- •Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии
- •Часть 1
- •Методические указания к практической работе
- •Практическая работа
- •1. Ознакомиться с иммерсионной системой микроскопа
- •8. Просмотр фильмов: «Живая клетка», «l-формы бактерий», «Спора»
- •9. Просмотр фильма: «Жизнь бактериальной клетки»
- •2. Изучение мазка из культуры Bac.Anthracis, окрашенного по Гутштейну (клеточная стенка)
- •3. Изучение устройства фазово-контрастного микроскопа
- •Методические указания к практической работе
- •5. Изучение устройства темнопольной микроскопии
- •Методические указания к практической работе
- •3. Изучение и зарисовка демонстрационных препаратов грибов Mucor, Aspergillus, Penicillium
- •1. Изучение методики приготовления пластинчатого агара
- •Характеристика роста исследуемых культур
- •3. Изучение методики посева культуры на пестрый ряд
- •1. Знакомство со средами и аппаратурой для культивирования анаэробов
- •4. Итоговая контрольная работа по теме: «Физиология микроорганизмов (химический состав, питание, дыхание, питательные среды, ферменты, размножение, стерилизация, дезинфекция)»
- •Характеристика типовых штаммов, входящих в задачи
- •Характеристика выделенных культур
- •1. Знакомство с методикой забора водопроводной воды для бактериологического исследования
- •Расчет наиболее вероятного числа бактерий (нвч) в 100 мл питьевой воды централизованного хозяйственно-питьевого водоснабжения
- •Расчет наиболее вероятного числа бактерий (нвч) в 100 мл воды водоемов
- •5. Знакомство с методикой определения количество микроорганизмов в воздухе
- •2. Знакомство с устройством и работой автоклава, сухожаровой печи
- •2. Изучить методы, доказывающие спонтанные мутации у бактерии:
- •4. Зарисовать схему строения бактериофага
- •5. Определить титр бактериофага
- •Результаты титрования фага по методу Грациа
- •Интерпретация значений диаметров зон задержки роста при определении чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам (Среда агв)
- •Допустимые пределы диаметров зон задержки роста
- •Эталонных штаммов при контроле воспроизводимости
- •И точности результатов диско-диффузионного метода
- •(Среда агв)
- •Определение степени чувствительности кишечной палочки к стрептомицину
- •1. Изучение окрашенных по Граму мазков-отпечатков из органов
- •6.1. Возбудитель холеры
- •1. Зарисовка демонстрационных препаратов холероподобного и Эль-Тор вибрионов
- •Патогенез холеры
- •4. Нарисовать колонии вибрионов на средах сэдх и tcbs
- •6.2. Возбудитель чумы
- •1. Изучение мазка из чистой культуры Yersinia pestis, окраска метиленовым синим
- •2. Изучение Yersinia pestis в мазке-отпечатке из органов, окрашенном по Граму
- •3. Изучение колоний вакцинного штамма палочки чумы на среде Туманского
- •Диагностика иерсиниоза
- •Диагностика холеры
- •Бактериологическая диагностика чумы
- •Практическая работа
- •6.1. Возбудитель туляремии
- •6.2. Возбудитель бруцеллеза
- •6.3. Возбудитель сибирской язвы
- •Бактериологическая диагностика туляремии
- •Бактериологическая диагностика бруцеллеза
- •Бактериологическая диагностика сибирской язвы
- •Список сокращений
Результаты титрования фага по методу Грациа
Разведение |
Число пятен на чашке |
Титр фага |
10-9 |
3 |
3·109 |
10-8 |
38 |
38·108 |
10-7 |
сливной рост |
Не учитывается |
2. Изучить схему трансдукции у бактерий (зарисовать)
3. Изучить схему конъюгации у бактерий (зарисовать)
5. Подведение итогов занятия – 5 минут
ЗАНЯТИЕ 14
ТЕМА. Симбиоз и антагонизм. Про- и пребиотики. Антибиотики. Фитонциды
Цель занятия. Ознакомить студентов с биологическим действием антибиотиков, отметить важность выбора антибиотика для лечения, научить оценивать выбор препарата в зависимости от спектра чувствительности микроба к антибиотикам
Методические указания к практической работе
Продолжительность занятия: 3 академических часа (135 минут)
Место проведения занятия: учебная аудитория
Материально-техническое оснащение – таблицы, стенды, микроскопы, микропрепараты, вакцины
Хронометраж практического занятия:
1. Вводное слово преподавателя – 5 мин
2. Проверка исходного уровня знаний (тест-контроль) – 15 мин
3. Разбор теоретических вопросов по теме – 80 мин
Симбиоз (определение)
Формы взаимоотношений между различными группами микроорганизмов
Антагонизм (определение)
Антибиотики (определение)
Открытие антибиотиков
Антибиотики по происхождению
Антибиотики по механизму действия
Фитонциды (определение)
Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам
Пробиотики (понятие, виды, применение)
Пребиотики (понятие, виды, применение)
1. Изучение микробного антагонизма по схеме (зарисовать)
Суточную бульонную культуру тест-микроба (стафилококк, сарцина) засевают на МПА газоном. На этот же посев наносят в виде бляшек (макроколонии) культуру микроба-антагониста (сенная палочка). Посевы инкубируют в термостате 18–20 часов после чего учитывают результат и делают вывод об антагонистической активности испытуемой культуры.
2. Ознакомиться с диско-диффузионным методом (ДДМ) определения чувствительности бактерий (стафилококк и кишечная палочка) к антибиотикам (зарисовать схему). Оформить протокол
На поверхность питательного агара засевают газоном испытуемую культуру (стафилококк, кишечная палочка). Чашки приоткрывают и подсушивают при комнатной температуре 10–15 минут. Затем накладывают диски пинцетом на расстоянии 2 см друг от друга и от краев чашки. Чашки помещают в термостат для инкубации на 18–20 часов, перевернутыми кверху дном, после чего учитывают результат. Чашки помещают кверху дном на темную матовую поверхность, учет проводят в отраженном свете. С помощью линейки и измерителя определяют диаметр зон задержки роста вокруг дисков, включая диаметр дисков. Оценку результатов проводят по таблицам, которые содержат пограничные значения диаметров зон задержки роста для устойчивых, умеренно устойчивых и чувствительных микроорганизмов (табл. 9).
Таблица 9
Интерпретация значений диаметров зон задержки роста при определении чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам (Среда агв)
Противомикробные препараты в диске |
Диаметр зон для культур (в мм) | ||
устойчивых |
промежуточных |
чувствительных | |
1 |
2 |
3 |
4 |
Бензилпенициллин для стафилококков |
≤20 |
21-28 |
≥29 |
Бензилпенициллин для др. бактерий |
≤10 |
11-16 |
≥17 |
Ампициллин для стафилококков |
≤20 |
21-28 |
≥29 |
Ампициллин для грамотрицательных бактерий |
≤9 |
10-13 |
≥14 |
Карбенициллин 25 мг |
≤14 |
15-18 |
≥19 |
Карбенициллин 100 мг (для P.aeruginosa) |
≤11 |
12-14 |
≥15 |
Оксациллин 10 мкг |
≤15 |
16-19 |
≥20 |
Оксациллин 1 мкг* |
≤10 |
11-12 |
≥13 |
Азлоциллин (для P.aeruginosa) |
≤13 |
14-16 |
≥16 |
Цефалотин |
≤14 |
15-18 |
≥19 |
Цефазолин |
≤14 |
15-18 |
≥19 |
Цефуроксим |
≤14 |
15-18 |
≥19 |
Цефокситин |
≤14 |
15-18 |
≥19 |
Цефотаксим |
≤14 |
15-20 |
≥21 |
Цефтриаксон |
≤14 |
15-20 |
≥21 |
Цефоперазон |
≤14 |
15-18 |
≥19 |
Цефтазидим |
≤14 |
15-17 |
≥18 |
Цефалексин |
≤14 |
15-18 |
≥19 |
Цефаклор |
≤14 |
15-18 |
≥19 |
Цефиксим |
≤15 |
16-19 |
≥20 |
Цефтибутен |
≤17 |
18-20 |
≥21 |
Цефтизоксим |
≤14 |
15-19 |
≥20 |
1 |
2 |
3 |
4 |
Ванкомицин для энтерококков |
≤14 |
15-16 |
≥17 |
Ванкомицин для стафилококков* |
11 |
- |
12 |
Фузидин |
≤16 |
17-20 |
≥21 |
Линкомицин |
≤19 |
20-23 |
≥24 |
Клиндамицин |
≤14 |
15-20 |
≥21 |
Олеандомицин |
≤12 |
13-17 |
≥18 |
Эритромицин |
≤17 |
18-21 |
≥22 |
Азитромицин |
≤13 |
14-17 |
≥18 |
Тетрациклин |
≤16 |
17-21 |
≥22 |
Доксициклин |
≤15 |
16-19 |
≥20 |
Левомицетин |
≤15 |
16-18 |
≥19 |
Рифампицин |
≤12 |
13-15 |
≥16 |
Полимиксин |
≤11 |
12-14 |
≥15 |
Стрептомицин |
≤16 |
17-19 |
≥20 |
Канамицин |
≤14 |
15-18 |
≥19 |
Неомицин |
≤12 |
13-16 |
≥17 |
Гентамицин |
≤15 |
- |
≥16 |
Тобрамицин |
≤14 |
- |
≥15 |
Сизомицин |
≤15 |
- |
≥16 |
Амикацин |
≤14 |
15-16 |
≥17 |
Фурадонин |
≤15 |
16-18 |
≥19 |
Фурагин |
≤15 |
16-18 |
≥19 |
Ципрофлоксацин |
≤15 |
16-20 |
≥21 |
Азтреонам |
≤15 |
16-21 |
≥22 |
Пиперациллин (для P.aeruginosa) |
≤17 |
- |
≥18 |
Офлоксацин |
≤12 |
13-16 |
≥17 |
Рокситромицин* |
≤13 |
15-18 |
≥19 |
Кларитромицин* |
≤13 |
14-17 |
≥18 |
Цефомандол* |
≤14 |
15-17 |
≥18 |
Цефепим* |
≤14 |
15-17 |
≥18 |
Имипенем* |
≤13 |
14-15 |
≥16 |
Меропенем* |
≤13 |
14-15 |
≥16 |
Налидиксовая кислота* |
≤12 |
13-17 |
≥18 |
Фуразолидон |
≤14 |
15-17 |
≥18 |
Норфлоксацин |
≤12 |
13-16 |
≥17 |
Пефлоксацин |
≤18 |
19-21 |
≥22 |
Ломефлоксацин |
≤18 |
19-21 |
≥22 |
Спарфлоксацин для стафилококков |
≤15 |
16-18 |
≥19 |
Спарфлоксацин для S.pneumoniae |
≤15 |
16-18 |
≥19 |
Левофлоксацин |
≤13 |
14-16 |
≥17 |
Линезолид для стафилококков |
≤21 |
- |
≥21 |
Примечание: * - данные для среды Мюллера-Хинтон с добавлением 5% крови, для среды АГВ требуют уточнения.
Для контроля точности, качества питательных сред, дисков проводят исследование чувствительности к антибиотикам эталонных штаммов:
Staphylococcus aureus АТСС 25923
Escherichia coli АТСС 25922
Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853
Таблица 10