Методична розробка по підготовці та роботі на лабораторному занятті №30 для студентів медичного факультету

Тема: Умовно-патогенні ентеробактерії – протеї, клебсієли. Псевдомонади. Морфологія та біологічні властивості. Мікробіологічна діагностика захворювань.

Актуальність теми. Актуальність теми пов'язана з тим, що ентеробактерії та псевдомонади викликають захворювання, як правило, в умовах зниження захисних механізмів макроорганізму. Збудники можуть потрапляти із зовнішнього середовища різними шляхами, але часто викликають аутоінфекції, для яких характерно хронічний перебіг у вигляді різних клінічних форм, у тому числі і госпітальних інфекцій, лікування яких ускладнене в зв'язку з їх антибіотикорезистентністтю.

1. Цілі вивчення теми.

   0. Мета загальна. Ознайомитись із властивостями, патогенезом, принципами лабораторної діагностики захворювань, спричинених клебсієлами, протеями, псевдомонадами.

   1. Мета конкретна. Засвоїти диференційні ознаки псевдомонад, клебсієл, протеїв. Ознайомитись з методами діагностики відповідних захворювань, знати роль даних мікроорганізмів у виникненні госпітальних інфекцій.

2. Забезпечення вихідного рівня знань-умінь.

3.1. Лекції „Специфічна профілактика і терапія інфекційних хвороб”, „Сучасні методи діагностики інфекційних хвороб”.

3.2. Тести на вихідний рівень знань-умінь.

Приклад тесту.

Для діагностики захворювання, спричиненого бактеріальною інфекцією, необхідно використати всі методи крім:

А. Алергічного

В. Вірусологічного

C. Бактеріологічного

D. Бактеріоскопічного

E. Біологічного

Правильна відповідь: В – вірусологічного

4. Зміст навчання.

1. Граф логічної структури змісту.

Умовно-патогенні ентеробактерії- Клебсієли.

Родина	Enterobacteriaceae-Рід Klebsiella Klebsiella pneumoniae Klebsiella ozaenae Klebsiella rhinoscleromatis
Морфологія	форма	Гр- еліпсовидни палички
	розташування	Поодиноко, попарно або короткими ланцюжками
	спора	Немає
	руливість	Нерухома
	капсула	Є
Методи культивування	Факультативний анаероб 36º С рН - 7,0- 7,4 Живильні середовища - МПА, МПБ
Резистентність	Чутливі до дії дезінфектантів. Стійкі до низьких та високих температур (25º С – тижні, місяці )
Ферментативна активність	Сахаролітична властивість знижується від Klebsiella pneumoniae, Klebsiella ozaenae до Klebsiella rhinoscleromatis . Протеолітичні властивості: індол, Н² S не продукують.
Антигени	О- АГ : 5 серогруп К- АГ : 72 серовари
Культуральні властивості	МПБ- дифузне помутніння МПА- утворення S- форми колонії, крупні, слизисті, випуклі. Середовище Ендо, Лєвіна, Плоскірєва – колонії Klebsiella pneumoniae та Klebsiella ozaenae забарвлені в колір індикатора. Розташування клебсієл в юних колоніях: Klebsiella pneumoniae- петлеподібно Klebsiella ozaenae- спіралевидно Klebsiella rhinoscleromatis- концетрично
Методи лабораторної діагностики	Мікроскопічний ( виявлення капсули методом Буррі - Гінса, Романовського - Гімза) Бактеріологічний Серологічний ( РЗК ) Біологічний Алергічний ( алерген - склерозан)
Специфічна профілактика	Не розроблена
Специфічна терапія	Немає

Умовно-патогенні ентеробактерії- Протеї.

Родина	Enterobacteriaceae- Рід Proteus. Proteus vulgaris Proteus mirabilis Proteus rettgeri Proteus inconstans
Морфологія	форма	Гр- поліморфні палички
	розташування	Попарно або ланцюжками
	спора	Немає
	руливість	+ перитрих
	капсула	Немає
Методи культивування	Факультативний анаероб 25-37º С рН - 7,2- 7,4 Живильні середовища - МПА, МПБ
Резистентність	Стійкі до фізичних факторів та протимікробних препаратів.
Ферментативна активність	Оксидаза – Каталаза+ Ферментативна активність знижується від Proteus vulgaris до Proteus inconstans.
Антигени	О- АГ : 49 сероварів Н- АГ : 19 сероварів
Культуральні властивості	МПБ- дифузне помутніння з осадом. МПА- О- колонії (окремі S- форми з рівними краями), Н- колонії ( вигляд “ роїння ” з дочірніми відростками)
Методи лабораторної діагностики	Бактеріологічний ( посів за методом Шукевича в конденсаційну воду скошеного агару ).
Фактори вірулентності	Ендотоксин Фімбрії Джгутики Протеаза Уреаза Гемолізин

Синьогнійна паличка

Родина	Pseudomonadaceae- Рід Pseudomonas Pseudomonas aeruginosa
Морфологія	форма	Гр- палички
	розташування	Поодиноко або короткими ланцюжками
	спора	Немає
	руливість	+ монотрих, амфітрих
	капсула	Немає
Методи культивування	Облігатний аероб. 4-42º С Живильні середовища - МПА, МПБ
Резистентність	Стійкі до фізичних факторів та протимікробних препаратів.
Ферментативна активність	Сахаролітичні властивості: ферментація глюкози до кислоти. Протеолітичні властивості: індол, сірководень продукує слабо.
Антигени	О- АГ : 20 серогруп Н- АГ : 15 серотипів
Культуральні властивості	МПБ- дифузне помутніння з осадом. МПА- колонії S- форми, плоскі, слизисті. Виділяють при рН< 7червоний пігмент, при рН> 7 – синьо- зелений пігмент. Виділяють специфічний запах.
Методи лабораторної діагностики	Бактеріологічний
Фактори вірулентності	Екзотоксин А Цитотоксин Екоензим S Гемолізин Нейрамінідаза Ентеротоксин Ендотоксин Протеаза || ( еластаза ) Протеаза ||| ( лужна протеаза )

2. Перелік теоретичних питань.

1.Джерела та шляхи розповсюдження госпітальної інфекції.

2. Умови і фактори, що сприяють прояв вірулентності умовно-патогенних бактерій і виникнення госпітальних інфекцій.

3 .Морфологія, культуральні і біохімічні властивості клебсієл.

4. Фактори патогенності клебсієл.

5. Мікробіологічна діагностика склероми.

6. Морфологія, культуральні та біохімічні властивості протеїв та псевдомонад.

7. Методи лабораторної діагностики інфекцій, викликаних протеями та синьогнійною паличкою.

8.Профілактика госпітальних інфекцій.

4.3. Джерела навчальної інформації.

К.Д.Пяткін, Ю.С.Кривошеїн. Мікробіологія, К., 1992. – С. 216 -221, 309-314

К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология, М., 1980. – С. 250-255, 274 -279.

В.Д.Тимаков. Микробиология, М., 1983. – С. 288-291, 303-304.

А.І. Коротяєв, Г. А. Бабічев Медицинская микробиология, иммунология и вирусология, 2002.-348- 354.

Л.Б.Борисов. Руководство к практическим занятиям по микробиологии, М., 1984. Ю.С.Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, М., 1986. – С. 135-138, 142-143.

М.Н.Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, М., 1973. – С. 208-211, 266-267.

Література додаткова.

Мікробіологія, вірусологія, імунологія, інфекційні хвороби. Словник/ За ред Г.К.Палія, В.І.Палія. – Київ: Здоров'я, 2004.

Збірник завдань для підготовки до тестового екзамену з природничо-наукових дисциплін «Крок-1. Загальна лікарська підготовка» /Кол.авторів; За ред. В.Ф.Москаленка та співавт. – К.:Медицина, 2004.

4. Орієнтовна основа дії.

Граф логічної структури лабораторного дослідження клебсієльозів .

Матеріал для дослідження: мокротиння, слиз носової порожнини, гранулематозна тканина, сироватка крові .

Бактеріоскопічне дослідження

• Мазок, забарвлений за Грамом, за Буррі- Гінсом, Романовським- Гімзою. Бактеріологічне дослідження

• – посів на МПА;

• - агар-мікроскопія “юних” колоній;

• - мазок, забарвлений за Буррі- Гінсом, Грамом;

• - пересів на скошений агар;

• - характеристика колоній;

• - посів на вуглеводний ряд Гіса, на жовточний МПА;

• - РА на склі з протикапсульними сироватками;

• - розгорнута РА з прокип’яченою культурою та діагностичними О-сироватками;

Серологічне дослідження

• РЗК зсироватками хворих і капсульним антигеном;

• РА з сироватками хворих і без капсульними клебсієлами;

• РПГА з сироватками хворих та еритроцитарним діагностикумом.

Граф логічної структури лабораторного дослідження протейних та псевдомонадних захворювань .

Матеріал для дослідження: гній, ексудат, кров, блювотні маси,випорожнення, вода, харчові продукти.

Бактеріологічне дослідження

Посів на МПА, МПБ, середовище Плоскірєва, свіжоскошений агар по Шукевичу.

• Характеристика колоній;

• Мазок, забарвлення за Грамом;

• Препарат “роздавлена крапля” ;

• Пересів на скошений агар;

• Посів на вуглеводний ряд Гіса, на желатин, на МПБ з сечовиною ( проби на індол, сірководень, уреазу, каталазу ).

4. Система цільових навчаючих завдань.

Приклади тестів.

Рід Klebsiella належить до родини:

А. Enterobacteriacea

B. Bacillaceae

C. Pasteurellaceae

D. Vibrionaceae

E. Pseudomonadaceae

Правильна відповідь: А- Enterobacteriacea

4. Короткі методичні вказівки для роботи студентів на лабораторному занятті.

   1. Методика проведення заняття.

1. Студенти готують мазки з культур клебсієл, забарвлюють за Бурі- Гінсом і мікроскопують, відмічаючи наявність капсул.

2. Візуально під стереомікроскопом вивчають культуральні властивості клебсієл.

3. Здійснюють агар- мікроскопію юних колоній клебсієл з метою прискореної ідентифікації.

4. Враховують результати реакції аглютинації з парними сироватками хворого на склерому для виявлення наростання титру антитіл.

5. Враховують антибіотикограми клібсієл в демонстраційному досліді.

6. З метою виявлення діагнозу токсикоінфекції протейної етіології студенти враховують результати посіву харчових продуктів на скошений агар за Шукевичем. Звертають увагу на “повзучій” ріст протея. Готують мазки, забарвлюють їх за Грамом для вивчення морфологї, тінкторіальних властивостей протея.

7. Враховують чутливість псевдомонад і протея до антибіотиків в демонстраційному досліді.

Автор: асистент Жорняк О. І.