Литература для усвоения знаний-умений по данной теме:

1. Л.Б. Борисов «Медицинская микробиология, вирусология, иммунология». М.: МИА, 2001.

2. «Медицинская микробиология» под редакцией В.И. Покровского. М.: ГЭОТАР - МЕД, 2002.

3. «Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и

иммунологии» под редакцией академика РАМН О.В. Бухарина. М.: «Медицина», 2002.

4. Лекция по теме «Респираторные вирусные инфекции. Микробиологическая диагностика гриппа и герпеса».

Для достижения целей обучения большое значение имеет граф логической структуры темы: «Респираторные вирусные инфекции ( ортомиксовирусы, аденовирусы, парамиксовирусы, герпесвирусы). Микробиологическая диагностика гриппа и герпеса.

(приложение 1).

Материалы и оборудование:зараженные вирусом гриппа куриные эмбрионы, планшеты, пипетки, парные сыворотки больных корью, эритроцитарные диагностикумы гриппа и кори, микропрепарат с патологическим материалом, содержащий вирус герпеса, иммунобиологические препараты и таблицы по теме.

Ориентировочная основа действий при выполнении практической работы.

1. Провести вирусологическую диагностику гриппа:

а) Вскрыть куриный эмбрион, который был предварительно заражен патологическим

материалом, взятым от больного с подозрением на грипп. Специальной пипеткой или

шприцем отобрать хорионаллантоисную жидкость (ХАЖ). Приготовить десятикратное разведение ХАЖ, смешав 0,1 мл отобранной жидкости с 0,9 мл раствора антибиотика. Затем в лунках планшета приготовить ряд двукратных разведений от 1: 20 до 1: 640. В каждую лунку внести по 0,2 мл взвеси эритроцитов. Учет реакции провести через 60 мин, результат отметить в протоколе.Сделать вывод о наличии гемагглютинирующего вируса в ХАЖ и титре вируса (АЕ).

б) Поставить реакцию торможения гемагглютинации с диагностическими гриппознымисыворотками, взятыми в разведениях от 1: 10 до 1: 160. В лунки планшета внести по 0,2мл разведенной сыворотки и 0,2 мл ХАЖ, взятой в рабочей дозе (4 АЕ). Через 30 мин.добавить во все лунки по 0,2 мл взвеси эритроцитов. Учесть результаты реакции через 0 мин. Определить титр вируса.

в) Пользуясь таблицами кратко охарактеризовать другие методы диагностики гриппа.

2. Провести серологическую диагностику кори. Для этого поставить РПГА с парными сыворотками. Парные сыворотки разводятся нормальной 1% сывороткой кролика в отношении 1: 10, а потом двукратно до 1: 640. В качестве контроля используется нормальный иммуноглобулин человека (НИЧ), который разводится так же, как исследуемая сыворотка. В лунки планшета внести по 0,05 мл исследуемой сыворотки, взятой в начале заболевания (1 ряд), в конце заболевания (2 ряд), НИЧ (3 ряд). В каждую лунку добавить по 0,025 мл эритроцитарного коревого диагностикума. Учесть результаты реакции, отметить их в протоколе.

3. Микроскопический метод диагностики герпеса. Отметить в протоколе какой материал используется для выделения вируса простого герпеса. Микроскопия мазков, окрашенных по Романовскому-Гимзе с целью выявить наличие гигантских много ядерных клеток (проба Цанка). Отметить результат в протоколе.

4. Вирусологическая диагностика простого герпеса. Ознакомиться с принципом вирусологического метода диагностики на примере метода бляшек (негативных колоний). Метод позволяет производить количественное определение вирусов. Монослой клеток заражают вируссодержащим материалом и покрывают слоем агара, содержащего индикатор нейтральный красный. Флаконы инкубируют при t- 37 Через 48-96 часов выявляются пятна-бляшки, они имеют диаметр 1-3 мм и выглядят неокрашенными на розовом фоне. Пятна возникают за счет цитопатического действия. Отметить результаты в протокол.

5. Изучить иммунобиологические препараты по теме, определить среди них лечебные, профилактические и диагностические. Записать в протоколе 2-3 названия препаратов каждой группы.

После ознакомления с теоретическими вопросами и ходом проведения эксперимента вам предлагается решить следующие ситуационные задачи:

1. Куриные эмбрионы были заражены вируссодержащим материалом в аллантоисную полость. После 72 ч инкубации в термостате эмбрионы были живы, при вскрытии изменения зародышевых оболочек не наблюдались. Можно ли на основании этих данных сделать вывод об отсутствии вирусов в патологическом материале?

2. Титр антител против вируса кори в сыворотке больного оказался одинаков в начале и в конце заболевания. Подтверждают ли данные серологического исследования клинический диагноз «корь»?

3. В приемное отделение клиники поступил ребенок с тяжелой формой ОРЗ. Какой лабораторный метод диагностики вирусных инфекций может быть использован для быстрого установления этиологии болезни?

4. В области, особенно в осенний период ожидается повышение заболеваемости гриппом.

Какие препараты следует использовать для проведения профилактических мероприятий с целью снижения заболеваемости? Какова тактика врача в отношении детей и групп населения

«повышенного риска»?

5. В диагностическое отделение инфекционной больницы поступили двое больных с предположительным диагнозом: «Грипп». Для подтверждения диагноза врач рекомендовал изучить динамику титра антител к гриппозному диагностикуму. В лаборатории использовали РТГА.Оцените результаты.

6. На прием к врачу пришел мужчина 23 г. с жалобами на пузырьковые болезненные высы пания в ротовой полости . Какое заболевание предположил врач стрматолог и какие методы лабораторной диагностики он использует для подтверждения диагноза?

7. В женскую консультацию обратилась женщина 24 г. на 10 нед. беременности, жалоб не предъявляет. При обследовании на ЦМВ был получен положительный результат методом ПЦР. Какой метод лабораторной диагностики порекомендует врач для установления «давности» инфицирования?

8.Больной М. 18 лет жалуется на заложенность носа, боль в горле, глазах, слезотечение, слабость, t-38,5 *, увеличение шейных, околоушных, подчелюстных лимфоузлов. Врач предположил аденовирусную инфекцию. С какими заболеваниями врач должен провести дифференциальную диагностику и какие методы исследования будут использованы для подтверждения диагноза?

Приложение 2

Образец протокола к практическому занятию № 2.11.

1. Вирусологическая диагностика гриппа:

патологический материал ___________________________________________________________

используемый биологический объект _________________________________________________

способ заражения __________________________________________________________________

наблюдаемые изменения ____________________________________________________________

Индикация вируса в РГА

Разведения ХАЖ	1: 20	1: 40	1: 80	1: 160	1: 320	1: 640
Учет РГА

«+» – осадок эритроцитов в виде «зонтика», «-« – в виде «пуговки»

Вывод: обнаружен геммагглютинирующий вирус в титре ________________________________

Рабочая доза ______________________________________________________________________

Идентификация вируса гриппа в РТГА

Диагностические сыворотки	Разведения сывороток					Контроль
	1: 10	1: 20	1: 40	1: 80	1: 160	сыворотки	вируса
Н0N1 (A1)
H1N1 (A1)
H2N2 (A2)

Вывод: выделенный вирус является вирусом гриппа типа ________________________________

т.к. РТГА произошла с сывороткой типа ______________________________________________

Другие методы диагностики гриппа:

Экспресс-метод:

сроки использования _______________________________________________________________

патологический материал ___________________________________________________________

необходимые реактивы и оборудование _______________________________________________

Серологическая диагностика гриппа:

сроки использования _______________________________________________________________

патологический материал ___________________________________________________________

используемые реактивы _____________________________________________________________

2. Серологическая диагностика кори в РНГА

Сыворотки	Разведения							Контроль антигена
	1: 10	1: 20	1: 40	1: 80	1: 160	1: 320	1: 640
НИЧ
в начале заболевания
в конце заболевания

«+» – осадок эритроцитов в виде «зонтика», - « – в виде «пуговки»

Вывод: ___________________________________________________________________________

3. Диагностика простого герпеса:

Материал: ______________________________________________________________

а) Мазки по Романовскому-Гимзе (на наличие многоядерных гигантских клеток)

Рис. 1. Вирусоскопическая диагостика простого герпеса

________________________________________________________________

4. Вирусологическая диагностика простого герпеса

исследуемый материал______________________________

ЦПД на культуре __________________________________________

5. Иммунобиологические препараты по теме:

лечебные _________________________________________________________________________

профилактические _________________________________________________________________

диагностические ___________________________________________________________________

Дата ______________ Подпись преподавателя ______________________

Додаток 1.1

Граф логічної структури теми : „Ортоміксовіруси. Мікробіологічна діагностика грипу”