Добавил:
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Микроскопический метод исследования.docx
Скачиваний:
6
Добавлен:
09.05.2023
Размер:
28.79 Кб
Скачать

Функциональная оценка подвижности бактерий а) метод «раздавленной капли»

Техника приготовления:

1. На середину предметного стекла наносят 1 каплю бульонной культуры бактериологической петлей или стерильной пастеровской пипеткой. При её наличии на МПА вначале наносят каплю физиологического раствора и эмульгируют в ней 1 петлю микробов, взятых со среды.

2. Накрывают покровным стеклом, края которого смазаны вазелиновым маслом и, прижимают его к предметному так, чтобы не образовались пузырьки воздуха, и жидкость не вышла за края стекла. Капля «раздавливается» между ними. Стеклянной палочкой прижимают покровное стекло к предметному.

З. На покровное стекло наносят каплю иммерсионного масла и микроскопируют с объективом х90, окуляром х7 при слегка опущенном конденсоре.

В случаях работы с относительно крупными бактериями можно пользоваться сухими объективами х40 и даже х8 и обойтись без иммерсионного масла.

Б) метод «висячей капли»

При определении подвижности бактерий выполняется по тому же принципу, но с различием в монтаже камеры.

Техника приготовления:

1. Берут покровное (не предметное), стекло, наносят на него 1 каплю исследуемой микробной взвеси.

2. Накрывают перевёрнутым предметным стеклом с луночкой, но с таким расчётом, чтобы капля оказалась в её центре. Для сцепления стёкол края лунки смазывают вазелиновым маслом. Предметное стекло слегка прижимают к покровному, в результате чего оба стекла склеиваются. После этого препарат переворачивают покровным стеклом кверху. Капля оказывается висячей над лункой. Получается герметически закрытая камера, в которой капля долго не высыхает.

З. Микроскопию проводят так же, как в предыдущем методе.

Оценка результата: неподвижные микробы в препаратах «раздавленной» и «висячей» капли создают картину броуновского движения, подвижные – проходят с одинаковой скоростью большие пространства, иногда через все поле зрения «вращаясь» вокруг своей оси.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОДВИЖНОСТИ БАКТЕРИЙ МЕТОДОМ ПОСЕВА:

1. Метод шукевича:

Испытуемую культуру бактерий засевают в конденсационную воду косого МПА, не прикасаясь к его поверхности.

Ставят в термостат при +37С° на 18-24 часа.

Учёт результатов ведут по феномену роения, в процессе которого растущая культура ползёт по «косячку» вверх. Неподвижная культура развивается только в конденсате, а «косячок» МПА остаётся стерильным.

2. Метод посева в столбик полужидкой среды по пешкову:

Испытуемую культуру осторожно бактериальной петлёй засевают в столбик 1-1,5 % МПА.

Ставят в термостат при +37С° на 18-24 часа.

Учёт результатов производят по характеру роста: а) неподвижные бактерии растут строго по ходу укола; б) подвижные бактерии дают рост, напоминающий ёршик с расходящимися в стороны шипами. Оценка роста проводится визуально.

  1. Люминесцентная микроскопия - прямая.

ЛЮМИНЕСЦЕНТНАЯ ПРЯМАЯ МИКРОСКОПИЯ

Особенности:

При приготовлении препарата к биоматериалу для прижизненной окраски добавляют флюорохром акридин оранжевый в рабочем разведении 1:1000 и только после этого накрывают покровным стеклом. Микроскопируют в люминесцентном микроскопе МЛ-1 или МЛ-2 с набором пропускающих и запирающих фильтров для УФ-лучей.

Вместо обычного иммерсионного масла используют нелюминисцирующее иммерсионное или его заменители (репелленты - дибутилфталат, диметилфталат). Микроскопируют в затемнённом помещении.

Учёт результатов. При микроскопии жизнеспособные клетки двигаются, имеют чаще зелёное свечение, нежизнеспособные и умирающие - оранжевые и обездвижены. Оба метода особенно удобны при обнаружении лептоспир, которые невозможно окрасить.