор бензидина в ледяной уксусной кислоте (1%). 6. Перекись водорода (3%). 7. Вода.
Ход работы
В две пробирки наливают по 5 капель 1% раствора бензидина в ледяной уксусной кислоте и по 5 капель 3% раствора перекиси водорода. В первую пробирку добавляют 5 капель крови, во вторую – 5 капель воды. Наблюдают за изменением окраски.
Указания к оформлению лабораторной работы
В тетради для лабораторных работ запишите принцип метода, ход работы, зарисуйте полученные результаты (окраска проб) и сделайте выводы.
Контрольные вопросы
Назовите фермент, субстрат и продукт реакции проведенной Вами лабораторной работы.
Какое значение для организма имеет фермент пероксидаза?
Какие соединения в организме обладают пероксидазной активностью?
Лабораторная работа №15 Получение тирозиназы и окисление тирозина в присутствии кислорода
В организме человека и животных фермент тирозиназа катализирует превращение адреналина в физиологически неактивный красный пигмент адренохром. Последний, конденсируясь, превращается в бурый пигмент меланин. Если к раствору тирозина прибавить вытяжку из картофеля, содержащую фермент тирозиназу, и смесь для контакта с воздухом встряхивать, то жидкость через некоторое время постепенно окрашивается в розовый, бурый и, наконец, в черный цвет.
Принцип метода. Реакция обусловлена окислением тирозина кислородом воздуха и протекает благодаря каталитическому действию тирозиназы. В процессе окисления тирозина образуется красный пигмент галахром и затем темный пигмент меланин:
