- •1. Взаимодействие фотонов оптического излучения с молекулами. Квантово-механические основы и последствия.
- •1.1. Основные характеристики оптического излучения
- •1.2. Основные квантово-механические механизмы взаимодействия оптического излучения с атомами и молекулами
- •1.3. Электронные переходы в атомах и молекулах при поглощении квантов оптического излучения.
- •2. Законы поглощения света веществом. Спектрофотометрический анализ. Особенности спектрофотометрии биологических объектов. Некоторые специальные методы спектрофотометрического анализа.
- •2.1. Количественное описание поглощения света растворами. Закон Бугера-Ламберта-Бера.
- •2.2. Условия выполнения закона Бугера-Ламберта-Бера.
- •2.3. Качественный и количественный спектрофотометрический анализ.
- •2.3.1. Качественный спектрофотометрический анализ.
- •2.3.2. Количественный спектрофотометрический анализ.
- •2.4. Некоторые специальные методы спектрофотометрии
- •2.5. Особенности спектрофотометрии биологических объектов
- •Оптические неоднородности
- •3. Вторичное излучение света молекулами объекта. Люминесцентный анализ и особенности его использования для исследования биологических объектов.
- •3.1. Явление фотолюминесценции
- •3.2. Электронные переходы в возбужденной молекуле. Законы люминесценции.
- •3.3. Зависимость интенсивности фотолюминесценции от концентрации люминесцирующих молекул. Люминесцентный анализ.
- •3.4. Методы регистрации фотолюминесценции. Спектрофлуориметры. Особенности флуориметрии биологических объектов.
- •3.5. Время жизни возбужденного состояния молекул. Связь между временем жизни возбужденных состояний и квантовым выходом фотолюминесценции.
- •3.6. Влияние окружения люминесцирующих молекул на параметры фотолюминесценции. Флуоресцентные зонды и метки.
- •3.7. Причины снижения интенсивности фотолюминесценции в биологических объектах. Тушение фотолюминесценции. Миграция энергии электронного возбуждения.
- •3.8. Поляризация фотолюминесценции.
- •3.9. Замедленная флуоресценция и фосфоресценция.
- •3.10. Хемилюминесценция биологических систем. Хемилюминесцентный анализ.
- •3.11. Проточная цитофлуориметрия.
- •3.12. Влияние размера люминесцирующей полупроводниковой частицы на ее свойства как люминофора. Квантовые точки.
- •В обычных полупроводниках радиус экситона Бора (ах) определяет размер областей электронного возбуждения.
- •Применение квантовых точек в качестве флуорофоров в медицине и биологии
- •Молекулярные сенсоры
- •Молекулярная диагностика
- •Гибридные молекулярные устройства
- •4.Биофизические основы некоторых фотобиологических процессов. Применение оптического излучения в медицине.
- •4.1. Общие закономерности фотохимических процессов в биомолекулах.
- •4.1.1. Кинетика однофотонных необратимых фотохимических реакций
- •4.1.2. Кинетика однофотонных обратимых фотохимических реакций
- •4.1.2. Кинетика многофотонных фотохимических реакций
- •4.2. Спектры действия фотопревращений молекул и фотобиологических процессов.
- •4.2.1 Спектры действия фотобиологических эффект при небольшой постоянной дозе облучения
- •4.2.2.Спектры действия при постоянной величине фотобиологического эффекта.
- •4.2.3.Спектры действия биологических ответов, зависящих от скорости фотопревращения активных молекул.
- •4.3. Фотомодификация олигомерных и однокомпонентных белков под действием ультрафиолетового излучения.
- •4.3.1. Естественное (солнечное) ультрафиолетовое излучение.
- •4.3.2. Кинетика фотоинактивации белковых молекул.
- •4.3.3. Природа первичных продуктов фотолиза аминокислот и их остатков в белках.
- •Значения для
- •4.4. Действие ультрафиолетового излучения на биологические мембраны.
- •4.5. Действие ультрафиолетового излучения на нуклеиновые кислоты.
Гибридные молекулярные устройства
Примером применения КТ в биологии может быть разработка устройств на базе бактериородопсина, позволяющих создавать трансмембранные грандиенты концентрации протонов в модельных мембранных системах.
Известно, что бактериородопсин сам по себе способен транспортировать протоны через биологические мембраны при освещении. Получающийся в результате электрохимический трансмембранный градиент используется затем бактериями для синтеза АТФ.
Однако спектр действия этого процесса ограничен спектром поглощения бактериородопсина, из-за чего транспорт протонов не наблюдается при освещении бактерий (или модельных мембранных систем со встроенным в них бактерииородопсином) при освещении синим или УФ излучением. Присоединение же к молекулам бактериородопсина КТ на основе CdTe позволило расширить область спектра, в которой возможна фотогенерация трансмембранных протонных градиентов с помощью этого белка. В подобной гибридной системе (комплексе бактериородопсин-КТ) при поглощении КТ квантов излучения в синей и УФ-областях наблюдается миграция энергии электронного возбуждения от КТ к ретиналю, хромофорному пигменту бактериородопсина. Принцип функционирования протеолипосом, содержащих комплекс бактериородопсин-КТ, представлен на рис. 35. В дальнейшем подобные протеолипосомы могут стать основой для разработки высокочувствительных оптоэлектронных и фоторегистрирующих устройств.
Рисунок 35. Расширение зоны поглощения бактериородопсина с помощью квантовых точек. Слева: протеолипосома, содержащая бактериородопсин (в форме тримеров) с «пришитыми» к нему квантовыми точками на основе CdTe (показаны оранжевыми сферами). Справа: схема расширения спектральной чувствительности бактериородопсина за счет КТ: на спектре область поглощения КТ находится в УФ- и синей частях спектра; спектр испускания можно «настроить», подобрав размер нанокристалла. Однако в этой системе испускания энергии квантовыми точками не происходит: энергия безызлучательно мигрирует на бактериородопсин, который совершает работу (закачивает ионы H+ внутрь липосомы).
Итак, КТ в форме коллоидных нанокристаллов являются перспективнейшими объектами нано-, бионано- и биомеднанотехнологий. Вероятно, со временем квантовые точки могут стать одним из основных инструментов флуоресцентных методов исследования в биологии и медицине.
4.Биофизические основы некоторых фотобиологических процессов. Применение оптического излучения в медицине.
Фотобиологическими процессами принято называть те сдвиги в биологических объектах, которые являются следствием действия на эти объекты оптического излучения. В качестве примеров фотобиологических процессов можно привести следующие явления:
фотосинтез;
фоторецепцию (зрение);
фотобиологические процессы в коже, приводящие к:
фотоиндуцированной эритеме;
синтезу меланина (загару);
синтезу витамина D3;
фотоканцерогенезу
фотопериодизм;
фотоморфогенез;
фототропизм;
фототаксис.
Поскольку оптическое излучение во многих случаях способно вызывать такие сдвиги в организмах пациентов, которые оказывают терапевтическое (лечебное) действие, это излучение очень давно применяется и в медицине. В качестве примеров применения оптического излучения с терапевтическими целями можно привести следующие методики:
фототерапия гипербилирубинемии новорожденных с помощью облучения кожи синим излучением;
фотогемотерапия (реинфузия УФ-облученной собственной крови) – метод терапии целого ряда заболеваний с помощью введения пациентам их собственной крови, облученной вне организма УФ излучением;
фотоферез – метод воздействия на иммунную систему пациента путем введения ему его собственных лейкоцитов, подвергнутых in vitro облучению УФА излучением в присутствии сенсибилизаторов-псораленов;
фототерапия кожных заболеваний (облучение пораженных патологическим процессом кожных участков УФ излучением в присутствии фотосенсибилизаторов или без них);
эритемотерапия (облучение УФ излучением в значительных дозах кожных зон Захарьина-Геда);
фототерапия рахита с помощью облучения кожи УФ излучением;
фототерапия красным светом – облучение пораженных участков тела или рефлексогенных зон красным видимым излучением (чаще всего – излучением лазеров);
фотодинамическая терапия опухолей – облучение опухолей видимым излучением после введения фотосенсибилизаторов (производных гематопорфирина и фталоцианиновых красителей);
фототерапия сезонной аффектной депрессии – длительное освещение больного интенсивным белым светом.
Все фотобиологические процессы развиваются в несколько стадий. Схема последовательности событий, заканчивающейся тем или иным фотобиологическим сдвигом, представлена на рис. 29.
Рисунок 29. Схема стадий развития фотобиологического процесса. Активная молекула М может поглотить квант излучения непосредственно, либо перейти в возбужденное состояние в результате взаимодействия с молекулой-фотосенсибилизатором Z. В любом случае затем формируются продукты фотомодификации активной молекулы М. Эти продукты в ходе темновых процессов запускают биохимические сдвиги, прямо или косвенно приводящие развитию функционального биологического ответа.
Публикуется с модификациями по: Рощупкин Д.И., Артюхов В.Г. Основы фотобиофизики: Учебное пособие. Воронеж: ВГУ, 1997, с. 6.
Фотобиофизика изучает начальные стадии развития фотобиологических процессов, от поглощения квантов излучения молекулами М или Z, и до фотохимических реакций в активных молекулах, приводящих к появлению вызывающих биохимические сдвиги продуктов.
Выше нами уже рассмотрены закономерности поглощения света молекулами и некоторые возможные пути реализации энергии электронного возбуждения. Здесь же мы, прежде всего, остановимся на рассмотрении особенностей и кинетик тех фотохимических реакций, которые могут быть причиной фотобиологических сдвигов в организме.