Граф логічної структури теми: Фізіологія мікроорганізмів

Додаток 2.

Зразок протоколу до практичного заняття № 5 ч.1

Фізіологія мікроорганізмів. Виділення чистих культур аеробних

бактерій.

Завдання №1. Поживні середовища та умови культивування мікроорганізмів

.

а) вимоги до поживних середовищ		б) умови культивування
1.		1.
2		2.
3.		3.
4.		4.

в) Облік зростання мікроорганізмів на різних середовищах

Назва середовища	МПА	Ендо	Кров'яний агар	ЖСА
Облік зростання

Завдання № 2. Механічне розсівання патологічного матеріалу (суміш мікробів) на щільне живильне середовище з метою отримання ізольованих колоній.

Розсів петлею, шпателем, тампоном.

Мал. 1 Мал. 2 Мал. 3

Відмітити призначення кожного способу посіву:

а) тампоном – ________________________________________________________

б) шпателем – ________________________________________________________

в) петлею – ___________________________________________________________

Завдання №3. Облік посіву. Виявлені колонії:

Колонії	№ 1	№ 2
форма
розмір (у мм)
кольор
консистенція

Мікроскопія половинок ізольованих колоній різного типу.

Мал. 4.

Мал..5

Завдання №4. Ідентифікація виділеної культури.

Облік біохімічних властивостей. Біохімічна ідентифікація культури.

№	Назва виду м/о	Ферментація вуглеводів				Виділення
		глюкози	лактози	сахарози	манніту	аміаку	індолу	сірководню
1.
2.

Дата _______ Підпис викладача_____________

Практична робота № 5 ч.2

Тема: Фізіологія мікроорганізмів. Виділення та ідентифікація чистих

культур анаеробних бактерій.

Актуальність теми: При розмноженні на щільних живильних середовищах бактерії утворюють на поверхні середовища і усередині неї типові для кожного мікробного виду колонії. Колонії можуть бути опуклими або пласкими, з рів-ними або нерівними краями, з шорсткою або гладкою поверхнею і мати різне забарвлення: від білого до чорного. Всі ці особливості (культуральні властивос-ті) враховують при ідентифікації бактерій, а також при виборі колоній для отримання чистих культур. Щоб знати, як отримати чисту культуру того або іншого мікроорганізму, треба уважно ознайомитися з практичною частиною даного розділу.

Мета(загальна): вивчити методи культивування анаеробів.

Загальна мета – уміти:

а) вибирати придатні середовища для анаеробів;

б) враховувати культуральні та біохімічні ознаки анаеробів.

Конкретні цілі – уміти:

1. Пояснювати види розмноження мікроорганізмів.

2. Трактувати статистичні закономірності зростання бактерійної культури на рідкому живильному середовищі.

3. Використовувати спеціальні методи культивування анаеробних бактерій.

4. Пояснювати особливості культивування рикетсій, хламідій, спірохет у зв'язку з їх біохімічними властивостями.

Вихідний рівень знань – умінь:

1. Характеризувати види розмноження клітин еукаріотів (кафедра біології)

2. Трактувати клітинне дихання як окислювально-відновлювальний процес (кафедра біохімії).

3. Використовувати індикатори рН (кафедра біохімії).

4. Розраховувати відсоткові концентрації розчинів (кафедра біохімії).

Для того, щоб ви могли уяснити, чи відповідає вихідний рівень Ваших знань-умінь необхідному, пропонуємо виконати ряд завдань

Завдання 1. Які існують способи поділу клітин у еукаріотів?

Завдання 2. Анаеробне дихання відбувається без участі кисню. Які інші речовини можуть виступати при цьому кінцевими акцепторами електронів?

Завдання 3. При зануренні у рідину лакмусовий папірець почервонів. Яка реакція середовища?

Завдання 4. Скільки треба взяти речовини та розчинника, щоб отримати 100 г 3% розчину?

Інформацію для поповнення знань-умінь можна знайти у наступних підруч-никах:

1. Березов Т.Т., Коровкін В.Ф. Біологічна хімія.- М.: Медицина.- 1998.

Теоретічні питання, на основі яких можливе виконання цільових видів діяльності:

1. Ріст і розмноження мікроорганізмів. Способи розмноження мікроорганізмів

2. Періодична культура. Фази розвитку мікроорганізмів у рідкому середовищі в періодичній культурі.

3. Безперервне культивування, його значення в біотехнології (одержання фер-ментів, білків, антибіотиків).

4. Асоціації мікроорганізмів та чисті культури. Колонії мікроорганізмів, особ-ливості їх формування, властивості.

5. Пігменти мікроорганізмів.

6. Методи культивування анаеробних бактерій (поживні середовища для облі-гатних анаеробів, анаеробні бокси).

7. Особливості культивування рикетсій, хламідій, спірохет.

8. Значення бактеріологічного (культурального) методу у діагностиці інфек-ційних захворювань.

Література для засвоєння знань-умінь за даною темою:

1. Борисов Л.Б., Смирнова А.М. Микробиология. М.: Медицина, 2005.-С.55-66.

2. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии /Под ред. Л.Б.Борисова. – М .: Медицина, 1984.- С.96-104.

3. Керівництво до практичних зайнятть з мікробіології, вірусології і імунології. Під ред. О.В.Бухаріна-М.Медиціна.-2002.-С.32-40.

4. Скеля Л.З., Нехорошева Н.Г., Лукин И.Н., Груднина С.А. Практичні аспекти сучасної клінічної мікробіології.-М.-2004.-С.9 – 18.

5. Пиріг Т.П. Загальна мікробіологія: Підруч. для студ.вищ.навч.зак..-Л.; НУХТ,2004.-459 с.

6. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология /Под ред. А.А. Воробьёва.- М.: ООО "Медицинское информационное агентство", 2008 -С. 51-52, 62-68.

7. Практикум по микробиологии /Под ред. А.И. Нетрусова. М.: Издательский центр "Академия", 2005 – С.118-124, 128.

Зміст навчання повинен забезпечити досягнення цілей навчання, чому сприяє граф логічної структури теми: „Фізіологія мікрорганизмів ” (додаток 1).

Матеріали та обладнання: поживні середовища (Кита-Тароці, Віліса-Хобса, Вільсон –Блера, середовище для трубок Віньяль-Вейона), демонстрація біоло-гічного методу культивування анаєробів, методу Перетца, високі агарові стовп-чики.

Орієнтовна основа дії при виконанні практичної роботи.

1. За таблицями та демонстраційними зразками вивчити основні типи поживних середовищ. Приклади записати до протоколу, вказати сферу їх застосування. Розглянути зростання різних бактерійних культур на щільних і рідких жи-вильних середовищах.

2. Ознайомитися з технікою приготування живильних середовищ. Визначити рН МПБ. Коротко описати необхідне обладнання та отриманий результат. Розрахувати кількість агар-агару для приготування щільного та напіврідкого середовища.

3.На демонстраційних матеріалах вивчити метод виділення чистої культури анаеробних бактерій, живильні середовища і апаратуру, які використовують для культивування анаеробів. Стислу характеристику середовищ і устатку-вання занести до протоколу.

Розглянути прилад - анаеростат і ознайомитись з принципом його роботи.

Анаеростат — прилад для створення безкисневого середовища — є

товстостінною металевою місткістю для розташування чашок Петрі або пробірок. Система газовід-відних трубок і вакуумметр дозволяють відкачувати з місткості повітряну суміш, одночасно заміщаючи її інертним газом (гелієм) і заміряти тиск (малий. 2.4.).

Ознайомитись з умовами створення анаеробіозу в ексікаторі (свічка, тіогліко-лієва кислота). Ексикатор — товстостінна скляна ємність з притертою кришкою і підставкою для чашок Петрі. На дно ексикатору ставиться свічка, що горить, або наливається кислота (хімічний редуцент кисню), потім кришка притирається . 4.Розглянути чашку з культивуванням аеробів і анаеробів (спосіб Фортнера). У чашку Петрі на поверхню живильного агару, розділеного навпіл посередині чашки, проводять посів: на одній половині — аеробів, на іншій — анаеробів. Чашку герметизують парафіном і поміщають в термостат. При залишковому кисні ростуть аероби, після його утилізації починають рости анаероби.

Розглянути і вивчити склад спеціальних середовищ для культивування анаеробів. Середовище Кіта—Тароці — це живильний бульйон з глюкозою і шматочками свіжих органів тварин. Глюкоза і шматочки органів володіють редукуючою здатністю. Середовище зверху заливають шаром стерильного масла. Середовище контролю стерильності (СКС) — 0,3 %-й агар з додаванням тіогліколієвої кислоти (редуцент О₂), посів уколом. Середовище Вільсона-Блера — це високий стовпчик живильного агару з додаванням солей натрію і заліза, посів уколом. Анаероби утворюють чорні колонії в глибині стовпчика за рахунок хімічної реакції з солями металів.

Після ознайомлення з теоретичними питаннями і перебігом проведення експерименту вам пропонується виконати наступні навчальні завдання:

1. У яку фазу розвитку бактеріальної культури мікроорганізми мають найбільшу біохімічну активність?

2. Чи можна отримати чисту культуру анаеробних бактерій шляхом механічного розсіву петлею на поверхні поживного середовища?

3. Чому поживні середовища, навіть із факторами росту, непридатні для культивування рикетсій?