Основной вид иммуноглобулинов (антител), участвующих в местном иммунитете. Метод определения

Иммуноферментный анализ.

IgA секреторный - ифа - бест

РУ № ФСР 2010/07853 

Набор реагентов для иммуноферментного определения клнцентрации секреторного иммуноглобулина А (sIgA) в сыворотке крови. Чувствительность: 0,35 мг/л. Диапазон измерений: 0-20 мг/л

При наличии хронического инфекционно-воспалительного процесса незначительное или умеренное снижение концентрации IgA в крови является основанием для определения концентрации IgA и секреторного иммуноглобулина А (sIgA) в биологических жидкостях (в зависимости от локализации инфекционного процесса – слюне, слезе, цервикальной слизи, простатическом соке, др.) – это позволяет оценить защитные свойства слизистых оболочек, определить тактику лечения и в дальнейшем проводить мониторинг его эффективности. Незначительное или умеренное снижение в крови концентрации IgM у лиц пожилого возраста следует рассматривать как возрастную особенность, а не как признак патологии.

~Определение общего количества лимфоцитов, абсолютного и относительного количества В-лимфоцитов;

	Изобретение относится к медицине, конкретно к лабораторной диагностике, может быть использовано в иммунологических лабораториях при диагностике заболеваний для оценки состояния иммунной системы организма, его функциональной активности и резервных возможностей. Способ предполагает предварительное определение общего количества лимфоцитов (Лимфоцит) и относительного количества Т-лимфоцитов (Т-лимфоцит). Затем путем математических вычислений с использованием полученных методом регрессионного анализа коэффициентов пересчета вычисляют относительное и абсолютное количество 0-лимфоцитов по формулам. При этом для дошкольников используют формулы: 0-лимфоцит (%) = 93,64-1,14 Т-лимфоцит (%) и 0-лимфоцит (абс) = 1671,17 + 0,50Лимфоцит (%). Для школьников используют формулы: 0-лимфоцит (%) = 91,04-1,08T-лимфоцит (%) и 0-лимфоцит (абс) = 1360,97+0,39Лимфоцит (абс) - 28,42Т-лимфоцит (%). Способ позволяет сократить расходы и получить достоверные результаты. 4 табл., 2 ил. определение иммуноглобулинов G, А, М и Е в сыво­ротке крови; процентного и абсолютного количества В-лимфоцитов (CD 19, CD20) в периферической крови. Их определение — главный метод диагностики всех форм иммунодефицитов, связанных с биосинтезом антител, которые проявляются прежде всего в виде дли­тельно протекающих, рецидивирующих инфекций рес­пираторного тракта, хронических синуситов, отитов и др. В зависимости от формы иммунодефицита у таких боль­ных могут наблюдаться диарея, лямблиоз, кожные по­ражения, злокачественные новообразования. ДефицитIgA часто ассоциируется с аутоиммунными и аллерги­ческими заболеваниями. В последнем случае нередко по­вышен уровень IgE. Определение количества иммуноглобулинов позво­ляет судить не только о нормальном функционирова­нии В-, но и косвенно о Т-системе иммунитета. Повы­шенный уровень IgE может свидетельствовать об усиле­нии синтеза интерлейкина-4 и, следовательно, об уси­лении функции Т-хелперов. Относительное содержание В-лимфоцитов обычно увеличивается при затяжных воспалительных процессах. Для клинициста наиболее важное значение имеет анализ уровня В-лимфоцитов после окончания клинических проявлений воспалительного процесса. Во всех случаях нормализация относительного количества В-лимфоцитов указывает на полное окончание процесса. Заболевания и состояния, при которых изменяется количество CD20-лимфоцитов в крови,  Повышение относительного количества Т-лимфоцитов не имеет для клиники большого значения. Однако увеличение абсолютного количества Т-лимфоцитов в крови очень важно для диагностики лейкозов. Определение относительного и абсолютного количества В-лимфоцитов Испытуемый вакцинный штамм не должен вызывать статистически достоверного уменьшения абсолютного и относительного содержания В-лимфоцитов в крови морских свинок, иммунизированных подкожно дозами 3 4 5 х 10 и 5 х 10 м.к.

Тесты, характеризующие Т-систему иммунитета.

Главным конечным продуктом Т-лимфоцитов являются цитокины, но системы для их определения пока еще малодоступны практическим лабораториям. Тем не менее, оценка функциональной активности T-системы иммунитета представляет задачу исключительной важности, так как она может быть понижена, иногда даже существенно, при нормальном количестве T-клеток.

К тестам 1-го уровня оценки T-системы иммунитета можно отнести определение:

общего числа лимфоцитов

процента и абсолютного числа зрелых T-лимфоцитов

К тестам 2-го уровня для оценки T-системы иммунитета относят определение:

продукции цитокинов (интерлейкина, интерферона, фактора некроза опухоли и др.)

пролиферативного ответа на специфические антигены, чаще всего на дифтерийный и столбнячный анатоксины

аллергической реакции с помощью кожных тестов с рядом микробных антигенов

Без сомнения, определение продукции цитокинов лимфоцитами и макрофагами должно стать главным методическим приемом в иммунодиагностике заболеваний, связанных с нарушениями иммунной системы. Идентификация цитокинов в ряде случаев позволит более точно установить диагноз заболевания и механизм иммунного нарушения.

~ Определение абсолютного и относительного количества Т-лимфоцитов и их субпопуляций с помощью метода иммунофлюоресценции с использованием моноклональных антител (СО2, СЭЗ. СВ4 и СБ8, хелперно-супрессорного индекса; РБТЛ и РТМЛ).

Абсолютное и относительное содержание Т-лимфоцитов (СD3). Главную роль в иммунных реакциях играют Т-лимфоциты, которые посредством клеточных рецепторов распознают антигены. Поэтому их называют антигенреактивными, или иммунокомпетентными клетками. Снижение этого показателя может свидетельствовать о нарушении в клеточном звене иммунитета. Однако многообразие функций, которые выполняют Т-лимфоциты в рамках реализации иммунного ответа, связано с существованием различных их субпопуляций. Показатели у здоровых лиц, принятые в качестве региональной нормы (по данным авторов): абсолютное количество T-лимфоцитов (CD3) — 1,42 ± 0,13 х 10⁹/л, референтные величины — 0,59–2,88 х 10⁹/л; относительное количество T-лимфоцитов (CD3) — 73,10 ± 1,46 %, референтные величины — 56–83 %. Как правило, исследование лимфоцитов в лаборатории включа­ет этап выделения фракции мононуклеарных лейкоцитов из перифе­рической крови. С этой целью используют метод градиентного цен­трифугирования. Кровь больного (кровь берут из вены в раствор гепарина) разводят в 2 раза забуференным изотоническим раствором натрия хлорида, не содержащим ионов Mg и Са, и осторожно наслаивают на раствор фикола. В последний для увеличения его плот­ности добавляют рентгеноконтрастный препарат для внутривенного введения (например, верографин, гипак, триозил и др.). В резуль­тате между плазмой и раствором фикола образуется ступенчатый гра­диент плотности. После центрифугирования эритроциты и гранулоциты проходят сквозь фикол и оседают на дно, а мононуклеары (лим­фоциты и моноциты) остаются в виде кольца в интерфазе. Клетки собирают пипеткой, отмывают, переносят в культуральную среду и исследуют с помощью различных методов.

~Тесты, характеризующие систему комплемента.

 Система комплемента - это совокупность белков сыворотки крови, циркулирующих в неактивном состоянии, в активированном состоянии участвуют в процессах нейтрализации вирусов, бактерий и др. Содержание и уровень комплемента в крови можно использовать как тест, характеризующий состояние естественной резистентности макроорганизма : высокое содержание комплемента в крови считается благоприятным признаком; снижение уровня комплемента является отрицательным прогностическим показателем.

Показатели, характеризующие состояние системы комплемента.

      Функции:  Это совокупность белков плазмы крови, входящая в систему врождённого иммунитета, участвующая в реализации способности организма отличать «своё» от «чужого».

Компоненты системы комплемента играют важную роль в развитии иммунного ответа и реакции воспаления, участвует в каскадных реакциях активации, взаимодействуя в определенной последовательности с комплексами антиген-антитело, друг с другом, клеточными мембранами. Результатом активации системы комплемента является разрушение вирусов и бактерий; в патологических случаях может наблюдаться повреждение клеток собственного организма. К эффектам комплемента относят опсонизацию патогенных агентов (изменение их поверхности, способствующее в дальнейшем фагоцитозу), запуск цитолиза бактериальных клеток, активацию хемотаксиса лейкоцитов, влияние на тонус гладкой мускулатуры, стимуляцию выброса биологически активных веществ базофилами и др. 

С3 - центральный компонент системы комплемента, белок острой фазы воспаления. Это важнейшая часть защитной системы против инфекций. Он образуется в печени, макрофагах, фибробластах, лимфоидной ткани и коже. Поэтому нарушение их нормального состояния существенно влияет на этот комплимент. С3 составляет около 70% всех белков системы комплимента. Молекулярная масса - около 180 000 Да. С3 компонент комплемента участвует как в классическом, так и в альтернативном пути активации системы комплемента.

С4 - гликопротеин с молекулярной массой 205 000 Да. Синтезируется в легких и в костях. Участвует только в классическом пути активации системы комплемента. С4 поддерживает фагоцитоз, увеличивает проницаемость стенки сосудов, участвует в нейтрализации вирусов. Его снижение в крови наблюдается при активном потреблении, связанном с классическим путем активации системы комплемента.

~Определение концентрации основных компонентов комплемента и их ингибиторов в сыворотке больных.

Комплемента определение проводится с целью изучить состав и функциональную активность компонентов С. К. о. обычно ведут в трех напр.авлениях: 1) определение концентрации отдельных компонентов С в с-ке крови или др. биол. материале в реакции простой радиальной иммунодиффузии по Манчини 2) определение функциональной активности классического, альтернативного пути или активности отдельных компонентов методом гемолитического титрования, что позволяет установить наличие функционально активных компонентов, готовых при необходимости вступить в реакцию активации; 3) определением концентрации продуктов активации компонентов С при каскадной реакции активации (С3 а, С5 а, C2b, C4a, Bb и др.) иммуноферментным или радиоиммунным методом можно установить, по какому пути происходит активация С. Концентрация C3 и C4 компонентов комплемента определялась методом

иммунотурбидиметрии (Roche Diagnostics, Basel, CH) и использованием автоматического биохимического анализатора Hitachi 912 (нормальные значения для С3 – 0,9-1,8 г/л, для С4 – 0,1-0,4 г/л). Исследования проводились на базе РНПЦ детской онкологии и гематологии. Концентрация С3 и С4 комплемента в сыворотке крови у детей с гломерулонефритом.

~Тесты, характеризующие состояние фагоцитарной системы.

Лабораторные критерии дефицита фагоцитоза четко не определены. Снижение активности фагоцитоза до 20% и ниже и/или отсутствие разницы между показателями спонтанного и стимулированного НСТ-теста могут быть признаками врожденного дефицита фагоцитоза.

Показатели спонтанного и стимулированного НСТ-теста, не превышающие 3%, являются основанием для подозрения на хроническую гранулематозную болезнь.Вторичный иммунодефицит фагоцитоза развивается чаще всего не столько в силу снижения функциональной активности фагоцитирующих клеток, сколько в силу снижения их количества (нейтропения, лейкопения, панцитопения). Тест с НСТ играет важную роль в диагностике хронических грануле-матозных заболеваний, которые характеризуются наличием дефектов в НАДФ-Н-оксидазном комплексе. Для пациентов с хроническими гра-нулематозными заболеваниями характерно наличие рецидивирующих инфекций (пневмония, лимфаденит, абсцессы лёгких, печени, кожи), вызываемых Staphylococcus aureus, Klebsiella spp., Candida albicans, Salmonella spp., Escherichia coli, Aspergillus spp., Pseudomonas cepacia, Mycobacterium spp. и Pneumocystis carinii. Параметры, характеризующие состояние фагоцитоза.

■ Фагоцитарное число : норма — 5-10 микробных частиц. Фагоцитарное число — среднее количество микробов, поглощённых одним нейтрофи-лом крови. Характеризует поглотительную способность нейтрофилов.

■ Фагоцитарная ёмкость крови: норма — 12,5-25х10⁹ на 1 л крови. Фагоцитарная ёмкость крови — количество микробов, которое могут поглотить нейтрофилы 1 л крови.

■ Фагоцитарный показатель: норма 65-95%. Фагоцитарный показатель — относительное количество нейтрофилов (выраженное в процентах), участвующих в фагоцитозе.

■ Количество активных фагоцитов: норма — 1,6-5,0х10⁹ в 1 л крови. Количество активных фагоцитов — абсолютное количество фагоцитирующих нейтрофилов в 1 л крови.

■ Индекс завершённости фагоцитоза: норма — более 1. Индекс завершенности фагоцитоза отражает переваривающую способность фагоцитов.

24 Биологические науки № 3, 1987 фагоцитирующих нейтррфилов не отражает существа перестроек, про­исходящих в организме под действием лечения (процентное количество этих клеток у больных соответствовало таковому у здоровых и в про­цессе лечения не менялось). В то же время наглядными были тесты,, характеризующие метаболическую активность нейтрофилов, поскольку они указывали на нормализацию функционального состояния клеток. Так, несмотря на то что спонтанный НСТ-тест постоянно выявляет у больных нейродермитом повышенное «напряжение» клетки (26±5 принорме 12±2), возрастание разницы между спонтанным и активирован­ным тестами НСТ (10±2 и 19±3) говорит от увеличении потенциальных возможностей микробоцидной системы нейтрофилов. Убедительным от­ражением положительных изменений в функции нейтрофилов и моно­цитов в ответ на проведенное лечение служат также данные об измене­ниях содержания лизоцима в сыворотке и особенно в слюне.

Тесты, характеризующие состояние фагоцитарной системы.

Определение активности и интенсивности фагоцитоза и НСТ-теста позволяет оценить состояние фагоцитарной системы, возможность участия фагоцитирующих клеток в патогенезе заболевания и определить тактику лечения.Активность фагоцитоза (ПФ - процент фагоцитоза) -отображает процент фагоцитов, способных к активному захвату частиц.Интенсивность фагоцитоза (ФЧ - фагоцитарное число) - показывает количество частиц, поглощенное одним фагоцитом.Оба эти показателя характеризуют поглотительную способность фагоцитирующих клеток крови (нейтрофиловимоноцитов).НСТ-тест спонтанный - отображает метаболический потенциал покоящихся фагоцитирующих клеток крови.НСТ-тест стимулированный - таковой же при стимуляции (аналог антигенного раздражения в организме). Разница между этими показателями (которая в норме составляет 1,5 и более раза) указывает на метаболический потенциал фагоцитов и фактически характеризует их переваривающую способность. Соответственно, снижение активности и интенсивности фагоцитоза расценивается как показатель ослабления поглотительной функции фагоцитов, метаболического резерва - как недостаточности их переваривающей функции.Снижение функциональной активности фагоцитирующих клеток кровинаблюдаются при хронических, часто рецидивирующих заболеваниях бактериальной и грибковой этиологии различной локализации, фурункулезе,туберкулезе, хронических заболеваниях лимфоглоточного кольца и дыхательных путей,пиелонефритах, пиогенных инфекциях, атопическомдерматите,бронхиальной астме,ревматизме, ряде онкопролиферативных заболеваний. Показатели спонтанного и стимулированного НСТ-теста, не превышающие 3%, являются основанием для подозрения на хроническую гранулематозную болезнь.Вторичный иммунодефицитфагоцитоза развивается чаще всего не столько в силу снижения функциональной активности фагоцитирующих клеток, сколько в силу снижения их количества (нейтропения,лейкопения, панцитопения