- •Уметь: - оценить правильность получения биоматериала для биохимических исследований - рассчитать диагностическую чувствительность и специфичность теста.
- •Вопросы для обсуждения
- •Самостоятельная работа студентов
- •Уметь: - оценить правильность ведения контроля качества в лаборатории; - выбрать адекватные средства и методы контроля качества.
- •Виды лабораторных исследований
- •Основные разделы лабораторных исследований
- •Вопросы для обсуждения
- •Самостоятельная работа студентов
- •Функции печени
- •Функции печени и методы их оценки
- •Лабораторные тесты диагностики заболеваний печени
- •Клинические и биохимические синдромы
- •Энзимодиагностика заболеваний печени
- •Вопросы для обсуждения
- •Самостоятельная работа студентов
- •Типы желтух
- •Дифференциальная диагностика желтух
- •Метаболизм билирубина.
- •Желтуха новорождённых.
- •Лабораторная дифференциальная диагностика заболеваний печени
- •Холестаз
- •Оценка синтетической функции печени
- •Изменение лабораторных показателей при различных видах заболевания печени
- •Вопросы для обсуждения
- •Самостоятельная работа студентов
- •Методы определения общего белка
- •Азотометрические методы
- •Гравиметрические методы
- •«Преципитационные» методы
- •Рефрактометрические методы
- •Колориметрические (фотометрические) методы
- •Общий вид электрофореза
- •Электрофореграмма (вверху) и графический результат ее обработки (внизу)
- •Нормальная протеинограмма
- •Типы протеинограмм
- •Основные методы, используемые для определения боф, следующие:
- •Тесты на боф используемые в клинической практике.
- •Вопросы для обсуждения
- •Самостоятельная работа студентов
- •Функции поджелудочной железы:
- •Лабораторные тесты:
- •Вопросы для обсуждения
- •Самостоятельная работа студентов
- •Влияние инсулина на метаболизм
- •Абсолютная и относительная недостаточность инсулина
- •Гипергликемя и глюкозурия
- •Критерии диагностики сд и других категорий гипергликемии (воз,1999)
- •Толерантности к глюкозе
- •Диагностические критерии оценки глюкозотолерантного теста (Комитет экспертов воз по сахарному диабету, 1999)
- •Постпрандиальная гипергликемия
- •Вопросы для обсуждения
- •Самостоятельная работа студентов
- •Методы определения содержания глюкозы
- •Ранняя диагностика сахарного диабета
- •Критерии компенсации сахарного диабета
- •Зависимость уровня гликозилированного гемоглобина от среднего показателя глюкозы крови
- •Критерии степени нарушений углеводного обмена и риска развития сосудистых осложнений (макро- и микроангиопатий) при сахарном диабете 2-го типа
- •Гипогликемическая кома
- •Основная причина гипогликемии
- •Провоцирующие факторы:
- •Клиническая картина
- •Показатели липидного спектра при сахарном диабете
- •Вопросы для обсуждения
- •Самостоятельная работа студентов
- •Вопросы для обсуждения
- •Самостоятельная работа студентов
- •Вопросы для обсуждения
- •Самостоятельная работа студентов
- •Причины эритроцитурии
- •Вопросы для обсуждения
- •Вопросы для обсуждения
- •Самостоятельная работа студентов
- •Причины гипокалиемии
- •Кальций, гипер- и гипокальциемия у детей и взрослых
- •Фосфор, кислоторастворимая и кислотонерастворимая фракции. Гипер и гипофосфатемия у детей и взрослых
- •Норма фосфора в крови
- •Методы определения показателей минерального обмена
- •Вопросы для обсуждения
- •Самостоятельная работа студентов
- •Нормальные показатели кислотно-щелочного равновесия
- •Основные показатели кос крови
- •Механизмы компенсации нарушений кислотно-основного равновесия
- •Вопросы для обсуждения
- •Самостоятельная работа студентов
Рефрактометрические методы
Рефрактометрические методы определения общего белка сыворотки основаны на способности растворов белка к преломлению светового потока. При температуре 17,5 °С показатель преломления воды равен 1,3332, при той же температуре показатель преломления сыворотки колеблется в пределах 1,3480–1,3505. В связи с тем, что концентрация электролитов и небелковых органических соединений, влияющих на ее преломляющую способность, невелика и достаточно постоянна в сыворотке здорового человека, величина показателя преломления сыворотки крови зависит в первую очередь от содержания в ней белков. Калибровку прибора проводят сывороткой с известной концентрацией белка. Простота делает рефрактометрию удобным методом для определения содержания общего белка в сыворотке крови, хотя при ряде заболеваний, в частности, при сахарном диабете, хронической почечной недостаточности его использование может приводить к существенной ошибке.
Колориметрические (фотометрические) методы
Колориметрические методы определения общего белка основаны на цветных реакциях белков с хромоген-образующими реактивами или на неспецифическом связывании красителя.
Среди колориметрических методов определения концентрации общего белка сыворотки наиболее распространенным считается биуретовый метод, основанный на так называемой «цветной биуретовой реакции», в ходе которой белки реагируют в щелочной среде с сульфатом меди с образованием соединений, окрашенных в фиолетовый цвет, интенсивность окраски зависит от концентрации общего белка в сыворотке. Биуретовый метод определения общего белка в сыворотке крови был утвержден в качестве унифицированного в 1972 г.
Колориметрические методы определения общего белка сыворотки крови достаточно просты и относительно дешевы. К недостатку метода относится интерферирующее действие некоторых веществ (в том числе лекарств).
Нормальное количество общего белка в сыворотке крови колеблется от 60 до 80 г/л. Плазма содержит на 2-4 г/л больше за счет фибриногена, который отсутствует в сыворотке.
Пониженная концентрация белков в крови называется гипопротеинемия, повышенная – гиперпротеинемия.
Причины гипопротеинемии:
- недостаточное введение белка (длительное голодание, безбелковая диета);
- повышенная потеря белка (при различных заболеваниях почек, кровопотерях, ожогах, новообразованиях, асцитах, сахарном диабете);
- нарушение образования белка в организме: при недостаточности функции печени (гепатиты, циррозы, токсические повреждения), длительном лечении кортикостероидами, нарушении всасывания (при энтеритах, энтероколитах, панкреатитах).
Гиперпротеинемия наблюдается при:
- дегидратации в результате потери части внутрисосудистой жидкости (при тяжелых травмах, обширных ожогах, холере);
- появлении в крови парапротеинов – патологических белков, вырабатываемых в большом количестве при миеломной болезни, при болезни Вальденстрема).
С помощью электрофореза на бумаге выделяют 5 стандартных фракций: альбумины и четыре фракции глобулинов (α1-глобулины, α2-глобулины, β-глобулины, γ-глобулины).
Принцип электрофореза белков заключается в следующем:
Ацетатцеллюлозная пленка, гель, специальная бумага (носитель) помещается на рамку, при этом противоположные края носителя свисают в кюветы с буферным раствором. На линию старта наносится сыворотка крови. Метод заключается в движении буферного раствора по поверхности носителя под влиянием электрического поля. Двигаясь, буферный раствор захватывает молекулы белков сыворотки. Молекулы с наибольшим отрицательным зарядом и наименьшим размером, т.е. альбумины, двигаются быстрее остальных. Наиболее крупные и нейтральные (γ-глобулины) оказываются последними.
На ход электрофореза влияет подвижность разделяемых веществ, находящаяся в зависимости от следующих факторов: заряда (обычно зависит от pH), размера и формы молекул веществ, электрического поля, буфера и носителя (учитывается его гидрофильность и адсорбционная способность).