- •«Микроскопический метод исследования. Тинкториальные свойства и структура бактерий. Сложные методы окраски. Структура бактериальной клетки. Функциональные методы определения подвижности»
- •Микроскопия как основной и вспомогательный метод исследования в диагностике.
- •Простые методы окраски, техника, оценка.
- •Сложные дифференциальные методы окраски, их виды, назначение.
- •Метод Грама, как главный метод в дифференциации бактерий, его сущность, техника, оценка. Изучение тинкториальных свойств бактерий по методу грама
- •Оценка результатов. Грамположительные бактерии окрашены в темно-фиолетовый или синий цвет, грамотрицательные – в красный или розовый.
- •Метод Циль - Нильсена — способ окраски кислотоустойчивых бактерий окраска кислотоустойчивых микробов м. Tuberculosis методом циль – нильсена
- •Структура бактериальной клетки:
- •Окрасить мазок из дрожжеи по пешкову (выявление оболочки)
- •А) окраска нуклеоида бактерий ядротропным методом фельгена
- •А) выявление зёрен волютина по нейссеру
- •Б) выявление зёрен волютина простым методом леффлера
- •Временные структурные элементы бактериальной клетки (капсулы, споры):
- •Выявление капсул у бактерий методом бурри – гинса
- •Выявление спор у бактерии методом ожешко
- •Подвижность бактерий, их органы движения, способы выявления разными методами:
- •Выявление жгутиков у культуры подвижных микроорганизмов методом серебрения по морозову:
- •Функциональная оценка подвижности бактерий а) метод «раздавленной капли»
- •Б) метод «висячей капли»
- •1. Метод шукевича:
- •2. Метод посева в столбик полужидкой среды по пешкову:
- •Люминесцентная микроскопия - прямая.
Структура бактериальной клетки:
- назначение оболочки, её строение, выявление по Пешкову;
- назначение нуклеоида и его выявление по Фельгену;
- выявление зёрен волютина методом Нейссера, Леффлера, их назначение.
Окрасить мазок из дрожжеи по пешкову (выявление оболочки)
Техника окраски:
Приготовленный мазок фиксируют над пламенем спиртовки.
На фиксированный мазок наливают метиленовый синий Леффлера и кипятят над пламенем спиртовой горелки 20 - 30 секунд.
Остывший препарат промывают водой и докрашивают 0,5% раствором нейтрального красного в течение 30 – 60 секунд.
Опять промывают дистиллированной водой и высушивают на воздухе.
Микроскопируют с иммерсией.
Оценка результатов. Споры окрашиваются в голубой, либо в синий цвет. Протоплазма вегетативного тела бактерий — розовая или красная.
А) окраска нуклеоида бактерий ядротропным методом фельгена
Техника окраски:
1) Приготовить препарат из бактериальной культуры или дрожжей.
2) Высушить, зафиксировать в жидкости Карнуа 7 мин.
3) Промыть 80 % этанолом.
4) Обработать 1 N НСl, подогретой до 600 С, в течение 7 мин, затем опустить препарат на 1-2 мин в холодную 1N HCl.
5) Обработать фуксинсернистой кислотой (реактив Шиффа) в течение 3-4 часов.
6) Промыть водой, высушить, микроскопировать с иммерсией.
Оценка результата. Ядерное вещество окрашено в фиолетовый цвет.
А) выявление зёрен волютина по нейссеру
Техника окраски:
1. Готовят мазок, высушивают, фиксируют жаром.
2. Наливают на мазок 1-2 капли уксуснокислого метиленового синего Нейссера, красят 1 - 2 минуты.
3. Краску сливают, наносят раствор Люголя на 1 мин.
4. Промывают водой, подсушивают фильтровальной бумагой.
5. Наносят раствор везувина (хризоидина) для окраски тела бактерии на 1 – 3 мин.
6. Смывают водой, высушивают, микроскопируют.
Оценка результатов. В мазке цитоплазма бактерий окрашивается в жёлто-коричневый цвет, зёрна волютина - от сине-зелёного до сине-чёрного цвета.
Б) выявление зёрен волютина простым методом леффлера
Техника окраски:
1. Исследуемый материал наносят на чистые обезжиренные предметные стекла, растирают его тонким равномерным слоем по поверхности стекла, высушивают на воздухе.
2. Препарат фиксируют 3 мин в 96% этиловом спирте и высушивают.
3. На высушенный препарат наносят каплю 1% щелочного раствора метиленового синего по Леффлеру и окрашивают в течение 3 - 10 минут.
3. Промывают погружением в стакан с водопроводной водой.
4. Высушивают на воздухе и микроскопируют с иммерсионной системой.
Оценка результата. При правильном окрашивании в микроскопируемом препарате видны голубые бактерии на бесцветном или слабо голубом фоне.
Временные структурные элементы бактериальной клетки (капсулы, споры):
- метод Ожешко,
- метод Бурри – Гинса.
Выявление капсул у бактерий методом бурри – гинса
Техника окраски:
Черную тушь смешивают с культурой, делают мазок препарата, как мазок крови и высушивают препарат.
После этого проводят фиксацию препарата химическим способом: смесью Никифорова или другими смесями.
Промывают водой.
Окрашивают тела микробных клеток карболовым фуксином Циля, разведенным 1:3, в течение 3-5 минут.
Препарат промывают водой, высушивают и микроскопируют с иммерсионной системой.
Оценка результата. На темном фоне препарата хорошо видны бесцветные капсулы, внутри которых находятся тела бактерий красного/ярко-малинового цвета.