30. Факторы патогенности стафилококков

1. Выявление плазмокоагулазы: выделенную агаровую культуру в виде густой взвези вносят в пробирку с цитратной плазмой кролика и эмульгируют. Пробирки выдерживают в вертикальном положении при 37 гр. и наблюдают за появлением коагуляции- свертывания крови. (+ результат отмечается через 2-6 ч.)

2. Определение ДНКазной активности: культуры стафилококков засевают бляшками в чашку Петри с ДНК-содержащим агаром. Через сутки в чашку вносят соляную кислоту и через 3-5 мин. Наблюдают появление вокруг бляшек зоны просветления, что свидетельствует о наличии ДНКазы.

3. Лизоцимная активность: при выделении лизоцима вокруг колонии стафилококков образуются зоны лизиса микрококка.

4. Выявление продукции энтеротоксина: культуру стафилококков засевают в специальную питательную среду. Инкубация 37 гр. 3-4 суток. Затем фильтруют через мембранные фильтры. Полученный фильтрат смешивают с молоком скармливают котятам. При наличии энтеротоксина через 1 ч. У котят возникает рвота, а через 2-3 ч. Понос, возможен летальный исход.

31.Цпд в культуре тканей

Исследуемый материал: испражнения, носоглоточный смывы. Заражают культуру клеток почек обезьян. В культуре вирус оказывает ЦПД. Идентифицируют вирус, проводя РН с типоспецифическими сыворотками и ИФА.

РН. Компоненты: вируссодержащий. материал и диагностическая сыворотка. Готовят разведения сывороток, добавляют вирусод. материал, заражают смесью культуру клеток. Пол. результат: отсутствие ЦПД вируса, бляшкообразования и изменения цвета.

ИФА: Компоненты: специфические АТ, вируссод. материал, АТ той же специфичности, конъюгат, хромогенный субстрат. Связывают специфические АТ с пластиком лунки планшета, вносят вируссод. материал, вносят АТ той же специфичности, конъюгат и субстрат. Пол. результат: изменение окраски субстрата.

32.Учут результатов ИФА Используют в качестве метки АТ ферментов, способных разлагать субстрат и приводить к образованию окрашенных продуктов( хромогена). Соединенные с ферментом АТ соединяются с гомологичными АГ. Сначала на твердой фазе адсорбируются АГ или АТ , а потом все компонентты реакции. Интенсивность окраски хромогена соответствует количеству образовавшихся комплексов АГ +АТ + фермент. АГ улавливается АТ, присоединенным к твердой фазе( пластиковые планшеты, пленки) . В результате инкубации исследуемый АГ присоединяется к АТ и твердой фазе. Затем привязанный АГ выявляют с помощью меченых ферментом АТ против этого АГ-прямой вариант.При непрямом методе используются меченые ферментом антивидовые сыворотки. Количество присоединенного к твердой фазе фермента соответствует количеству АГ. Активность фермента оценивают по интенсивности окрашивания хромогена визуально или с помощью фотоэлектроколориметра.

33. Произвести учет РГА с целью определения титра вируса.Для постановки РГА готовят двукратные разведения вакцинного вируса от 1:2 до 1:4096. С этой целью во все лунки одного ряда полистероловой микропанели микротитратором разливают физиологи ческий раствор (0,05 или О,25 см3), в первую вносят в равном объеме вакцинный вирус трехкратно пипетируюти и переносят 0,05 или0,025 см3 во вторую лунку и т.д. Из последней лунки 0,05 или0,025 см3 удаляюти обезвреживают в 2%-ном растворе едкого натрия. После разведения вируса во все лунки вносят 0,7%-ную суспензию эритроцитов петуха в объеме, равном исходному объему физиологического раствора. Микропанели аккуратно встряхивают и оставляют при команатной температуре (18-20*С). Учет реакции проводят после оседания эритроцитов в контроле.

Для контроля эритроцитов на спонтанную гемагглютинацию оп ределения времени учета реакции в две лунки с физиологическим растворам (0,05 или 0,025 см3) добавляют равный объем эритроцитов. РГА оценивают положительно при оcедании эритроцитов в виде хорошо выраженного "зонтика", отрицательно - в виде "пуговки". За титр вируса принимают его наибольшее разведение, дающее четко выраженную агглютинацию в виде "зонтика". Получение нечетких ре зультатов может быть связано с изменившимся рН физиологического раствора.

34.Учет РТГА Берем 6 пробирок. последняя - контрольная ( контроль эритроцитов). В каждую добавляем ИХН. Затем в каждую добавляем АГ. ( диагностикум) ( кроме шестой) . Затем в первую добавляем сыворотку от больного и титруем. Потом на 30 мин. в термостат . Затем добавим во все эритроциты ( одинаковое количество) . Потом - 30 мин. термостат. Положительный результат - пуговка. Отрицательный - зонтик.

35учет ИФА. По ходу, так же , как и 32, но неточно.