Оформление работы

1. Записать результаты реакций необратимого осаждения белка при действии неорганических и органических осадителей в виде таблицы:

Название групп осадителей

Употребляемые реактивы

Характер и цвет осадка

Чем обусловлена реакция

2. Результаты опытов по осаждению белков при нагревании оформить в виде таблицы:

Номер пробирки	Среда	Наблюдаемые изменения	Выводы
1	Нейтральная
2	Слабокислая (1% СН3СООН)
3	Кислая (10% СН3СООН)
4	Кислая (10% СН3СООН + электролит NaCl)
5	Щелочная (10% NaOH)

3. Выписать результаты фракционного разделения белков плазмы в таблицу:

Название белка	Степень насыщения (NH4)2SO4	Характер осадка	Результаты биуретовой реакции

Техника безопасности

1. Соблюдайте особую осторожность при работе с концентрированными серной, соляной и азотной кислотами, с растворами трихлоруксусной и сульфосалициловой кислот, с 10% раствором щелочи.

2. Будьте внимательны при нагревании растворов.

РАБОТА 8. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИЗОЭЛЕКТРИЧЕСКОЙ

ТОЧКИ БЕЛКА

Изоэлектрической точкой белка называется величина pH среды, при которой суммарный электрический заряд белка равен нулю. Растворы белков в изоэлектрической точке наименее устойчивы, нейтральные молекулы белка легко выпадают в осадок. Вследствие этого определение изоэлектрической точки может быть сведено к определению pH раствора, при котором наблюдается наиболее полное и быстрое выпадение белка в осадок. Для получения растворов с различной величиной водородного показателя пользуются буферными растворами.

Ход работы.

1. Для определения изоэлектрической точки казеина в 7 сухих пробирок наливают последовательно реактивы в количествах

(в мл), указанных в таблице:

№ пробирки	СН3СООН 0,2 М	Н2О	0,4% р-р казеина в в 0,2 М р-ре СН3СООNa	рН смеси
1	1,6	0,4	0,2	3,8
2	0,8	1,2	0,2	4,1
3	0,4	1,6	0,2	4,4
4	0,2	1,8	0,2	4,7
5	0,1	1,9	0,2	5,0
6	0,06	1,94	0,2	5,3
7	0,03	1,97	0,2	5,6

Растворы тщательно перемешивают. Через 5-10 минут наблюдается помутнение растворов. Наибольшее количество осадка наблюдается в той пробирке, где рН соответствует изоэлектрической точке казеина.

Для определения изоэлектрической точки желатина в 6 сухих пробирок последовательно наливают реактивы в количествах

(в мл), указанных в таблице:

№ про-бир-ки	Н2О	0,1 М раствор СН3СООН	1М раствор СН3СООН	0,1М раствор СН3СООNa	1% раствор желати-на	рН среды
1	3,8	0,8	-	2,0	2,0	5,6
2	3,5	0,5	-	2,0	2,0	5,3
3	3,0	1,0	-	2,0	2,0	5,0
4	2,0	2,0	-	2,0	2,0	4,7
5	-	4,0	-	2,0	2,0	4,4
6	3,2	-	0,8	2,0	2,0	4,1

Содержимое каждой пробирки перемешивают и затем во все пробирки медленно по стенке добавляют по 2 мл 96% этанола (или ацетона). Через 30 минут определяют изоэлектрическую точку желатина. Она будет соответствовать рН пробирки с максимальной степенью помутнения.