17. Учет проводиться с целью определения спектра ферментативной активности.

После посева бактерий, если они ферментируют углеводы, наблюдают появление красной расцветки, которая свидетельствует об изменении рН в кислую сторону (образование кислоты), а порой из поплавка вытесняется жидкость. Тогда делают вывод об образовании газа. Следовательно, возможны три варианта при учете результатов посева на середовише Гисса: микроорганизмы не ферментируют  субстрату (негативный ответ) или бактерии раскладывают углеводы (позитивный ответ) с образованием кислоты без газа или кислоты и газа. На основании изучения морфологических, культуральных, биохимических, антигенных, биологических и других свойств микробов делают окончательный вывод об идентификации.

18.учет результатов роста на стреде Ресселя. Посев делают как на поверхность так и в глубь среды. после инкубации регистрируют реакцию в косяке и столбике, наличие или отсутствие газообразования.

19.Р-я оринтеровочной аглютинации Реакция широко применяется для серологической идентификации выделенных микробов, а также при постановке ускоренных серологических реакций.

Постановка реакции:

Пастеровской пипеткой наносят на предметное стекло каплю сыворотки в нужных разведениях. В каждую каплю сыворотки вносят петлю 24-часовой агаровой живой культуры или каплю диагностикума. Постановка реакции должна сопровождаться контролем антигена и контролем сыворотки. Учет реакции производят через 5-10 минут.

Компоненты:

1. Антигены неизвестного вида;

2. Известная иммунная сыворотка;

3. Физиологический раствор.

Положительный результат – хлопьевидный осадок. Отрицательный – жидкость остается равномерномутной.

20. Основной раствор комплемента( 1:10) разливают в ряд пробирок в количестве от 0,05 до 0,5 мл. и через ихн довести объем жидкости в каждой пробирке до 1,5 мл. 37 градусов, 45 мин. термостат. потом добавляют гемолитическую систему( эритроциты барана и гемолитическая сыворотка) и выдерживают еще 30 мин. определяют титр- наименьшее его количество, вызывающее полный гемолиз. рабочая доза комплемента в рск должна быть выше титра на 20-30%

21ОУХТЕРЛОНИ.определяют –преципитацией в агаре. выделенную культуру в виде « бляшки» или штрихом засеивают на поверхность агаровой среды в чашке Петри, рядом с полоской фильтровальной бумаги, пропитанной антидефтерийной антитоксической сывороткой(расположенной по диаметру чашки) Если культура токсигенна, то через 24-48 часов диффундирующий в пит. Среду токсин в местах, где он встречаеться с сывороткой, также диффундирующий в агар, образут линии преципитпции белого цвета.

22Микобактерии туберкулезаМикроскопия. Метод гемогенизации. Суточное кол-во мокроты выливают во флакон+ равный объем гидроксида натрия,плотно закрываю резиновой пробкой,встряхивают сильно до полной гомогенизации(10-15) мин.Макроту,утратившую вязкость центрифугируют,надосадочную жидкость сливают в дез.р-р,осадок нейтрализ. Добавлением 2-3 кап. 10%-й HCI, 30%-й уксус. к-ты. Из осадка готовят мазки и окрашивают по Цилю-Нильсону.

М. tuberculosis (палочка Коха) — тонкая, прямая или слегка изогнутая палочка, размером 1-10*0,2-0,6 мкм, со слегка закруглёнными концами (рис. 22-1). В молодых культурах палочки более длинные, а в старых склонны к ветвлению. Бактерии туберкулёза способны образовывать L-формы, сохраняющие способность к инфицированию, а также фильтрующиеся формы.Капсул не имеют, но образуют микрокапсулу. Методом Циля-Нильсена окрашиваются в ярко-красный цвет. Содержат кислотонеустойчивые гранулы (зёрна Муха), располагающиеся в цитоплазме.

Культуральные свойства возбудителя туберкулеза Туберкулёзные палочки могут расти как в аэробных, так и факультативно анаэробных условиях. Повышенное содержание СО2 (5-10%) способствует более быстрому росту. Оптимальная температура 37-38 °С; рН 7,0-7,2. Нуждаются в присутствии белков, глицерина, факторов роста (биотин, никотиновая кислота, рибофлавин и др.), ионов (Mg2+ K+, Na+ Fe2+) и др. Для выращивания бактерий туберкулеза наиболее часто применяются глицериновые, картофельные с жёлчью, яичные, полусинтетические и синтетические среды. Наиболее оптимальна среда Лёвенштайна-Йёнсена. На средах туберкулёзные палочки обычно образуют R-колонии; под влиянием антибактериальных препаратов бактерии могут диссоциировать с образованием мягких и влажных S-колоний. В жидких средах палочки туберкулеза образуют сухую морщинистую пленку (на 7-10-е сутки), поднимающуюся на края пробирки; среда остаётся прозрачной. В жидких средах выявляют корд-фактор — важный дифференциальный признак вирулентности. Наличие корд-фактора обусловливает сближение бактериальных клеток в микроколониях и их рост в виде серпантинообразных кос. На плотных средах рост палочек туберкулеза отмечают на 14-40-е сутки в виде сухого морщинистого налёта желто-, вато-кремового цвета. Зрелые колонии напоминают цветную капусту, крошковатые, плохо смачиваются водой и имеют приятный запах. Культуры плохо снимаются со среды, а при прокаливании трещат. Отличительная особенность М. tuberculosis— способность к синтезу значительного количества никотиновой кислоты (ниацина); ниациновый тест — важный метод дифференцировки микобактерий.

.23. Определение токсигенности дифтерийной палочки методом Оухтерлони.

Одна из разновидностей РП в геле (реакция Оухтерлони) позволяет определять токсигенность дифтерийной палочки с помощью антитоксической сыворотки. В чашку Петри с питательной средой помещают полоску фильтровальной бумаги, пропитанной антитоксической противодифтерийной сывороткой и засевают исследуемыми культурами в виде штрихов, перпендикулярных к полоске бумаги. Инкубируют при 37 ПС в течение суток. При наличии токсигенной культуры в месте взаимодействия токсина с антитоксином образуются линии преципитации.

.24. Произвести учет развернутой РА в пробирках с культурой кишечной палочки при

диагностике колиэнтеритов.

Для установления серологической группы выделенных культур: а) ставят реакцию агглютинации на стекле с поливалентными ОК-сыворотками; поливалентной ОК-сывороткой в течение, для постановки реакции на стекле с каждой типовой ОК-сывороткой, входившей в состав поливалентной смеси. Контролем реакции служит взвесь микробов в капле изотонического раствора хлорида натрия. Реакция агглютинации на стекле с живой культурой имеет только ориентировочное значение, указывая на наличие в ней соответствующего К-антигена, и не может служить основанием для отнесения выделенного штамма к той или иной О-группе. 3. Для окончательной идентификации культур по О - и К-антигену ставят развернутую реакцию агглютинации в пробирках с той ОК-сывороткой, которая агглютинировала культуру на предметном стекле. Если положительная агглютинация на стекле имела место с несколькими типовыми сыворотками, развернутую агглютинацию ставят со всеми этими сыворотками. Принадлежность культуры к серологическому типу в таком случае определяют по наивысшему титру с той или иной сывороткой. При постановке развернутой реакции агглютинации готовят два ряда разведений типовой агглютинирующей ОК-сыворотки от 1:50 до титра, указанного на этикетке ампулы. Разведенную сыворотку разливают по 0,5— 1 мл. Для определения К-антигенов в каждую пробирку добавляют трехмиллиардную взвесь живой исследуемой куль- туры кишечной палочки. При определении О-антигена пользуются этой же микробной взвесью, но после предварительного кипячения ее в водяной бане в течение часа для инактивации поверхностнооболочечных антигенов и устранения таким образом феномена О-инагглютинабельности.

Последние две пробирки ряда — контрольные: контроль антигена (КА)—? исследуемая культура в изотоническом растворе хлорида натрия и контроль сыворотки (КС) —сыворотка в разведении 1 :50. Штатив с пробирками встряхивают для лучшего перемешивания сыворотки с антигеном и ставят в термостат на 20 ч. Положительный ответ дают в том случае, если выделенная культура по антигенному строению соответствует той или иной серологической группе энтеропатогенных эшерихий. При этом живая культура образует крупнохлопчатый агглю-тинат с полным просветлением жидкости над осадком не менее чем в 2—3 разведениях сыворотки; прогретая культура выпадает в виде мелкозернистого агглютината до предельного разведения той же сыворотки или до 3Д титра, указанного на этикетке'. Такого рода результат указывает на принадлежность выделенной культуры к соответствующей серологической группе энтеропатогенных кишечных палочек. Образование мелкозернистого агглютината в ряду пробирок с живой и прогретой культурой, в разведениях сыворотки до 3/i ее титра по О-антигену свидетельствует о принадлежности культуры к соответствующей О-группе и отсутствии или низком содержании в ней поверхностных соматических К-антигенов (В или L). Реакция считается положительной. Отсутствие агглютинации в пробирках с гретой культурой указывает на принадлежность выделенной культуры к другой О-группе. Если прогретая культура агглютинируется только в начальных разведениях сыворотки, это свидетельствует о ее принадлежности к другой группе, имеющей антигенное родство с соответствующей О-группой. Реакция считается отрицательной.

25.Реакция Видаля Реакция агглютинации широко применяется в лабораторной практике для серодиагностики. Реакция агглютинации протекает в две фазы:

1 фаза - соединение антигена с антителом;

2 фаза - адсорбция на комплексе антиген+антитело физиологического раствора и выпадение осадка двух видов:

а) крупнохлопчатого - у жгутиковых бактерий (Н-агглютинация);

б) мелкозернистого - агглютинат образуется в виде компактных зерен (О-агглютинация).

Компоненты реакции Видаля:

1) испытуемая сыворотка в разведениях 1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1600;

2) диагностикумы - взвесь убитых сальмонелл трех видов: брюшного тифа, паратифа А и В;

3) физиологический раствор.

Цель реакции: определение титра антител в испытуемой сыворотке.

Реакция агглютинации должна сопровождаться контролем антигена и сыворотки. Реакция ставится в трех рядах. Учет результатов проводят через 18-20 часов.

Степень положительной реакции агглютинации обозначается плюсами: + + + + полная агглютинация + + + неполная агглютинация + + слабая агглютинация - осадка нет (отрицательная реакция) Положительным результатом у людей, не привитых против брюшного тифа, считают агглютинацию в разведении 1:100 при наличии клинической картины и не ниже 1:200 при отсутствии таковой. У привитых больных указанные титры О-антител не являются надежным диагностическим признаком. Диагностический титр Н-антител у ранее привитых больных должен быть не менее 1:400.

26. Реакция Видаля (с культурой дизентерийных палочек) считается доказательной в разведении 1 : 100 для дизентерии типа Зонне и 1 : 200 для остальных типов, наибольшую диагностическую ценность имеет нарастание титра при повторных исследованиях,

При положительной реакции осадок равномерным слоем покрывает дно пробирки. Края его обычно неровные (так называемый зонтик). Надосадочная жидкость просветляется. После легкого встряхивания пробирки в прозрачной надосадочной жидкости всплывают отдельные хлопья агглютината. Последнее разведение сыворотки, в котором наблюдают хорошо выраженную агглютинацию, считают ее титром. При отрицательной реакции взвесь сохраняет исходную мутность, так же как в контроле диагностикума. При избытке антигена он может осесть на дно в виде плотного комка.

27.Учет результатов РПГА при гриппе. резул-ты р-ции учитыв. По наличию геммаглютинации-рыхлого осадка из склеившихся эритроцитов на дне и боковых поверхностях лунок(«зонтик»).в контролях геммаглют. Не должно быть(появление плотного осадка эритр. В виде пуговки или колечка)

В ряде лунок А-Н наход. 2-х кратные разведения (от 1/2 до 1/1024) 8-ми испытуемых сывороток(в предпоследней положит сывор.,в последней – отриц.)в ряде В и F –р-ция отриц.,в ряде А и Н-РНГА положит. в титре 1/32, С и G- 1/16, D- 1/128,некоторые сыворотки (С и G)дают эффект прозоны.

28. Учет результатов РПГА с эритр диагностикумами. С целью диагностики дизентерии сыворотки титруют с эритроцитарными диагностикумами Флекснера (из S. flexneri 1 - 5), Зонне (из S. sonnei), Минимальным условно диагностическим титром к диагностикуму Флекснера для взрослых считают положительный результат реакции в разведении 1:400, для детей до 3 лет - 1:100, старше 3 лет - 1:200; для остальных диагностикумов - 1:200. В связи с большим числом неспецифических положительных результатов этой реакции, в особенности в отношении диагностикумов Флекснера и Зонне, достоверным положительным результатом следует считать не менее чем четырехкратное нарастание титра в динамике заболевания, а также наличие титра цистеинустойчивых антител 1:80 и выше.

29. Реакция Райта: ставят в начале 2-й недели болезни. Реакцию ставят не менее чем в пяти разведениях (1:50, 1:100, 1:200, 1:400 и 1:800) в объеме 1 мл каждое. В качестве антигена применяют единый бруцеллезный дианостикум. Перед употреблением диагностикум разводят в 10 раз карболизированным (0,5%) физиологическим раствором. Учет реакции производят через 24 часа путем сравнения степени просветления в опытных пробирках с соответствующим стандартом мутности, который готовят следующим образом. В 4 пробирки последовательно наливают 1, 2, 3 и 4 мл разведенного диагностикума, затем в том же порядке добавляют 3, 2 и 1 мл карболизированного физиологического раствора, в последнюю пробирку ничего не добавляют. После взбалтывания содержимого берут по 0,5 мл антигена каждой концентрации и 0,5 мл карболизированного физиологического раствора. Таким образом получают 4 пробирки стандарта мутности с различной степенью просветления (75% — 3—, 50% — 2 — и 25% — 1 — и отсутствие просветления), которые вместе с опытными пробирками помещают в термостат при t° 37° на 24 часа, после чего производят учет реакции. Диагностическим титром исследуемой  сыворотки считается 50% агглютинации (2+).