29. Методы культивирования вирусов. Типирование вирусов

Для культивирования вирусов используют следующие методы:

1. Заражение лабораторных животных

2. Заражение куринных эмбрионов

3. Заражение культур тканей

(Не забудьте вспомнить тут про цитопатический эффект, гемадсорбцию, цветные реакции, метод бляшек, метод флюоресцирующих антител, реакцию гемагглютинации и РТГА)

Определения типа вирусов в материале основано на нейтрализации вируса типоспецифическими сыворотками. Конечный результат реакции может быть установлен на основании следующих признаков:

1. Нейтрализация ЦПД

2. Нейтрализация реакции гемадсорбции

3. Цветная проба

4. РТГА

5. Свечение клеток, содержащих вирусы, под влиянием типоспецифических флюоресцирующих сывороток

6. Нейтрализация в опыте на животных.

30. Как устроен вирус иммунодефицита?

Вирус имеет шаровидную форму, его диаметр 100 нм. Оболочка имеет форму многогранника, составленного из 12 пятиугольников и 20 шестиугольников. В центре и углах каждого шестиугольника расположены молекулы gp120 (всего 80 молекул на вирион), оболочка содержит двойной слой липидов, над которыми выступает молекула gp120, а через мембрану проходит трансмембранный белок gp41.

Сердцевина вириона имеет форму снаряда, составляющие его молекулы из 3-4 белков образуют поверхность в виде дельта-икосаэдра.

Белок gp120 является рецептором вируса, взаимодействующим с рецептором CD4 чувствительных к нему клеток (Т-лимфоциты, макрофаги, моноциты).

В сердцевине вириона содержится его геном. Он представлен двумя идентичными молекулами РНК, двумя молекулами затравочной РНК, двумя молекулам полимеразы, обладающей пятью активностями. РНК связана с нуклеокапсидным белком.

31. Что такое иммуноблотинг и для чего используется

Метод представляет собой тестирование твердофазным иммунологическим анализом электрофорез чести разделенных белков. Может использоваться в случае сомнения достоверности иммуноферментного метода (диагностика ВИЧ).

P.s. Подробности можно найти в занятии 5

32. Сатанское взаимодействие вируса с клеткой

Схема взаимодействия: адсорбция вируса -- окаймленная ямка -- окаймленный пузырек-лизосома -- слияние мембран -- выход нуклеокапсида в цитоплазму -- синтез обратной транскриптазой минус-цепи ДНК -- разрушение РНК-азой Н вирионной РНК -- синтез ДНК-провируса в ядро -- активация вируса -- синтез полноразмерных и субгеномных РНК клеточной РНК-полимеразой -- протеолиз и процессинг env-белков -- синтез других белков -- ассоциация двух молекул геномный РНК с капсидными белками -- включение двух молекул РНК в капсид -- мембрана клетки -- липид нас оболочка -- белки gp41 и gp120 -- отпочкование вирионов -- образование симпластов из Т-лимфоцитов -- их гибель -- иммунодефицит -- нарушение других систем -- присоединение оппортунистических инфекций.

Заражение вирусом - начало вирусоносительства. Активация Т-лимфоцита (и, соответственно, вируса) - начало болезни.

33) Какие вирусы являются возбудителями острых респираторных заболеваний

РНК-содержащие: 1 Ортомиксовирусы ( вирусы гриппа А, В, С) 2 Парамиксовирусы( парагриппозные вирусы, вирус эпидемического паротита,вирус ньюкаслской болезни, вирус кори) 3 пикорнавирусы ( более 110 серотипов риновирусов, а также некоторые серотипы вирусов Коксаки ( А и В) и ECHO) 4. Реовирусы (3-й серотип) 5. Коронавирусы ДНК- содержащие:  6. Аденовирусы ( 41 серотип, из них 8 возбудители ОРЗ)

34) Почему лица , пораженные вирусом иммунодефицита, становятся легко восприимчивыми к различным , даже слабо патогенным , микроорганизмам, иначе говоря, почему у них часто развиваются оппортунистические инфекции 

Причины иммунодефицита: основная причина массовая гибель Т- хелперов. Наступает вследствие: 1) зараженные вирусом Т- хелперы гибнут вследствие апоптоза. 2) Т- киллеры распознаёт и разрушают Т - клетки, инфицированные вирусом или несущие на себе адсорбированные молекулы gp120, а также вирусинфицированные и не зараженные вирусом Т - хелперы, которые обр симласты. Вследствие нарушения большого кол- ва Т- хелперов происходит снижение экспрессии мембранных рецепторову В- лимфоцитов к интерлейкину-2 , нарушается синтез различных интерлейкинов, в результате чего нарушается функция системы Т- киллеров. Происходит подавление активности систем комплимента и макрофагов. Инфицированные макрофагов и моноциты долго не гибнут, но они не способны удалять вирус из организма. Наконец, из- за структурного и антигенного сходства gp120 с рецепторами некоторых эпителиальных клеток организма происходит синтез антирецепторных антител с широким спектром действия. Такие антитела способны блокировать различные клеточные рецепторы и осложняют течение болезни аутоиммунными расстройствами. Следствием ВИЧ- инфекции явл поражение всех основных звеньев системы иммунитета. Такие больные беззащитны против самых различных микроорганизмов. Это приводит к развитию оппортунистических и опухолевых заболеваний.

35)Какие типы антигенной изменчивости вируса гриппа вы знаете и каково их значение в эпидемиологии этой болезни (из интернета)

Антигенный дрейф - происходит в период между пандемиями у всех типов вирусов (А, В и С). Это незначительные изменения в структуре поверхностных антигенов (гемагглютинина и нейраминидазы), вызываемые точечными мутациями в генах, которые их кодируют. Как правило такие изменения происходят каждый год. В результате возникают эпидемии, так как защита от предыдущих контактов с вирусом сохраняется, хоть она и недостаточна.

Антигенный шифт - Через нерегулярные интервалы времени (10-40 лет) появляются вирусы с сильными отличиями от основной популяции. Эти изменения серьезно затрагивают антигенную структуру гемагглютинина, а реже и нейраминидазы. В настоящее время механизм образования новых штаммов вирусов гриппа окончательно не ясен. Одна из существующих теорий основана на рекомбинации генов вируса гриппа животных (птиц, свиней) и человека, не имеющему к нему готовых факторов защиты- клеточного и гуморального иммунитета. Многие типы животных - это птицы, свиньи, лошади, морские млекопитающие и др. (включая человека), могут быть инфицированы вирусом гриппа А. Некоторые типы вирусов типа А могут инфицировать несколько типов животных. Вирус гриппа содержит 8 молекул РНК. В случае, если в одном организме (например, свиньи) встречаются два разных вируса гриппа, то они могут обмениваться фрагментами нуклеиновой кислоты друг с другом. Другая теория стоит на позициях рецикличного появления вируса в человеческой популяции.

З.Ы.(стр 331 в учебнике)