Мед энзимология

определять и в других жидкостях организма: моче, соке поджелудочной железы, ликворе, слезной жидкости, где изменение их активности также имеет существенное клинико-диагностическое значение.

Гипоферментемия встречается относительно редко и касается в основном секреторных ферментов. В подавляющем большинстве случаев она связана с генетически детерминированными нарушениями синтеза определенных энзимов, реже – с ингибированием, усиленной деградацией или экскрецией.

Дисферментемия обусловлена в основном появлением в крови органоспецифических ферментов.

Гиперферментемия свидетельствует о некрозе или лизисе клеток, либо о нарушении проницаемости клеточных мембран из-за дефицита кислорода, истощения глюкозы, действия лекарств и других ксенобиотиков, токсинов, бактерий, вирусов и др. Развитию гиперферментемии способствует клеточная пролиферация, усиление синтеза энзимов клетками, повышение концентрации активаторов в кровяном русле.

Основной трудностью использования определения активности ферментов в диагностических целях является отсутствие специфичности повышения ферментативной активности для повреждения определенной ткани или органа. Поскольку многие ферменты присутствуют в разных тканях и органах, то повышение их активности в сыворотке может быть связано с повреждением любого из этих органов. Задача дифференциальной диагностики может быть решена одним из следующих способов:

–Определение более чем одного фермента. Разные ткани содержат ферменты в разных количествах. Так, АлАТ и АсАТ содержатся в гепатоцитах и кардиомиоцитах, но АлАТ существенно больше в печени, а АсАТ

всердце. Поэтому при повреждении печени относительно больше повышается АлАТ, а при повреждении сердца – АсАТ.

–Определение спектра изоферментов. Данный подход основан на том, что отдельные изоформы характерны для разных тканей.

–Определение активности ферментов в динамике. Скорость изме-

нения активности фермента в сыворотке определяется разницей между скоростью его появления в сыворотке и скоростью удаления из системы циркуляции. При инфаркте органа и некрозе поврежденных клеток в сыворотке крови происходит повышение активности внутриклеточных ферментов, специфичных для данной ткани, затем после выхода всего фермента активность его снижается. Важным является определение динамики изменения фермента и определение его активности в период повышения в сыворотке, т. к. слишком раннее взятие пробы для анализа может предшествовать подъему активности, слишком позднее – также не позволит получить необходимую информацию.

Не всегда активность фермента в сыворотке отражает тяжесть заболевания. Так, острое повреждение клеток при вирусном гепатите может

11

сопровождаться очень высоким подъемом активности ферментов, которая будет падать по мере выздоровления. В то же время при циррозе печень может быть значительно сильнее вовлечена в патологический процесс, но скорость повреждения клеток ниже и активность ферментов в сыворотке будет повышена незначительно или даже находиться в пределах референтных значений. Этот пример еще раз подчеркивает, что любые результаты по исследованию активности ферментов в сыворотке должны быть обязательно сопоставлены с другими лабораторными анализами и с клинической картиной заболевания.

Перед тем как указывать на возможность патологического процесса, необходимо исключить возможность неспецифического повышения активности ферментов в сыворотке. Так, относительно невысокое повышение в плазме активности трансаминаз характерно для многих неспецифических патологических процессов. Тяжелая физическая работа, массивные внутримышечные инъекции могут привести к повышению активности КК в сыворотке. Некоторые лекарственные средства, в частности фенитоин, фенобарбитал могут индуцировать синтез микросомального фермента ГГТ и вызвать его повышение в сыворотке без всякого заболевания. Активность ферментов в сыворотке может меняться в результате агрегации с образованием макромолекул, например, при образовании комплексов с иммуноглобулинами, в которые вступают ЛДГ, ЩФ и КК.

ОБЩИЕ ПРАВИЛА РАБОТЫ С ФЕРМЕНТАМИ И НЕКОТОРЫЕ ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Ферменты, как все белки, являются относительно неустойчивыми веществами. Они легко подвергаются денатурации и инактивации. Приступая к работе, надо внимательно изучить и осознанно выполнять прилагаемую к наборам инструкцию. Работая с ферментами (будь то ферментативные наборы для определения субстратов или активности ферментов или контрольные материалы, содержащие ферменты), следует соблюдать простые правила, вытекающие из общих для всех ферментов свойств.

1. Нельзя сильно встряхивать растворы ферментов и допускать образование пены при их перемешивании, т. к. ферменты при этом могут инактивироваться в результате воздействия на них кислорода воздуха.

2. Растворенные, лиофильно высушенные реагенты, контрольные материалы и контрольные сыворотки, содержащие ферменты, перед использованием необходимо выдержать при комнатной температуре в течение времени, указанного в инструкции, чтобы фермент пришел в конформационно активное состояние. Необходимо строго соблюдать условия ферментативной реакции, указанные в инструкции: время и температуру инкубации, соотношение реагент/сыворотка.

12

3.Время начала и окончания ферментативной реакции следует фиксировать по секундомеру, причем в случае определения активности ферментов и кинетических методов определения аналитов для каждой отдельной пробы, а не для серии целиком, иначе результаты анализа будут неверны. Началом реакции считается момент добавления сыворотки (или стартера) в реакционную смесь, а также окрашивающего реагента, если реакция двухстадийная. Для кинетических методов, когда анализ в нескольких пробах проводят последовательно, время начала реакции и равные промежутки времени между фотометрированиями следует точно фиксировать по секундомеру для каждой отдельной пробы. Так как определение, как правило, проводят в нескольких пробах, сыворотку в реакционную смесь в параллельных пробах следует вносить через четко фиксированные по секундомеру промежутки времени, например через 30 с или 1 мин. Началом реакции считается внесение сыворотки в первую пробу из серии. По истечении времени реакции следует с таким же интервалом останавливать реакцию в параллельных пробах, т. е. вносить реагент, например щелочь, с интервалом 30 с или 1 мин, соответственно. Таким образом, время реакции будет фиксировано для каждой отдельной пробы. Исключением из этого правила может быть только метод Райтмана–Френкеля. Так как время ферментативной реакции в этом методе – 1 ч, то допущенное отклонение во времени между параллельно определяемыми пробами при серийном запуске и остановке реакции будет относительно небольшим и внесет незначительную ошибку в конечный результат по сравнению с ошибкой самого метода.

4.Перед началом ферментативной реакции температуру рабочего реагента необходимо довести до значения, указанного в инструкции, и обеспечить его поддержание в течение всего времени анализа с точностью ±0,1°С. В случае ферментативных методов анализа аналитов желательно, а при определении активности ферментов обязательно использовать водяную баню (водяной термостат). Так как теплопроводность воды значительно выше теплопроводности воздуха, водяной термостат быстрей и надежней обеспечивает установку и поддержание заданной температуры реакционной смеси. Например, чтобы довести температуру 1 мл реакционной смеси до 37 °С, в суховоздушном термостате ее необходимо выдержать 10 мин, а в водяной бане – 5 мин. Если время анализа выдерживают для каждой отдельной пробы, а не для серии целиком, технически с водяной баней работать удобней.

5.Ни в коем случае нельзя изменять соотношение рабочий реагент/сыворотка. Его уменьшение в целях экономии может привести к сужению линейной области определения в случае определения активности фермента и к неполному превращению аналита в случае ферментативных методов анализа, т.е. к получению заниженных результатов. При увеличении соотношения рабочий реагент/сыворотка снижается чувствительность метода.

13

6.Также нельзя разбавлять рабочий реагент в целях экономии, т. к. при этом условия реакции (концентрация буфера, активаторов и т. д.) отклонятся от оптимальных, что приведет к занижению результатов анализа как в случае определения активности ферментов, так и в случае определения аналитов ферментативными методами.

7.Если концентрация фермента или другого аналита в биологической жидкости превышает верхнюю границу линейности набора, то исследуемую пробу необходимо разбавить строго в соответствии с рекомендациями, изложенными в инструкции к набору (чем разбавлять и во сколько раз). Несоблюдение указаний может привести к серьезным ошибкам, т. к. в сыворотке присутствует огромное количество соединений, тем или иным образом влияющих на аналит и результат его определения (особенно это касается ферментов). Для получения точных и воспроизводимых результатов пробу вообще лучше не разбавлять, тем более что активность некоторых ферментов, например АлАТ и АсАТ, непропорционально уменьшается при разбавлении. Однако не всегда линейная область определения набора позволяет охватить весь диапазон физиологических концентраций аналита. Надо стремиться разбавлять пробу минимально, желательно, в 2–3 раза (особенно при определении активности ферментов) и не больше, чем указано в инструкции. Разумеется, для разведения нельзя использовать маленькие аликвоты (10–20 мкл); чтобы уменьшить ошибку разведения, лучше взять хотя бы 100 мкл пробы.

8.Фотометрирование следует проводить в указанном в инструкции диапазоне длин волн, отклонение может существенно снизить чувствительность метода. В случае расчета концентрации аналита или активности фермента по коэффициенту экстинкции длина волны должна точно соответствовать указанной в инструкции. Так как коэффициент экстинкции – это оптическая плотность раствора вещества с концентрацией 1 мкМ в кювете с толщиной поглощающего свет слоя 1 см при данной длине волны, то для другой длины волны значение его будет иным и может значительно отличаться.

9.Длина оптического пути кюветы для фотометрирования должна соответствовать указанной в инструкции. Использование кюветы с меньшей длиной оптического пути снизит чувствительность метода.

10.При построении калибровочных кривых необходимо делать не менее 4–5 параллельных определений холостой пробы и каждого стандартного образца указанной в инструкции концентрации. Строить калибровочную кривую следует для каждой серии набора, а также при смене фотометрического оборудования.

11.Калибровочную пробу, используемую для расчета концентрации аналита или активности фермента, необходимо ставить для каждой серии анализов в четырех параллелях.

14

12.Следует тщательно мыть посуду, пипетки, наконечники и многократно ополаскивать их дистиллированной водой. Для мытья можно использовать только моющие средства, не содержащие биодобавки, т. к. в их состав входят протеазы, которые даже в следовых количествах могут разрушить ферменты в реакционной смеси. Особенно тщательно следует отмывать перекись водорода, используемую для обеззараживания пробирок

инаконечников. Н2О2 является одним из продуктов сопряженных ферментативных реакций при определении глюкозы, холестерина, триглицеридов

ит.д. Поэтому наличие экзогенного пероксида водорода завысит результаты анализа.

13.Необходимо следить за качеством дистиллированной воды, используемой в процессе анализа. Избыток некоторых ионов, входящих в ее состав, может ингибировать ферменты.

14.При работе с ферментативными наборами так же, как и при работе с другими наборами реагентов, желательно, а при отборе проб малых объемов (30–10 мкл) обязательно следует пользоваться проверенными автоматическими микродозаторами. Наконечники к ним лучше повторно не использовать, особенно те, которыми проводили отбор сыворотки и затем обеззараживали пероксидом водорода, по указанным выше причинам. При отборе калибратора использовать только новые наконечники.

15.Для получения достоверных результатов очень важен преаналитический этап. По литературным источникам доля ошибок доаналитического этапа в общем числе лабораторных ошибок составляет не менее 50 %. На долю аналитического этапа приходится не более 20 % ошибок, при этом значительная часть их связана с отсутствием стандартов на выполнение операций доаналитического этапа. На долабораторном этапе большое значение имеет процедура взятия крови у пациента, транспортировка в лабораторию, пробоподготовка и хранение пробы до анализа. Неумелое взятие крови может привести к ложным результатам. В качестве примера можно привести следующие факторы доаналитического этапа, которые могут существенно повлиять на результаты определения активности ферментов. Так, продолжительный веностаз может привести к гипоксии и увеличению проницаемости мембран клеток крови, что скажется на активности ряда ферментов. Другой негативный фактор – гемолиз; при длительном стоянии крови появляющиеся активные радикалы кислорода и дефицит субстратов приводят к порозности мембран эритроцитов. Гемолиз, освобождение ферментов из лейкоцитов и тромбоцитов могут привнести заметные изменения в активность ЛДГ, АсАТ, АлАТ, кислой фосфатазы в сыворотке. ЛДГ и кислая фосфатаза присутствуют в высоких концентрациях в тромбоцитах, поэтому активность этих ферментов в сыворотке выше, чем в плазме. При свертывании крови в сыворотке появляются ферменты из тромбоцитов, в частности кислая фосфатаза, поэтому при работе с сывороткой рекомендуется как можно быстрее отделить ее от сгустка.

15

Механические повреждения клеток крови (например, вследствие выпускания крови из шприца в пробирку с силой или интенсивного встряхивания при перемешивании) также могут сказаться на результатах определения активности ферментов. Хранение сыворотки также неблагоприятно сказывается на результатах определения активности многих ферментов (они занижаются), поэтому следует измерять активность ферментов в сыворотке в день взятия крови у пациента. Длительное хранение крови приводит к активации протеолиза, потери четвертичной структуры вследствие негативного влияния на SH-группы, что сказывается на активности ферментов.

16. Следует строго соблюдать условия хранения ферментативных наборов и их компонентов, указанные в инструкции, т. к. ферменты – термолабильные катализаторы. Хранение их при более высокой температуре, например в комнате вместо холодильника, может привести к быстрой инактивации ферментов. Амилаза, липаза, лейцинаминопептидаза (ЛАП), ГГТ, холинэстераза, кислая фосфатаза устойчивы при хранении, стабильность других ферментов варьирует. Многие ферменты можно хранить в замороженном состоянии и в виде лиофилизатов без потери активности, однако некоторые ферменты чувствительны к процедуре замораживания, их можно замораживать только после добавления стабилизаторов, сохраняющих их структуру. Это связано с тем, что вода при кристаллизации вызывает необратимые изменения в водородных связях белка. Например, уреаза при замораживании частично или полностью инактивируются. Особенно чувствительны к процедуре замораживания ферменты, состоящие из нескольких субъединиц. Не допускается при хранении несколько раз замораживать и размораживать пробы.

17. Следует регулярно проверять правильность и воспроизводимость результатов анализа по контрольным сывороткам, аттестованным соответствующими методами. В случае определения активности ферментов учитывать, каким рекомендациям соответствует используемый метод.

Многие из перечисленных выше правил применимы и просты в выполнении. В то же время их соблюдение гарантирует высокую точность и воспроизводимость результатов.

СПОСОБЫ ВЫРАЖЕНИЯ АКТИВНОСТИ ФЕРМЕНТОВ

Каталитическая активность фермента – это способность фермента превращать большое количество молекул субстрата, в то время как сам он к концу реакции остается неизменным. Ферменты различаются по своей каталитической способности. Например, 1 моль трипсина осуществляет 102 цикла в секунду, глюкозоксидаза – 17 × 103 циклов в секунду и т. д. Это называется «числом оборотов фермента». Число оборотов варьирует от 1 до 106 в зависимости от природы фермента. Каталитическую активность ферментов выражают в единицах активности.

16

Международная единица активности (МE) – это количество фер-

мента, которое катализирует превращение 1 мкмоля субстрата в 1 минуту в оптимальных условиях.

Единица активности в системе СИ (катал) – соответствует количе-

ству фермента, которое катализирует превращение 1 моля субстрата в 1 секунду в оптимальных условиях.

Соотношение между единицами активности: 1 МE = 16,67 нанокатал;

1 катал = 6 × 107 МE.

В медицине активность ферментов выражают чаще всего в единицах активности на 1 л биологической жидкости.

Удельная активность фермента – это активность, выраженная в единицах активности на 1 мг (или 1 г) белка или 1 мг (1 г) препарата фермента. Используется в биохимической практике.

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОТДЕЛЬНЫХ ФЕРМЕНТОВ

Алкогольдегидрогеназа

Алкогольдегидрогеназа (АДГ; КФ 1.1.1.1.) печеночный цитоплазматический фермент, класса оксидоредуктаз. АДГ является цинксодержащем ферментом и преимущественно располагается в центролобулярном регионе печени. Алкогольдегидрогеназа способна нейтрализировать небольшие дозы алкоголя. Содержится в организме южных народов, но почти отсутствует у северных, в том числе у украинцев, русских. Фермент катализируюет в присутствии НАД окисление спиртов и ацеталей до альдегидов и кетонов.

Идентифицированы изоферменты АДГ, специфичные для печени, слизистой желудка и почек. В больших количествах фермент находится лишь в печени, но небольшие его количества содержат почки. Следы фермента также обнаруживаются в сердечной и скелетной мускулатуре человека. В сыворотке крови здорового человека отсутствует. Активность АДГ ответственна за метаболическое превращение метанола и этиленгликоля в токсические соединения. Этот эффект тормозится введением этанола. Изоферментный спектр алкогольдегидрогеназы печени отражает патологические изменения в организме, что используется для диагностических целей. АДГ – семейство тесно связанных ферментов с выраженным полиморфизмом, что может влиять на скорость выведения этанола. Резкое повышение содержания фермента наблюдается при острых гепатитах (при этом его показатели приходят к норме раньше, чем показатели трансаминаз). При обтурационной желтухе, циррозах печени, инфаркте миокарда, мышечной дистрофии Эрба обычно не наблюдается повышения активности фермента в крови. Цианиды, йодоацетат тормозят действие эн-

17

зима. Является специфическим для клеток печени. Появление его в сыворотке крови свидетельствует о повреждении клеток печени. Служит критерием выраженности гепатоцеллюлярного некроза и внутрипеченочного холестаза. АДГ рассматривается как высокочувствительный маркер аноксии печени с поражением центров долек. Изоформы алкогольдегидрогеназы имеют большое значение в дифференциальной диагностике заболеваний печени. Так, АДГ1 повышается при вирусных гепатитах, АДГ2 – при алкогольных гепатитах, активности АДГ3 так же, как и АДГ2, чаще увеличиваються при циррозе печени. Референтные пределы: <2,8 МЕ/л · 0,017 [<0,05 мккат/л].

Альдолаза

Альдолаза (фруктозобисфосфат-(фруктозодифосфат)-альдолаза; КФ 4.1.2.13) – фермент, относящийся к лиазам, катализирующий превращение фруктозо-1,6-дифосфата (бисфосфата) в дигидроксиацетонфосфат и глице- ральдегид-3-фосфат в процессе гликолиза. Фермент играет важнейшую роль в энергетическом обмене. Молекулярная масса фермента 147–180 кДа, состоит из двух полипептидных цепей. Альдолаза присутствует во всех тканях организма. Генетически обусловленная неполноценность альдолазы является причиной наследственной непереносимости фруктозы.

В норме в сыворотке крови активность альдолазы составляет от 0,0038 до 0,02 (в среднем 0,012) мкмоль фруктозо-1,6-дифосфата, превращенного ферментом, содержащимся в 1 мл сыворотки крови, за 1 мин при 37 °С.

Активность альдолазы в крови служит дополнительным диагностическим признаком ряда заболеваний. В ткани злокачественных опухолей фермент в несколько раз активнее, чем в неизмененных тканях, в эритроцитах активность фермента в 100 раз выше, чем в сыворотке крови, гемолиз существенно искажает результаты анализа. При ряде заболеваний (прогрессирующая мышечная дистрофия, инфаркт миокарда, активный ревматизм, рак, поражения печени и др.) активность альдолазы в крови повышается, причем тем значительнее, чем тяжелее протекает болезнь.

В качестве унифицированного метода определения альдолазы принят метод Товарницкого–Валуйской, основанный на том, что продукты расщепления фруктозо-1,6-фосфата альдолазой при реакции с 2,4-динитрофенилгидразином образуют гидразоны, окрашенные в щелочной среде. Интенсивность окраски пропорциональна активности фермента.

Альфа-амилаза

Альфа-амилаза (1,4-α-D-глюкан глюканогидролаза; КФ 3.2.1.1) относится к группе гидролаз, катализирующих гидролиз полисахаридов, содержащих α-D-глюкозу до простых моно- и дисахаридов (мальтоза, глюкоза). Атакуются связи между 1 и 4 атомами углерода, связи в полисахари-

18

дах между α-1,6-связями не атакуются ферментом. Существует второй тип амилазы – β-амилаза (выделена из растений и бактерий); она способна расщеплять только терминальные связи на концах углеводов. Высокая активность фермента обнаруживается в печени, скелетных мышцах, в микроворсинках энтероцитов, слезной жидкости, секрете молочных желез. Активность амилазы найдена также в различных опухолях. Наиболее богаты амилазой поджелудочная и слюнные железы. Амилаза секретируется в кровь главным образом из этих органов. Плазма крови человека содержит альфа-амилазы двух изозимных типов: панкреатическую (Р-тип), вырабатываемую поджелудочной железой, и слюнную (S-тип), продуцируемую слюнными железами. В физиологических условиях амилаза сыворотки крови состоит на 40 % из панкреатической амилазы и на 60 % из слюнной амилазы. На электрофореграммах каждый из этих изоферментов выявляется в виде двух основных фракций. Изоферменты слюнных желез имеют более низкую изоэлектрическую точку (ИЭТ) и при электрофорезе мигрируют быстрее. Определение содержания каждого изофермента амилазы возможно произвести с помощью иммунологических методов. При этом используют моноклональные антитела к изоферментам слюнных желез, которые избирательно ингибируют активность слюнной амилазы. Активность, измеренная после ингибирования, соответствует активности панкреатического изофермента. Вычитая из общей активности амилазы активность панкреатической амилазы, можно получить значение активности изофермента слюны.

Оба изофермента амилазы имеют молекулярную массу около 45 кДа, поэтому фильтруются в почках и экскретируются с мочой. Тем не менее, в составе мочи больший удельный вес приходится на панкреатический изофермент.

Уровень активности альфа-амилазы в норме: в сыворотке 25–220 МЕ/л; в моче 10–490 МЕ/л (Назаренко Г.И. и др., 2002).

Определение активности альфа-амилазы имеет большое значение в диагностике заболеваний поджелудочной железы. Повышение активности альфа-амилазы в сыворотке крови в 2 и более раз должно расцениваться как симптом поражения поджелудочной железы. Небольшая гиперамилаземия дает основание заподозрить патологию поджелудочной железы, но иногда наблюдается при заболеваниях других органов. С мочой выделяется в основном Р-амилаза, что является одной из причин большей информативности о функциональном состоянии поджелудочной железы уроамилазы, чем амилазы сыворотки крови. Полагают, что 65 % амилазной активности мочи обусловлено панкреатической амилазой. Этим объясняется то обстоятельство, что при остром панкреатите именно ее содержание увеличивается в сыворотке (до 89 %) и особенно в моче (до 92 %) без изменения показателей амилазы слюнных желез. При остром панкреатите активность амилазы крови и мочи увеличивается в 10–30 раз. Гиперамилаземия наступает в начале заболевания (уже через 4–6 ч), достигает максимума через

19

12–24 ч, затем быстро снижается и приходит к норме на 2–6-й день. Уровень повышения сывороточной амилазы не коррелирует с тяжестью панкреатита.

Гиперамилазурия у 75 % больных с острым и обострением хронического панкреатита регистрируется в период до 8 ч от начала заболевания, у 50 % больных – через 8–12 ч, у 25 % – через 12–18 ч, у 66,6 % – через 18– 24 ч, у 75 – через 24–36 ч, у 100 % – через 36–48 ч и у 62,5 % – через 48– 72 ч. Диагностическая чувствительность определения амилазы в сыворотке крови для острого панкреатита составляет 95 %, специфичность – 88 %.

Острые панкреатиты могут протекать без повышения активности амилазы (в частности, при панкреонекрозе). В первые сутки от начала заболевания нормальный уровень амилолитической активности мочи выявляется у 25 % больных абортивным панкреатитом, у 20 % – жировым и у 10 % – геморрагическим. Более точную информацию получают при исследовании активности амилазы в суточном объеме мочи. Важное, а в ряде случаев и решающее значение для распознавания рецидивирующей формы острого панкреатита имеет повторное повышение активности амилазы крови и мочи во время повторяющихся рецидивов болевого синдрома. Данный признак имеет исключительно большое значение для распознавания легких форм рецидивирующего острого панкреатита. Поэтому следует еще раз подчеркнуть необходимость повторных исследований активности альфа-амилазы мочи на протяжении первых двух суток заболевания.

При различных формах острого панкреатита динамика повышения аль- фа-амилазы в крови и моче носит различный характер. Так, для абортивного (отечного) панкреатита характерна кратковременная амилаземия в 1-е–3-и сутки заболевания; для жирового панкреонекроза – высокая и длительная амилаземия, а для геморрагического панкреонекроза – кратковременная гиперамилаземия на 3-и сутки заболевания. Патогенетически гиперамилаземия развивается в результате блокады отечной интерстициальной тканью выводных протоков поджелудочной железы и наиболее характерна для жирового панкреонекроза. При геморрагическом панкреонекрозе отмечают резкое повышение активности альфа-амилазы в крови с последующим быстрым ее снижением, что отражает прогрессирование некроза в поджелудочной железе.

Выявление гиперамилаземии и гиперамилазурии является важным, но не специфическим для острого панкреатита; кроме того, повышение активности фермента может быть кратковременным. Для повышения информативности полученных результатов исследования полезно определение активности амилазы крови и мочи сочетать с параллельным определением концентрации креатинина в моче и сыворотке крови. На основании этих данных рассчитывают индекс амилазо-креатининового клиренса по формуле

АМ · КРС · 100 / (КРМ · АС),

20