- •1. Формы взаимодействия микро– и макроорганизма: мутуализм, комменсализм, паразитизм.
- •2. Виды инфекций. Инфекционная болезнь
- •3. Понятие «патогенность» и «вирулентность» микроорганизмов. Факторы патогенности микроорганизмов.
- •4.Экзотоксины. Классификация, свойства, механизмы действия
- •5.Эндотоксины. Состав, свойства, механизм действия.
- •9.Люминисцентная микроскопия
- •10. Иммуноферментный анализ
- •11. Методы генодиагностики ифекционных заболеваний
- •12. Сальмонеллы
- •13. Коринебактерии. Микробиологическая диагностика дифтерии.
- •14. Шигеллы. Микробиологическая диагностика шигеллёзов.
- •15. Кампилобактер. Микробиологическая диагностика кампилобактериозов.
- •16. Эшерихии. Микробиологическая диагностика эшерихиозов.
- •17. Нейссерии. Микробиологическая диагностика менингококковой инфекции.
- •18. Микобактерии. Микробиологическая диагностика туберкулёза.
- •19.Трепонемы. Микробиологическая диагностика сифилиса
- •20. Клостридии. Микробиологическая диагностика клостридиозов.
- •21. Возбудители зооантропонозных инфекций. Микробиологическая диагностика
- •22. Возбудители холеры
- •23.Возбудители респираторных вирусных инфекций.
- •24.Возбудители нейровирусных инфекций
- •25.Возбудители кишечгых инфекций Полиовирусы.
- •26. Вирусы гепатита с энтеральным механизмом заражения.
- •Общая характеристика.
- •Эпидемиология.
- •27. Вирусные гепатыти с парентеральным механизмом заражения.
- •28.Возбудители вич инфекций
- •29.Хламидии.
- •30. Микоплазмы
11. Методы генодиагностики ифекционных заболеваний
ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ. Была предложена в 1983г. Принцип: многократное образование копий (амплификация) определённого участка ДНК с помощью ДНК-полимеразы. ЭТАПЫ:
ТЕРМИЧЕСКОЕ РАЗДЕЛЕНИЕ 2-хнитевой ДНК на отдельные цепочки (93-95°С в течение 30 секунд).
ОХЛАЖДЕНИЕ СРЕДЫ И ВНЕСЕНИЕ ПРАЙМЕРОВ, комплементарных нуклеотидным последовательностям обоих цепочек. Используют синтетические праймеры – олигонуклеиды из 10-20 НКт, взаимодействующих с концами отдельных нитей исходной ДНК. Точнее добавляют 2 праймера (комплиментарны). Взаимодействие праймеров называют ОТЖИГОМ (реакция проходит за 20-60 с при 50-65°С).
Вносят СПЕЦ ТЕРМОСТАБИЛЬНУЮ ПОЛИМЕРАЗУ (оптимум 70°С), к/я синтезирует вторичные копии цепей ДНК (ампликоны).
Полученные 2-хнитчатые ДНК снова подогревают, остужают, вносят праймеры и т.д.
Т.к. полимераза устойчива к воздействию t°С, то нет необходимости постоянно её добавлять. После 30-80 циклов проводят идентификацию ДНК методом электрофореза. Подсчитано, что за 30-40 циклов из 1 матрицы образуется 100.000.000 (100 млн) ампликонов. Для подтверждения принадлежности ДНК возбудителю молекулы можно подвергнуть рестрикции специфическими эндонуклеазами или провести ДНК-гибридизацию. ПЦР – оч чувствительный метод, теоретически достаточно иметь в среде лишь 1 молекулу ДНК.
Для ДИАГНОСТИКИ ИНФ ЗАБ-Й маркёром возбудителя явл его геном. Для амплификации отбирают какой-нибудь УНИКАЛЬНЫЙ ген, наиболее отличающий его от других патогенов.
12. Сальмонеллы
Род Salmonellaвключает возбудителей брюшного тифа и паратифов, сальмонеллеза (S.typhimurium,S.infantis,S.anatum,S.enteritidis).
Морфология. Мелкие палочки, большинство подвижны (перитрихи). Ни спор, ни капсул сальмонеллы не образуют. Большинство сальмонелл хорошо растут на простых пит средах. На поверхности плот сред образуют небольшие (2–4 мм), прозрачные колонии. Вокруг колоний S.schottmulleriобразуется слизистый вал. Это – Д-Д признак данного мк.
Антигены. Обладают О-, Н-, обнаруживаются К-Аг (Vi-Аг у тифозной палочки = 52, 6, 75), локализованные в микрокапсуле.
О-АГ (ЛПС) термостабилен, выдерживает кипячение в течение 2,5 ч, инактивируется формалином. В соответствии с содержанием О-АГ все сальмонеллы разделены на 65 серогрупп, обозначенных буквами лат алфавита (А, В, С3– С14, Dи т.д.). В каждуюСЕРОГРУППУ включены сальмонеллы с идентичным одним или несколькими О-АГ (серогруппа В содержит сальмонеллы с О-АГ 1,4,12; из них специфичным для серогруппы является 4). Дифференциация сальмонеллВНУТРИ серогрупп проводится по АГ специфичности Н-АГ, которые могут существовать в двух ФАЗАХ, 1 обозначают строчными буквами лат алфавита (а, b, с, d и т. д.), 2 – обычно арабскими цифрами, редко латинскими буквами. Фазовые вариации Н-АГ сальмонелл происходят с высокой частотой. Каждый серовар сальмонелл имеет наименование – часто по названию места открытия (S.dublin,S.moscow) или по автору (S.schottmulleri), основному симптому вызываемой болезни (S.typhy). Наименованию соответствует АГ формула (S.paratyphiА – 1,2,12,а).
Патогенность связана со способностью проникать и размножаться в МКфагах. После гибели МКфагов мкпопадают в лимфу, кровь – патологический процесс генерализуется. Но серовары обладают неодинаковыми факторами патогенностиклиническая картина сальмонеллёзов разная.
Сальмонеллы – возбудители БРЮШНОГО ТИФА и ПАРАТИФОВ.
Тифозная палочка не ферментирует лактозу(–), сахарозу(–), рамнозу(–), но расщепляет глюкозу(+), мальтозу(+), маннит(+), с образованием кислоты, паратифозные Б!! ферментируют те же углеводы, но с образованием кислоты и газов. На среде РЕССЕЛЯ S.paratyphiА –/КГ,S.typhi–/К,E.coliК/КГ.
Возбудители тифа и паратифа различаются по АГ структуре. S.paratyphiА составляет серогруппуA,S.paratyphiВ (schottmulleri) включена в группу В, а S.typhi – в группу D. Тифозная палочка обладает Vi-АГ, который содержится в вирулентных штаммах и является специфическим рецептором для Vi-фагов. Их исп для ФАГОТИПИРОВАНИЯв эпидемиологических целях.
Экология и распространение. Возбудители широко распространены. Обитают в организме чка, их можно обнаруживать в местах, куда попадают выделения больных и бактерионосителей. Обладают относительно высокой устойчивостью к действию физических и химических факторов окружающей среды. В сточных водах, в почве, куда они попадают с испражнениями людей, могут длительно сохраняться. Чувствительны к нагреванию и дезинфектантам.
S.typhiиS.paratyphiА вызывают заболевания только у человека,S.paratyphiВ (schottmulleri) – преимущественно у человека, но может вызывать заболевания КРС. ИСТОЧНИКОМ являются больные и бактерионосители. ПЕРЕДАЧА происходитконтактным и алиментарным путями.
Патогенез брюшного тифа. Сальмонеллы тифа и паратифов попадают в организм через рот, многие погибают в желудке, а оставшиеся переходят в тонкую кишку. АДГЕЗИНЫ обеспечивают прикрепление к микроворсинам кишечного эпителия, ИНВАЗИВНЫЕ свойства – проникновение в лимфатические фолликулы. Затем по лимфатическим сосудам возбудители проникают в брыжеечные лимфоузлы, где размножаются. В конце инкубационного периода (в среднем 2 НЕД) сальмонеллы из лимфоузлов попадают в грудной проток, затем в кровеносную систему – наступаетбактериемия,появляются клинические симптомы болезни. Бактериемия сохраняется на протяжении всего лихорадочного периода, но количественно она наиболее выражена в течение 1-й недели болезни.
Гематогенным путем возбудители попадают в различные органы (печень, селезенку, костный мозг и др.), где возникают брюшнотифозные гранулемы. Из органов мкповторно поступают в ток крови, поддерживая бактериемию. Наиболее благоприятные условия для существования и размножения – в желчных протоках печени, в желчном пузыре. С желчью они выделяютсяв просвет 12п кишки, попадают в тонкую кишку, гдеповторно внедряются в уже сенсибилизированные лимфатические фолликулы. Развивается воспалительная аллергическая реакция, в стенке кишки образуются язвы. НА 3-Й НЕДЕЛЕ болезни возбудители в большом кол-ве выделяются с испражнениями. Элиминация возбудителей осуществляется и с мочой. В этот период болезни фекалии и мочу исследуют в диагностических целях.
В патогенезе брюшного тифа большую роль играет ИНТОКСИКАЦИЯ. Эндотоксин д-ет на сердечно-сосудистую и нервную системы.
Иммунитет. В сыворотке больных появляются Ig, к/е активируют фагоцитоз, способствуют лизису бактерий. Титр антител нарастает от второй к последующим неделям. Определение их используют в серодиагностике.
У переболевших формируется пожизненный иммунитет. Но у части больных возникают рецидивы и бактерионосительство (связано с недостаточным гуморальным иммунитетом). Если иммунная система несовершенна, то постинфекционное бактерионосительство может продолжаться в течение многих лет (причины ещё не изучены).
Лабораторная диагностика – выделение ВОЗБУДИТЕЛЕЙ из организма больного и обнаружение специфических Ат. Возбудитель выделяют на 1-Й НЕДЕЛЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ ИЗ КРОВИ, В ПОСЛЕДУЮЩИЕ ПЕРИОДЫ – ИЗИСПРАЖНЕНИЙ, МОЧИ, ЖЕЛЧИ. Выделенные культуры идентифицируют по биохимическим и АГ свойствам. Тифозную палочку фаготипируют Vi-фагами с целью установления источника и путей передачи возбудителя при массовых заболеваниях брюшным тифом.
В сыворотке крови определяют АНТИТЕЛА (СО 2-Й НЕДЕЛИ), в последующие недели титр увеличивается. Применяют реакции агглютинации по Видалю, РНГА с эритроцитарными О- и Vi-диагностикумами, ИФА, РИА, коагглютинации.
Профилактика и лечение. Специфическая профилактика состоит в вакцинации, но не проводится, т.к. вакцины малоэффективны. Контактным лицам назначают внутрь брюшнотифозный бактериофаг. Для лечения больных из этиотропных препаратов чаще всего применяют левомицетин.
Возбудители ГАСТРОЭНТЕРОКОЛИТОВ (САЛЬМОНЕЛЛЕЗОВ)
Сальмонеллезы клинически проявляются как гастроэнтероколиты, вызывают их многие сальмонеллы различных серогрупп. Они различаются по некоторым БХ признакам, но дифференцируют их в осн по АГ структуре. Наиболее часто вызывают – S.typhimurium,S.infantis,S.enteritidis.
ИСТОЧНИК – различные животные (КРС, свиньи, лошади, собаки, кошки, грызуны, домашние птицы), чк заболевает при употреблении мяса, яиц, молочные, кондитерские продукты, изготовленные с использованием яиц, не подвергнутых термической обработке.
Экология и распространение. Устойчивы к воздействию факторов окружающей среды, погибают при кипячение. Но при низких температурах (холодильник) длительно остаются жизнеспособными.
Патогенез. Возбудители сальмонеллеза попадают с пищей. Из просвета кишечника они внедряются в энтероциты, в составе фагосомоподобных вакуолей достигают собственной пластинки слизистой, где фагоцитируются МКфагами и лейкоцитами. Стенка кишки при этом не повреждается. В энтероцитах происходит всасывание продуктов жизнедеятельности, эндотоксина и воздействие микробных ферментов (протеаз, муциназ, декарбоксилаз и др.). В МКфагах сальмонеллы размножаются, а при гибели фагоцитов освобождаются медиаторы воспаления (гистамин, серотонин и др.). По лимфатическим путям бактерии проходят в лимфоузлы, в некоторых случаях – генерализация попадание и размножение во внутренних органах.
ТОКСИНЫ (эндотоксин, энтеротоксин, цитотоксин) оказывают прямое повреждающее действие на слизистойнарушают проницаемостьмембран, развивается интоксикация, диарея, наступает обезвоживание. В патогенезе возбудитель и токсины играют роль пускового механизма, а уже нарушения функции ЖКТ, ССС, НС обуславливают клинику. Ч/з 3-5 дней – выздоровление, иногда при генерализации – болезнь затягивается.
Иммунитет ненапряженный, т.е. возможно носительство и повторные заболевания. В сыв крови – агглютинины, преципитины, бактериолизины, опсонины. МЕСТНЫЙ им-т: ↑ SIgA. Заб-я, вызванные одним сероваром, не создают иммунитета к другимвозможны ВТОРИЧНЫЕ инфекции.
Лабораторная диагностика. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ метод. Выделенные из испражнений, рвотных масс, промывных вод желудка культуры идентифицируют, определяют серовар, одновременно исследуют пищ прод.
Профилактика и лечение. Специф проф не разработана. Антибиотики (левомицетин, ампициллин и др.) - для лечения только генерализованных форм.