- •Лабораторное занятие № 4 Микробиологическая диагностика кишечных инфекций
- •Теоретическая справка
- •Микробиологическая диагностика эшерихиозов
- •Самостоятельное практическое задание Задание 1
- •Лабораторное занятие №5 Тема:Микробиологическая диагностика дизентерии
- •Теоретическая справка
- •Задание 1
- •Лабораторное занятие №6
- •Лабораторное занятие №6
Лабораторное занятие №6
Тема: Микробиологическая диагностика брюшноготифа и паратифов.
Цель.Изучить этиологию, эпидемиологию и патогенез брюшного тифа, паратифов и ПТИ. Овладеть основными методами лабораторной диагностики брюшного тифа, паратифов, и оценки результатов исследований. Научиться практически решать вопросы по специфической профилактике брюшного тифа.
Теоретическая справка
По последней классификации отмечают два вида сальмонелл: 1)Salmonella bogori содержит 10 очень редких сероваров; 2)Salmonella choleraesuis включает 2500 сероваров. Диагностическим лабораториям рекомендовано внутри рода Salmonella использовать названия сероваров, например: Salmonella typhi или Salmonella typhimurium. Природный резервуар сальмонелл – человек, животные и птицы. Основной путь передачи – водный и пищевой. Сальмонеллы высокоустойчивы в окружающей среде: в питьевой воде – до 120 суток, в комнатной пыли – до 560 суток, в замороженном мясе – до 13 месяцев. Сальмонеллы имеют сложную антигеннюую структуру: в соответствии с содержанием тех или иных О-АГ сальмонеллы разделяют на серологические группы, обозначаемые арабскими цифрами. По Н-АГ микроорганизмы делят на серовары, Vi-АГ – фактор вирулентности. При идентификации сальмонелл принимают во внимание 3 антигена: О, Н и Vi. Этот принцип положен в основу диагностической антигенной схемы Кауфмана-Уайта. Типичную клиническую картину брюшного тифа и характерные патологоанатомические изменения вызывают как брюшнотифозные бактерии, так и бактерии паратифа А и В. Остальные сальмонеллы вызывают заболевания с синдромом гастроэнтероколита.
Для лабораторной диагностики сальмонеллезов используют оба принципа:
обнаружение возбудителя – метод бактериологический;
обнаружение специфических изменений – метод серологический;
Самостоятельная практическая работа
Задание 1
Цель. Провести бактериологический и серологический методы диагностики брюшного тифа, паратифов.
Задача. В инфекционную больницу поступила женщина на 6-й день болезни. для подтверждения диагноза был сделан посев крови, мочи, испражнений больной для выделения чистой культуры. Поставлена серологическая реакция с сывороткой больной. Учтите результаты исследований, оформите протокол.
Методика 1
Бактериологический метод диагностики
Выделение и идентификация чистой культуры.
1-й этап.Посев материала. Материал для исследования в зависимости от условий задачи может быть различным: кровь, испражнения, моча. Кровь больного берется на первой неделе болезни в количестве 5-10 мл стерильно из локтевой вены и засевается у постели больного во флаконы с 50-100 мл 10-20% желчного бульона. Испражнения и мочу засевают на среду Плоскирева, висмут-сульфит агар и залить средами обогащения: магниевую среду и селенитовый бульон.
2-й этап. Выделение чистой культуры. Через сутки делается посев петлей с желчного бульона на среды Плоскирева и висмут-сульфит агар для выделения чистой культуры. Из чашки со средой Плоскирева петлей откалывают типичную для сальмонеллезных палочек бесцветную колонию на трехсахарный (Олькеницкого, Клиглера) агар. Посевы помещают в термостат при температуре 37°С на сутки.
3-й этапидентификация чистой культуры:
а) морфологические свойства;
б) подвижность;
в) биохимические свойства;
г) антигенная структура;
Положительная реакция агглютинации с одной из О-сывороток позволит определить групповую принадлежность выделенной культуры сальмонелл по таблице Кауфмана, после чего с соответствующими данной группе Н-монорецепторными сыворотками определяется серовар культуры.
Исследование выделенной культуры заканчивается определением фаготипа микроорганизмов. С этой целью выделенную культуру сеют на питательную среду и наносят петлей на засеянную поверхность брюшнотифозные фаги различных типов. Лизис культуры вызывается определенным фагом, что соответствует фаготипу культуры.
Методика 2
Серологический метод диагностики брюшного тифа. РНГА.
Ставиться по стандартной схеме в плашках или пробирках.
Протокол исследования
Цель…
Бактериологический метод
Выделение чистой культуры и её идентификация
Исследуемый материал |
Среда для посева |
Характеристика колоний по цвету |
Идентификация чистой культуры | |||||||
Морфология |
Подвижность |
Биохимические свойства |
Антигенные свойства |
Вид культуры и фаготип | ||||||
Лактоза |
Глюкоза |
Сероводород |
О-сыворотки |
Н-сыворотки |
Серологический метод
Диагностикум |
Разведение сыворотки | ||||
1/100 |
1/200 |
1/400 |
1/800 |
К | |
Брюшнотифозный Паратифозный А S.typhimirium |
|
|
|
|
|
Вывод…
Задание 2
Цель. Провести исследования для диагностики брюшнотифозного бактерионосительства.
Задача. Больной перенес брюшной тиф. Перед выпиской из стационара он был обследован для выявления бактерионосительства: возбудитель обнаружен в испражнениях, из мочи и желчи микроорганизмы не выделены. Проведен серологический метод диагностики: поставлена реакция Vi-гемагглютинации. Учтите результат. Оформите протокол.
Методика.
Для серологического метода использованы ингредиенты: сыворотка больного, эритроцитарный Vi-диагностикум, физиологический раствор.
Протокол исследования.
Цель…
Диагностикум |
Разведение сыворотки | |||
1/20 |
1/40 |
1/80 |
К | |
Vi-эритроци тарный |
|
|
|
|
Вывод…
Задание 3
Цель. Изучить специфические препараты для диагностики сальмонеллезных инфекций.
Методика.
Из аннотации по теме «Микробиология брюшного тифа » внести в протокол перечень специфических диагностических препаратов.
Протокол исследования.
Цель…
Название препарата |
Состав |
К какой группе диагностических препаратов относится |
Практическое использование |
Максимальное и минимальное разведение сывороток |
Аннотация К лечебно-профилактическим и диагностическим препаратам по теме «Микробиология брюшного тифа».
Лечебно-профилактические препараты.
Вакцина брюшнотифозная спиртовая, обогащенная Vi-антигеном.
Вакцина брюшнотифозная Vi-полисахаридная.
Бактериофаг сальионеллезный.
Интести бактериофаг жидкий.
Бактериофаг брюшнотифозный.
Диагностические препараты.
Люминисцирующаю брюшнотифозная сыворотка.
Адсорбированные агглютинирующие сыворотки.
Эритроцитарный сальмонеллезный диагностикум