1. Просые методы окраски позволяют определить наличие бактерий в рпепарате, их форму, размеры и взаиморасположение клеток. Для окраски используют один краситель, позволяющий отличить частицы от неокрашенного фона. Фиксированный препарат мазком вверх на подставку. Нанести раствор красителя. Фуксин Пфейфера 1-2минуты. метиленовый синий3-5минут. После окраски краситель слить, промыть водой, высушить фильтровальной бумагой. (Описание свойств бактерий написаны в 6 : вопросе)

2.Окраска по Граму. 1) Фиксированный препарат мазком вверх. На мазок накладывают фильтровальную бумагу пропитанную генцианвиолетом. Налить воды на фильтр.бумагу. выдержать 1-2 минуты. Слить.

2)На мазокраствор Люголя 1мин. Слить, не промывая водой.

3)Обесцветить спиртом, покачивая стекло до исчезновения струек красителя.(30-50сек) быстро промыть водой.

4) Налить фуксин Пфейфера(1-2минуты) слить, промыть водой, высушить, микроскопировать.

(Описание свойств бактерий написаны в 6 : вопросе)

3.Окраска по Цилю-Нильсену.

1)Фиксированный мазок накрыть фильтровальной бумагой налить на нее феноловый фуксин Циля. Мазок нагреть над горелкой до появления паров.(повторить 2-3 раза). Охладить!!!, промыть водой.

2)Препарат обесцветить 5% серной кислотой. Промыть водой несколько раз.

3)Окрасить метиленовым синим 3-5минут. Промыть высушить микроскопировать.

При этой окраске кислотоустойчивые бактерии окрашиваются в интенсивно красный цвет, а остальные в светло-синий.

(Описание свойств бактерий написаны в 6 : вопросе)

4. Окраска по Граму. В вопросе 2.

5.Окраска по Нейсерру.(окраска гранул волютина)

1)Фиксированный мазок окрашивают уксусно-кислым метиленовым синим 1 мин. Слить, промыть водой.

2)Налить р-р Люголя на 20-30сек, слить.

3)окрасит Везувином 1-3 мин. Промыть водой высушить.

Цитоплазма становится желтой, зерна волютина – темно-синими. (Описание свойств бактерий написаны в 6 : вопросе)

6.Микроскопировать готовые микроперпараты. Морфологические и свойства бакте­рий. Бактерии имеют разнообразную форму и довольно сложную структуру, определяющую многообразие их функциональной дея­тельности. Для бактерий характерны четыре основные формы: сферическая (шаровидная), цилиндрическая (палочковидная), извитая и нитевидная.Бактерии шаровидной формы — кокки — в зависимости от плоскости деления и расположения относительно друг друга от­дельных особей подразделяются на микрококки (отдельно лежащие кокки), диплококки (парные кокки), стрептококки (цепочки кокков), стафилококки (имеющие вид виноградных гроздьев), тетракокки (образования из четырех кокков) и сарцины (паке­ты из 8 или 16 кокков).Палочковидные бактерии располагаются в виде оди­ночных клеток, дипло- или стрептобактерий.Извитые формы бактерий — вибрионы и спириллы, а так­же спирохеты. Вибрионы имеют вид слегка изогнутых палочек, спириллы — извитую форму с несколькими спиральными завит­ками. тинкториальные свойства .Грамположительные бактерии имеют толстую (многослойную) клеточную стенку.Окрашиваются по Граму в фиолетовый цвет .Грамотрицательные бактерии имеют тонкую клеточную стенку, прикрытую снаружи тройным липидсодержащим слоем (внешняя мембрана).Окрашиваются по Граму в красный цвет.. Микроорганизмы измеряются в микрометрах и нанометрах. Средние размеры бактерий – 2 – 3 х 0,3 – 0,8 мкм.

7.Мазок из отделяемого твердого шанкра полости рта.

Каплю жидкости из язвы или пунктата наносят на тонкое предметное стекло (1,1-1,2 мм), накрывают покровным стеклом и исследуют в темном поле зрения или с помощью фазово-контрастного или аноптрального микроскопа. Бледная трепонема в темном поле зрения имеет вид слегка блестящей тонкой нежной спирали с крутыми равномерными округлыми первичными завитками. Движения плавные, тем она изгибается под углом. В случае невозможности провести исследование в темном поле зрения можно использовать различные методы окрашивания. Бледная трепонема плохо воспринимает анилиновые красители. Из многих предложенных способов окраски лучшие результаты получают при использовании окраски по Романовеьким-Гимзе. При микроскопии бледные трепонемы имеют нежно-розовый цвет.

8. Микроскопировать мазок из осадка ликвора при эпидемическом менингите и описать

свойства бактерий. Микроскопическое исследование спинномозгой жидкоти и крови дает возможность определить наличие вс жителя. Если спинномозговая жидкость имеет вид гноя, то мазок готовят без ее предварительной обработки; при незначительной мутности спинномозговую жидкость центрифугируют и делают мазки. Окрашивают их по Граму. водным раств м основного фуксина и/или метиленовым синим. При окрас Граму форменные элементы спинномозговой жидкости не меняться, что осложняет обнаружение возбудителя. Менингококки имеют вид диплококков бобовидной формы, соприкасающихся вогнутыми краями и расположенных внутри цитоплази клеток.Часто обнаруживается нежная капсула. При мениш кцемии менингококки иногда можно обнаружить в мазках крови . Для этого готовят препарат толстой капли и без фиксашпд-окг ■тают его 2 — 3 мин водн. растворомвором метиленовой сини. окраску смывают водопроводной водой и высушивают пр рат на воздухе. На голубом фоне препарата видны окрашенн: гемно-синий цвет лейкоциты, а между ними множество ме х, темно-синих кокков, расположенных в виде кучек, пар и по одному.

Экспресс-диагностика основана на обнаружении в спинномс вой жидкости или крови больного специфического антиге! уществляется с помощью латекс-агглютинации, ИФА, ветре ■го иммуноэлекгрофореза с групповыми преципитирующими а сыворотками. Эти методы приобретают особое значение при i )фективности микроскопической диагностики и посевов.

9. Произвести посев исследуемого материала из гнойного очага на мпа в чашке Петри.

Материал, взятый петлей,наносят на пов-ть агара параллельными штрихами, чем достигается последовательное уменьшение концентрации бактерий вплоть до единичных клеток.

Другой способ состоит в приготовлении суспензии с малой концентрацией бактерий. Одну каплю суспензии наносят петлей на поверхность питательного агара в чашку Петри и тщательно втирают стерильным шпателем в среду, равномерно распределяя материал по всей ее пов-ти.

Посевы газоном производят шпателем на питательный агар в чашке Петри. Для этого, приоткрыв левой рукой крышку, петлей или пипеткой наносят посевной материал на поверхность питательного агара. Затем проводят шпатель через пламя горелки, остужают его о внутреннюю сторону крышки и растирают материал по всей пов-ти среды.

10 .Произвести пересев однородной изолированной колонии с мпа в чашке Петри на скошенный агар и среду Ресселя. Объяснить цель посева.

Среда Ресселя применяется при изучении б/х свойств энтеробактерий. Содержит питательный агар, лактозу, глюкозу и индикатор бромтимоловый синий. Приготавливают в пробирках по 6-8 мл в виде столбика со скошенной пов-ю. Цвет незасеянной среды травянисто-зеленый. Посев делают штрихом по скошенной пов-ти и уколом в глубину столбика. Микроорганизмы, ферментирующие глюкозу до кислоты, вызывают изменение окраски столбика среды из первоначальной в желтую; скошенная поверхность при этом преобретает синий цвет. Лактозоположительные м/о (E/ coli) изменяют цвет скошенной части среды и столбика в желтый. М/о, образующие щелечь, изменяют цвет среды в синий. Газообразование отмечается в толще столбика среды.

11.Посев на среду Китт-Тароцци. Используется для накопления анаэробов. Среду перед посевом прогреть в кипящей водяной бане в10-20 минут, охладить. Сделать посев микробиологической петлей. Посевы заливают вазелиновым мслом и помещают в термостат. Посев в чашку Петри шпателем Левой рукой приоткрывают крышку. Материал набирают, петлей или ув пипетку, наносят на поверхность МПА и втирают шпателем' по всей поверхности агара. При посеве материала, обильно обсемененного микрофлорой, используют 2-3 чашки для последовательного посева. Посев в пробирку петлей Полученные изолированные колонии служат для выделения чистой культуры микроба. Осторожно приподняв крышку чашки, захватывают прокаленной и остуженной петлей одну отдельно расположенную колнию и вносят в пробирку с плотной питательной средой. Пробирку держат в наклонном положении в левой руке между большим и указательным пальцами. Правой рукой держат петлю с посевным материалом. Мизинцем, мякотью ладони правой руки вынимают пробку из пробирки, обжигают в пламени горелки ее край и вносят в нее петлю, посев производят: а) штрихами на поверхности агара;б) уколом в столбик агара.

12. Произвести учет результатов роста бактерий на средах Плоскирева и Эндо при

подозрении на дизентирию и колиэнтерит.

При дизентерии: лактозоотрицательные прозрачные бесцветные колонии.

При колиэнтерите: колонии имеют дискообразной форму, слегка выпуклые с ровными краями, малиново-красного цвета.