V_N_Kovalev_Praktikum_po_farmakognozii

Макро и микроскопический анализ ЛРС, содержащего полисахариды		6 1

?

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ

1.Перечислите ЛРС, содержащее слизи. Назовите латинские названия ЛРС, ЛР и семейства.

2.Перечислите ЛРС, содержащее пектиновые вещества. Назовите латинские названия ЛРС, ЛР и семейства.

3.Какие виды алтея (подорожника, ламинарии) разрешены к использованию? Назовите латинские названия ЛРС, ЛР и семейства.

4.Охарактеризуйте состояние сырьевой базы и особенности заготовки сырья следующих ЛР: алтея, подорожника большого, подорожника блошного, мать-и-мачехи, льна, липы, малины и ламинарии.

5.Охарактеризуйте особенности сушки и хранения сырья алтея, подорожника большого, подорожника блошного, мать-и-мачехи, льна, липы, малины, ламинарии.

6.Назовите возможные примеси к алтею лекарственному, подорожнику большому, мать-и-мачехе.

7.Приведите основные анатомические диагностические признаки корней алтея, листьев алтея лекарственного, листьев подорожника большого.

8.Какой гистохимической реакцией обнаруживают слизь в корнях алтея и семенах льна?

9.Как получить слизи из семян подорожника блошного и льна?

10.Назовите препарат из свежей травы подорожника большого и блошного, расскажите о его применении.

11.Перечислите сырьевые источники крахмала.

12.Перечислите сырьевые источники инулина.

13.Перечислите сырьевые источники камедей.

14.Назовите препараты на основе полисахаридов, которые обладают отхаркивающим действием.

15.Назовите препараты на основе полисахаридов, которые обладают слабительным действием.

16.Назовите препараты на основе полисахаридов, которые обладают противоязвенным и репаративным действием.

17.Какое применение имеют полисахариды?

18.Какие особенности строения имеют тиогликозиды? Назовите ЛРС, содержащее тиогликозиды.

19.Какие особенности строения имеют цианогликозиды? Назовите ЛРС, содержащее цианогликозиды.

20.Сделайте заключение о качестве сырья «Слоевища ламинарии» на основании следующих числовых показателей: влаги — 19 %; золы общей — 25 %; слоевищ с пожелтевшими краями — 18 %; посторонних примесей: органической (водоросли других видов и пр.) — 5 %; минеральной (ракушки, камешки и пр.) — 0,5 %.

ТЕМА

3Липиды

Липидами называют органические соединения — жиры и жироподобные вещества, неоднородные по химическому строению, которые имеют общие физико-химические свойства, а именно: они не растворимы в воде и растворимы в органических растворителях.

Липиды условно делят на истинные жиры (глицериды высокомолекулярных жирных кислот) и жироподобные вещества, или липоиды (воски, фосфолипиды, гликолипиды и т. д.).

По биологическому значению липиды разделяют на резервные и структурные. По физико-химическим свойствам выделяют: а) неполярные (нейтральные) и полярные липиды; б) омыляемые (жиры, воски, сложные липиды) и неомыляемые (изопреноиды, каротиноиды, простагландины и т. п.) липиды.

Истинные жиры. Наиболее распространенные соединения среди липидов. Они представлены в основном триглициридами жирных кислот. Сложные эфиры могут быть образованы одной кислотой (простые триацилглицериды) или разными кислотами (смешанные триацилглицериды). Природные жиры – это в основном смешанные триацилглицериды. Общая формула жиров:

где R′, R′′, R′′′ — остатки жирных кислот.

Жирные кислоты, которые встречаются в природе, можно разделить на три группы:

—насыщенные;

—мононенасыщенные (с одной двойной связью);

—полиненасыщенные (с двумя и более двойными связями).

В жирах всегда содержатся сопутствующие вещества, которые растворяются в них и влияют на внешний вид жира, физико-химические и фармакологические свойства. Они составляют так называемый неомыляемый остаток жира, величина которого не превышает 2—3 %. К ним относятся пигменты

Липиды		6 3

(хлорофилл, ксантофилл, каротиноиды), стерины (фитостерин, холестерин, эргостерол и др.), жирорастворимые витамины (витамины А, Е, D, К, F) и другие вещества.

Жиры представляют собой смесь глицеридов высокомолекулярных жирных кислот.

Их классификация представлена на рис. 3.1.

Рис. 3.1. Схема классификации жиров

Жиры получают: жидкие — прессованием или экстракцией; твердые — вытапливанием.

Липоиды (жироподобные вещества). К липоидам относятся:

воски, фосфолипиды, гликолипиды и липопротеиды.

Воски представляют собой простые липиды. По химическому строению — это сложные эфиры жирных кислот и высших одноатомных спиртов. В их состав наиболее часто входят цетиловый и мирициловый спирты, пальмитиновая и стеариновая кислоты. Кроме эфиров, воски содержат свободные спирты, свободные кислоты и углеводороды. Они делятся:

—на животные (пчелиный воск, спермацет, ланолин);

—растительные (карнаубский воск).

По консистенции воски бывают мягкие и твердые.

Пчелиный воск (Cera), содержащий в основном мирицилпальмитат, используют для приготовления мазей, паст и косметических препаратов.

Ланолин (Lanolinum, Adeps Lanae) состоит главным образом из спиртов — холестерола и изохолестерола, как свободных, так и в виде сложных эфиров церотиновой и пальмитиновой кислот. Он нерастворим в воде, но в отличие от других восков способен образовывать стойкие эмульсии с двойным количеством воды. Это позволяет использовать ланолин как мазевую основу и вводить в состав мазей водорастворимые лекарственные вещества.

Спермацет (Cetaceum) состоит на 98 % из цетина (цетилпальмитина). Используют в фармации и парфюмерии как основу для мазей, суппозиториев, кремов и т. д.

У фосфолипидов в отличие от истинных жиров один гидроксил глицерина этерифицирован кислотой ортофосфорной, которая, в свою очередь, соединена эфирной связью с аминоспиртами (лецитин, кефалин) или веществами, не содержащими азот (гликоспирт инозит — инозитфосфатиды).

6 4			Тема 3. Липиды
	Гликолипиды — соединения, у которых один гидроксил глицерина связан

с углеводным остатком (глюкоза, манноза, арабиноза, олигосахарид или инозит).

Липопротеиды — биологические комплексы жиров и белков.

Биологическое действие и применение жиров. В фармацевтическом производстве жиры используют как основу для мазей, суппозиториев, эмульсий. Жирные масла служат растворителями камфоры, гормонов, других жирорастворимых веществ. Самостоятельное фармакологическое применение жиров зависит от содержания эссенциальных жирных кислот и сопутствующих веществ. Жирные масла, содержащие ненасыщенные жирные кислоты, проявляют гипохолестеринемическую активность и используются как пищевые добавки для профилактики атеросклероза.

Анализ жирных масел

Задание 1. Проведите количественное определение липидов

вобразце лекарственного растительного сырья. Запишите в лабораторном жур нале результаты анализа.

Методы количественного определения липидов сводятся к выделению их путем обработки сырья органическим растворителем. В качестве растворителя используют гексан, этиловый или петролейный эфир, хлороформ, хлористый метилен и другие низкокипящие растворители.

Извлечение липидов проводят в аппарате Сокслета (рис. 3.2), который состоит из трех частей: приемной колбы, собственно экстрактора и холодильника. На экстракторе имеются две трубки: одна служит для отвода паров растворителя из приемника; вторая — является сифоном, по которому экстракт, содержащий липиды, переливается

вприемную колбу.

Методика. На аналитических весах взвешивают пакет из фильтровальной бумаги и заворачивают в него 5,0 г предварительно взвешенного на ручных весочках измельченного сырья. Пакет с сырьем взвешивают на аналитических весах, а затем помещают в экстрактор. Перед тем как собрать прибор, необходимо также взвесить на аналитических весах приемную колбу, высушенную до постоянной массы.

После соединения всех частей аппарата через холодильник наливают растворитель до тех пор, пока жидкость не перельется через сифон в приемник, а затем в экстрактор еще доливают растворитель примерно на 1/3 объема.

Приемник с растворителем нагревают на кипящей водяной бане. Пары растворителя поднимаются по трубке в холодильник, конденсируются и стекают в экстрактор на пакет с сырьем. Когда экстрактор наполняется жидкостью до высоты сифона, жидкость сливается в приемник. Весь этот процесс продолжается до полноты извлечения жирного масла.

NB! Извлечение необходимо проводить осторожно, не нагревая растворитель выше 60 °С. Он должен

Рис. 3.2. Аппарат Сокслета:

1 — экстрактор; 2 — патрон с сырьем; 3 — холодильник; 4 — приемная колба; 5 — водяная баня

Анализ жирных масел		6 5

кипеть равномерно, так как при сильном нагревании часть паров растворителя не успевает конденсироваться в холодильнике и улетучивается.

Полноту извлечения жиров определяют по отсутствию жирного пятна на фильтровальной бумаге от нескольких капель извлечения.

По достижении полноты извлечения растворитель отгоняют. Приемную колбу с содержимым высушивают в сушильном шкафу при 90—95 °С до постоянной массы и взвешивают. Зная массу пустого приемника и приемника с жиром, вычисляют содержание липидов Х, %, в сырье по формуле

(А – Б) . 100 Х = ———————— ,

В

где А — масса приемника с жиром, г; Б — масса пустого приемника, г; В — навеска сырья, г.

Задание 2. Проведите органолептический анализ образца жирного масла, испытания на подлинность и на чистоту. Запишите в лабораторном журнале ваши наблюдения и сделайте вывод по результатам анализа.

Органолептический контроль жирных масел осуществляется по общей фармакопейной статье «Масла жирные — Olea pinguia». При исследовании жирных масел определяют цвет, запах, вкус, растворимость и числовые показатели.

Опыт 1. Описание. Прозрачные, обычно более или менее окрашенные маслянистые жидкости без запаха или со слабым характерным запахом.

Жирные масла на бумаге оставляют жирное пятно, не исчезающее при нагревании, в отличие от пятен эфирных масел.

Методика. На лист фильтровальной бумаги стеклянной палочкой наносят одну каплю жирного масла и нагревают бумагу над электрической плиткой. Пятно жирного масла при нагревании увеличивается в диаметре.

Опыт 2. Растворимость. Жирные масла практически нерастворимы в воде, мало растворимы в спирте, легко — в эфире, хлороформе, петролейном эфире. Исключение составляет касторовое масло, легко растворимое в спирте, трудно — в петролейном эфире. Эта особенность используется как показатель подлинности и доброкачественности касторового масла.

Методика. Навеску 1,0 г жирного масла вносят в отмеренное количество растворителя и непрерывно встряхивают в течение 10 мин при 20±2 °С.

Для медленно растворимых препаратов, требующих для своего растворения более 10 мин, допускается также нагревание на водяной бане до 30 °С. Наблюдения производят после охлаждения раствора до 20±2 °С и энергичного встряхивания в течение 1—2 мин.

Препарат считают растворившимся, если в растворе при наблюдении в проходящем свете не обнаруживаются капли масла.

Опыт 3. Установите подлинность касторового масла по растворимости.

Впробирку наливают 2 мл петролейного эфира, 4 мл касторового масла

иперемешивают в течение 10 мин. Должен образоваться прозрачный раствор, который мутнеет при дальнейшем прибавлении избытка петролейного эфира.

Опыт 4. Определите посторонние масла в касторовом масле по ГФ Х. Смешивают в пробирке равные объемы касторового масла и 96 %-ного

спирта при температуре 20 °С. Полное растворение касторового масла указывает на отсутствие посторонних масел.

Опыт 5. Парафин, воск, смолы. 1 мл масла нагревают с 10 мл 0,5 м спиртового раствора калия гидроксида при непрерывном взбалтывании. При этом

6 6		Тема 3. Липиды

омыление наступает очень быстро. Полученный прозрачный раствор не должен мутнеть от добавления 25 мл воды.

Опыт 6. Перекиси, альдегиды (проба Крейса). 1 мл масла взбалтывают в течение 1 мин с 1 мл кислоты хлористоводородной концентрированной, прибавляют 1 мл эфирного раствора флороглюцина (1:1000) и перемешивают. Появление розового или красного окрашивания указывает на наличие разложившегося масла, присутствие которого не допускается.

Опыт 7. Мыла. Для жирных масел, не применяемых для приготовления инъекционных растворов, реакцию на присутствие мыла проводят следующим образом: 50 мл воды, смешанной с 10 каплями раствора фенолфталеина, кипятят в конической колбе вместимостью 250 мл в течение 1 мин, при этом раствор должен оставаться бесцветным. Затем к горячей воде приливают 5 г масла и кипятят еще 5 мин, после чего жидкость охлаждают до комнатной температуры, ставят на лист белой бумаги и прибавляют еще 10 капель раствора фенолфталеина. Полученный раствор должен быть бесцветным, что указывает на отсутствие мыла или содержание его не более 0,01 %.

Задание 3. Проведите качественные реакции на семенные и косточковые масла и реакции подлинности рыбьего жира. Запишите наблюдения и вывод в лабораторный журнал.

Опыт 8. Реакция на семенные масла (реакция Беллиера). В пробирку наливают 2 мл исследуемого масла, осторожно наслаивают по 1 мл кислоты азотной (плотность 1,4) и 0,15 %-ного раствора резорцина в бензоле. Содержимое энергично перемешивают. Жирные масла, полученные из семян, в течение 5 с дают красное или сине-фиолетовое окрашивание, которое быстро исчезает. При разделении слоев окраска переходит в бензольный слой.

Опыт 9. Реакция на косточковые масла (реакция Биберга). В пробирку помещают 2,5 мл масла, осторожно добавляют 1 мл охлажденной смеси равных объемов воды и кислот серной и азотной концентрированных.

Слабо-желтая окраска образовавшегося роствора указывает на миндальное масло, красноватый цвет — на персиковое или абрикосовое масло.

Опыты 10—11. Реакции на рыбий жир. 0,1 г жира растворяют в 1 мл хлороформа и прибавляют 5 мл раствора сурьмы (III) хлорида; появляется нестойкое голубое окрашивание (витамин А).

Раствор 1 капли жира в 1 мл хлороформа при взбалтывании с 1 каплей кислоты серной концентрированной окрашивается в сине-фиолетовый цвет, скоро переходящий в бурый (липохром).

Задание 4. В образце жирного масла или жира проведите определение плот ности и показателя преломления. Рассчитайте результат, запишите его в лабора торный журнал, сравните с данными табл. 3.1 и сделайте заключение о доброка чественности жирного масла.

Определение плотности. Метод 1. Метод применяют в случае определения плотности жидкостей с точностью до 0,001.

Методика. Чистый сухой пикнометр взвешивают до 0,0002 г, заполняют с помощью маленькой воронки дистиллированной водой немного выше метки, закрывают пробкой и выдерживают в течение 20 мин в термостате, в котором поддерживают постоянную температуру воды 20 °С с точностью до 0,1 °С. При этой температуре уровень воды в пикнометре доводят до метки, быстро отбирая излишек воды при помощи пипетки или свернутой в трубку полоски фильтровальной бумаги. Пикнометр закрывают пробкой и выдерживают в термостате еще 10 мин, проверяя положение мениска по отношению

Анализ жирных масел		6 7

Т а б л и ц а 3.1

Физические и химические показатели качества некоторых жиров

к метке. Затем пикнометр вынимают из термостата, фильтровальной бумагой вытирают внутреннюю поверхность горлышка, а также весь пикнометр снаружи, оставляют под стеклом аналитических весов в течение 10 мин и взвешивают с той же точностью.

Пикнометр освобождают от воды, высушивают, споласкивая последовательно спиртом и эфиром, удаляя остатки эфира продуванием воздуха (су-

6 8		Тема 3. Липиды

шить пикнометр путем нагревания не допускается). Заполняют пикнометр образцом исследуемого жирного масла и затем производят те же операции, что и с дистиллированной водой.

Плотность ρ20, г/см3, вычисляют по формуле

(m2 – m) . 0,99703

ρ20 = ——————————— + 0,0012, m1 – m

где m — масса пустого пикнометра, г;

m1 — масса пикнометра с дистиллированной водой, г;

m2 — масса пикнометра с испытуемым образцом жирного масла, г;

0,99703 — значение плотности воды при 20 °С (в г/см3 с учетом плотности воздуха);

0,0012 — плотность воздуха при 20 °С и барометрическом давлении 1011 гПа (760 мм рт. ст.).

Метод 2. Применяют для определения плотности твердых жиров и воска. Методика. Точно взвешивают пустой пикнометр, затем взвешивают тот же пикнометр, заполненный дистиллированной водой. После этого воду удаляют и пикнометр высушивают. Все операции проводят, соблюдая условия,

указанные в методе 1.

Впикнометр вливают при помощью пипетки или небольшой воронки

стонкооттянутым концом расплавленный жир или воск в таком количестве, чтобы он занимал 1/3—1/2 объема пикнометра. Пикнометр ставят на 1 ч без пробки в горячую воду, затем охлаждают до 20 °С и взвешивают; доводят до метки дистиллированной водой при 20 °С, вытирают насухо и вновь взвешивают. В обеих фазах на поверхности их раздела не должно быть пузырьков воздуха.

Плотность вычисляют по формуле

(m2 – m) . 0,99703

ρ20 = ————————————— + 0,0012, (m1 – m2) – (m + m3)

где m — масса пустого пикнометра, г;

m1 — масса пикнометра с дистиллированной водой, г;

m2 — масса пикнометра с жиром, г;

m3 — масса пикнометра с жиром и водой, г.

Определение показателя преломления. Показатель преломления ntλ среды относительно воздуха равен отношению синуса угла падения луча света в воздухе к синусу угла преломления луча света в данной среде.

Показатель преломления (индекс рефракции) определяют при помощи рефрактометра. Показателем преломления называют отношение скорости распространения света в воздухе к скорости распространения света в испытуемом веществе. Он зависит от природы вещества, температуры и длины волны света.

Методика. Рефрактометр имеет две призмы, одна из которых (верхняя) приподнимается. Перед проведением измерения на нижнюю призму наносят 1—2 капли жидкости, после чего опускают верхнюю призму и плотно ее прижимают. Пучок света с помощью зеркала направляют в верхнее окошко призмы. Наблюдая в окуляр, совмещают границу светотени со штрихом сетки. Для ахроматизации границы светотени служит компенсатор дисперсии. Отсчет показателя преломления производится с точностью до четвертого знака.

Перед каждым опытом рефрактометр необходимо проверять с помощью дистиллированной воды, имеющей показатель преломления 1,3330 при 20 °С.

Анализ жирных масел		6 9

Задание 5. Проведите анализ образца жирного масла методом тонкослой ной хроматографии. Зарисуйте схему хроматограммы в журнал, сравните ее с типовой хроматограммой жирных масел (рис. 3.3).

Рис. 3.3. Типовая хроматограмма для идентификации жирных масел:

1 — арахисовое масло; 2 — оливковое масло; 3 — кунжутное масло; 4 — кукурузное масло; 5 — миндальное масло; 6 — соевое масло; 7 — подсолнечное масло; 8 — рапсовое масло; 9 — рапсовое масло (свободное от эруковой кислоты); 10 — масло зародышей пшеницы

Методика. В качестве тонкого слоя используют октадецилсилильный силикагель для высокоэффективной тонкослойной хроматографии.

Испытуемый раствор. Около 20 мг (одну каплю) жирного масла растворяют в 3 мл метиленхлорида.

Раствор сравнения. Около 20 мг (одну каплю) масла кукурузного растворяют в 3 мл метиленхлорида.

На линию старта хроматографической пластинки отдельно наносят по 1 мкл испытуемого раствора и раствора сравнения. Пластинку дважды хроматографируют на расстояние 0,5 см, используя в качестве подвижной фазы эфир, и дважды хроматографируют на расстояние 8 см, используя в качестве подвижной фазы смесь растворителей: метиленхлорид—кислота уксусная ле- дяная—ацетон (20:40:50). Затем пластинку сушат на воздухе, опрыскивают раствором 100 г/л кислоты фосфорно-молибденовой в спирте, нагревают при температуре 120 °С в течение 3 мин и просматривают при дневном свете.

Задание 6. Проведите определение химических показателей качества образца жирного масла. Расчет результатов приведите в лабораторном журнале, сравните их с данными табл. 3.1 и сделайте заключение о доброкачественности жирного масла.

Химическими показателями качества жирных масел являются: кислотное число, число омыления, эфирное, йодное в миллиграммах, гидроксильное и перекисное числа.

Кислотное число — количество калия гидроксида в миллиграммах, необходимое для нейтрализации свободных кислот, содержащихся в 1 г масла. Оно показывает количество свободных кислот в исследуемом жире. По величине кислотного числа судят о доброкачественности жира. Свежий жир свободных кислот почти не содержит.

Методика. Около 10 г (точная навеска) жирного масла растворяют в 50 мл равных объемов спирта и эфира, предварительно нейтрализованного по фенолфталеину раствором калия гидроксида 0,1 моль/л. Прибавляют 3—5 капель фенолфталеина и титруют при постоянном помешивании раствором калия

7 0		Тема 3. Липиды

гидроксида 0,1 моль/л до появления розового окрашивания, не исчезающего

втечение 15 с.

1 мл раствора калия гидроксида 0,1 моль/л соответствует 5,61 мг калия гидроксида.

Кислотное число IA вычисляют по формуле

5,61 · n IA = ————— ,

m

где n — количество раствора калия гидроксида 0,1 моль/л, израсходованное на титрование, мл;

m — масса навески жира, г.

Если объем раствора калия гидроксида 0,1 моль/л, пошедший на титрование, менее 2 мл, то соответствующим образом увеличивают массу навески испытуемого вещества или используют более разбавленный титрант (в последнем случае вносят соответствующие изменения в формулу расчета).

Число омыления — количество калия гидроксида в миллиграммах, необходимое для нейтрализации свободных кислот и омыления сложных эфиров, содержащихся в 1 г исследуемого жира.

Т а б л и ц а 3.2	Методика. Точную навеску жира (в соответ-
	ствии с табл. 3.2) смешивают в колбе вместимос-
Выбор навески для определения	тью 200—250мл с 25 мл спиртового раствора ка-
числа омыления	лия гидроксида 0,5 моль/л.
	К колбе присоединяют обратный холодиль-
	ник и погружают ее в кипящую водяную баню на
	30 мин, поддерживая легкое кипение. Конец омы-
	ления определяют по образованию совершенно
	прозрачного и однородного раствора, не изменя-
	ющегося при разведении водой. Параллельно в тех
	же условиях ставят контрольный опыт: в другой
	колбе нагревают 25 мл спиртового раствора ка-
	лия гидроксида 0,5 моль/л без добавления жира.
	К растворам сразу же после прекращения на-
	гревания прибавляют 25 мл свежепрокипяченной
	горячей воды, прибавляют 5 капель раствора фе-
	нолфталеина и титруют раствором кислоты хло-

ристоводородной 0,5 моль/л до обесцвечивания. Из количества миллилитров раствора кислоты хлористоводородной 0,5 моль/л, израсходованной в контрольном опыте, вычитают количество миллилитров раствора кислоты хлористоводородной 0,5 моль/л, пошедшей на титрование исследуемого образца жира.

1 мл раствора калия гидроксида 0,5 моль/л содержит 28,05 мг калия гидроксида.

Число омыления IS вычисляют по формуле

28,05 · (n1 – n2) IS = ————————— ,

m

где n1 — количество раствора кислоты хлористоводородной 0,5 моль/л, израсходованное на титрование контрольного опыта, мл;

n2 — количество раствора кислоты хлористоводородной 0,5 моль/л, израсходованное на титрование испытуемого образца, мл;

m — масса навески жира, г.

Полученные результаты сравнивают с данными табл. 3.1 и делают вывод о качестве анализируемого образца жирного масла.