3. Реакция миллона

Реакция Миллона характерна для белков, содержащих ароматическую аминокислоту тирозин.

При взаимодействии белка с реактивом Миллона (р-р азотнокислой ртути в концентрированной НNO3) образуется осадок белка, который при нагревании окрашивается в красно-коричневый цвет.

Реакция вызвана присутствием в белке фенольной группы тирозина, после взаимодействия с реактивом Миллона образуется ртутная соль нитропроизводного.

Тирозин Ртутная соль нитротирозина

Реакцию Миллона дают все белки, за исключением тех, молекулы которых не содержат тирозина (желатин, клупеин и др.).

Реактив Миллона дает окрашивание почти со всеми фенолами.

Ход работы: К раствору белка 1-2 мл прилить 5-6 капель реактива Миллона. Осадок белка при нагревании окрашивается в красно-коричневый цвет, вследствие образования ртутной соли нитрозина. Следует избегать прибавления избытка реактива Миллона, поскольку он содержит азотную кислоту, которая при взаимодействии с белком может дать желтое окрашивание (ксантопротеиновую реакцию), маскирующее реакцию Миллона.

4. Реакция адамкевича

Эта реакция обусловлена присутствием в молекуле белка триптофана и его взаимодействием с глиоксиловой кислотой. Если к раствору белка добавить незначительное количество глиоксиловой кислоты и концентрированной серной кислоты, развивается красно-фиолетовое окрашивание. Реакция обусловлена конденсацией триптофана с альдегидами с образованием окрашенных продуктов.

В качестве источника глиоксиловой кислоты может служить ледяная уксусная кислота, в которой всегда имеются небольшие количества глиоксиловой кислоты.

Продукт конденсации триптофана с глиоксиловой кислотой (красно-фиолетовый цвет)

Ход работы: К раствору белка 1 мл прилить 1 мл концентрированной уксусной кислоты. Осторожно, сильно наклонив пробирку, по стенке прибавить 1 мл концентрированной серной кислоты так, чтобы жидкости не смешивались. На границе между ними появляется красно-фиолетовое кольцо.

5. Реакция на серу в белках (реакция фоля)

Реакцию Фоля дают белки, содержащие цистин и цистеин.

Если к раствору белка добавить крепкой едкой щелочи, уксуснокислого свинца и прокипятить, развивается темное окрашивание. При кипячении белка со щелочью слабосвязанная сера указанных аминокислот отщепляется и образуется сульфид натрия, который вступает во взаимодействие с уксуснокислым свинцом с образованием сульфида свинца черного цвета:

Цистеин Серин

Уксуснокислый свинец реагирует со щелочью с образованием плюмбита натрия:

(СН₃СОО)₂Рb + 2 NaОН → Рb(ОNа)₂ + 2СН₃СООН

Сульфид натрия при взаимодействии с плюмбитом образует осадок сульфида свинца черного цвета:

Nа₂S + Рb(ОNа)₂ + 2Н₂O → РbS + 4 NаОН

Ход работы: К раствору белка 1 мл прилить 2-3 мл 10% едкого натрия и вскипятить. В горячий раствор прибавить небольшое количество уксуснокислого свинца. Раствор темнеет, образуя черный осадок сульфида свинца.

Метионин, как известно, хотя и содержит серу, но этой реакции не дает (сера прочно удерживается метальной группой).