Gosudarstvennaya_farmakopeya_RB

УСЛОВИЯ ИНКУБАЦИИ

Инокулированную среду делят на две равные части, одну из которых инку- бируют в аэробных условиях, а другую – в микроаэрофильных условиях; в случае

твердых сред поддерживают атмосферную влажность, достаточную для предот- вращения высыхания поверхности. В случае аэробных условий при инкубации

твердых сред в атмосфере должно присутствовать от 5 до 10% диоксида углеро- да. Инкубацию в микроаэрофильных условиях проводят в атмосфере азота, в ко- торой, в случае твердых сред, содержится от 5 до 10% диоксида углерода.

ПИТАТЕЛЬНЫЕ СВОЙСТВА

Питательные свойства испытывают для каждой новой партии среды.

Выбранные среды засевают соответствующими тест-организмами. На чашку диа- метром 60 мм, содержащую 9 мл твердой среды, наносят не менее 100 колоние-

образующих единиц, а в контейнер вместимостью 100 мл, содержащий соответст- вующую жидкую среду, вносят не менее 40 колониеобразующих единиц; для каж-

дого вида организмов используют отдельные чашки и контейнеры. Среды инкуби- руют в условиях, в которых проводится основное испытание (аэробных, микроаэ- рофильных или тех и других, в зависимости от потребностей тест-организма).

Среда выдерживает испытание на питательные свойства, если наблюдается аде-

кватный рост тест-организмов, сопровождаемый соответствующим изменением

окраски жидкой среды.

ИНГИБИРУЮЩИЕ ВЕЩЕСТВА

Проводят испытание на питательные свойства в присутствии испытуемого продукта. Если рост тест-организмов заметно менее выражен, чем в отсутствии испытуемого продукта, то последний содержит ингибирующие вещества, требую- щие нейтрализации (или исключения их влияния другим способом, например, разбавлением) перед проведением испытания на микоплазмы. Эффективность

нейтрализации или иного процесса проверяется путем повторения испытания на

ингибирующие вещества после нейтрализации.

ИСПЫТАНИЕ АНАЛИЗИРУЕМОГО ПРОДУКТА НА МИКОПЛАЗМЫ

В случае твердых сред используют чашки диаметром 60 мм, содержащие 9

мл питательной среды. Каждая из используемых сред должна содержаться не ме- нее, чем в двух чашках. На каждую чашку наносят по 0,2 мл испытуемого продук- та; в каждую жидкую среду вносят испытуемый продукт в соотношении 10 мл на

100 мл среды. Инкубируют при температуре от 35 до 380С в аэробных и микроаэ- рофильных условиях в течение 21 дня. Одновременно инкубируют порции по 100

мл каждой среды без испытуемого продукта для контроля. Если при добавлении испытуемого продукта происходит существенное изменение показателя рН, ис-

ходное значение восстанавливают добавлением раствора хлористоводородной кислоты или гидроксида натрия. В первый, второй и третий дни после инокуляции

выполняют пересев по 0,2 мл каждой из жидких культур на чашки с твердыми сре-

дами (по две чашки для каждой из сред) и инкубируют при температуре от 35 до 380С в аэробных и микроаэрофильных условиях в течение не менее 21 дня. Про- цедуру повторяют на шестой, седьмой и восьмой, а также на тринадцатый и че- тырнадцатый дни испытания. Состояние жидких сред контролируют каждые два

или три дня и, в случае изменения окраски, выполняют пересев немедленно. Со-

стояние твердых сред оценивают один раз в неделю.

Если в жидких средах обнаруживается бактериальное или грибковое за-

грязнение, испытание повторяют. Если не ранее, чем через семь дней после ино- куляции, не более, чем одна чашка с каждой стадии испытания имеет случайные

бактериальные или грибковые примеси или разбита, результаты, связанные с этой чашкой могут не учитываться, если при немедленной проверке на ней не об- наруживается признаков роста микоплазм. Если на любой стадии испытания бо- лее одной чашки подвергаются случайному загрязнению бактериями или грибами,

или разбивается, испытание считают недействительным и повторяют.

Испытание проводят также для положительных контролей, приготовленных

путем инокуляции не более 100 колониеобразующих единиц подходящего штам-

ма, например, M. orale или M. pneumoniae.

В конце периодов инкубации все инокулированные твердые среды изучают под микроскопом для установления наличия микоплазм. Продукт выдерживает

испытание, если ни на одной инокулированной среде не обнаружено роста мико- плазм. При обнаружении роста микоплазм испытание может быть проведено по- вторно с использованием удвоенного количества инокулята, сред и чашек; если

роста микоплазм не обнаруживается, то продукт выдерживает испытание. Резуль-

таты испытания недостоверны, если в положительных контролях не наблюдается

роста соответствующих тест-организмов.

МЕТОД ИНДИКАТОРНОЙ КЛЕТОЧНОЙ КУЛЬТУРЫ

Клеточные культуры окрашиваются флуоресцентным красителем, обла- дающим способностью связываться с ДНК. Микоплазмы детектируются по их ха- рактерной точечной или волокнистой флуоресценции на клеточной поверхности и, при высоком уровне загрязнения, в прилегающем пространстве.

ПРОВЕРКА СУБСТРАТА

Метод подвергают предварительному испытанию с использованием суб- страта клеточной культуры Веро и инокулята, содержащего не более 100 коло-

ниеобразующих единиц хорошо растущего на жидкой или твердой среде штамма,

и показывают возможность определения этим методом потенциальных примесей микоплазм, например, подходящих штаммов Mycoplasma hyorhinis и Mycoplasma orale. Могут использоваться и другие клеточные субстраты, например, производ-

ственная линия клеток, если было показано, что чувствительность определения микоплазм не будет меньшей.

Метод испытания

Отбирают не менее 1 мл испытуемого продукта и используют его для засе- ва в двух повторностях индикаторной клеточной культуры, представляющей в со- вокупности не менее 25 см2 площади клеточной культуры. Руководствуются ука- заниями подраздела «Процедура».

В испытание включают отрицательный (неинфицированный) контроль и два положительных контроля, содержащих микоплазмы, например, M. hyorhinis и M.

orale. В положительных контролях используют инокулят, содержащий не более

100 колониеобразующих единиц.

Если для вирусных суспензий на интерпретацию результатов влияют за-

метные цитопатические эффекты, вирус может быть нейтрализован с использо- ванием специфической антисыворотки, не обладающей ингибирующим эффектом

в отношении микоплазм или может использоваться субстрат клеточной культуры, не поддерживающий рост вируса. Для демонстрации отсутствия ингибирующего эффекта сыворотки выполняют положительные контрольные тесты в ее присутст- вии и отсутствии.

Процедура

1.Среду однородно засевают культурой (от 2×104 до 2×105 клеток в милли- литре, от 4×103 до 2,5×104 клеток на см2) и инкубируют при температуре 36±10С не менее 2 дней. Вносят испытуемый продукт и инкубируют не менее 2 дней; выпол-

няют не менее одного пересева. Последнюю субкультуру выращивают на покров- ных стеклах в подходящих контейнерах или на другой подходящей поверхности. Не допускают достижения слияния в последней субкультуре, так как это может привести к ингибированию окрашивания и ухудшить визуализацию микоплазм.

2.Среду извлекают и выбрасывают.

3.Монослой промывают раствором хлорида натрия в фосфатном буфере рН 7,4 R, затем смесью равных объемов этого раствора и подходящего фикси-

рующего раствора и, наконец, чистым фиксирующим раствором; если для окра-

шивания используется бисбензимид R, то подходящим фиксирующим раствором является свежеприготовленная смесь 1 объема ледяной уксусной кислоты R и 3

объемов метанола R.

4.Добавляют фиксирующий раствор и оставляют на 10 минут.

5.Фиксирующий раствор удаляют и выбрасывают.

6.Если монослой будет подвергаться окрашиванию позже, его полностью

высушивают. (Требуется особое внимание при окрашивании высушенных стекол

ввиду возможности возникновения артефактов).

7.Если монослой подлежит окрашиванию немедленно, фиксирующий рас-

твор смывают дважды стерильной водой; промывные воды отбрасывают.

8.Добавляют рабочий раствор бисбензимида R или другой подходящий агент, обладающий способностью вызывать появление окраски при взаимодейст- вии с ДНК, и выдерживают в течение 10 минут.

9.Краситель удаляют и промывают монослой водой.

10.При необходимости каждое покровное стекло готовят к изучению путем

нанесения капли смеси равных объемов глицерина и раствора хлорида натрия в фосфатном буфере рН 7,4 R; удаляют с краев стекла излишки смеси.

11.Стекла изучают методом эпифлуоресценции (фильтр возбуждения 330 нм / 380 нм, барьерный фильтр LP 440 нм) при 100–400-кратном (или большем) увеличении.

12.Изучая внеядерную флуоресценцию, сравнивают микроскопическую картину тест-культур с микроскопическими картинами отрицательного и положи- тельных контролей. Микоплазмы проявляют себя в виде точек или волокон, рас-

положенных над цитоплазмой и иногда в межклеточном пространстве.

Испытуемый продукт выдерживает испытание, если в тест-культурах, на которые

он был нанесен, нет признаков присутствия микоплазм. Результаты испытания недостоверны, если в положительных контролях не обнаруживается присутствия

соответствующих тест-организмов.

Следующий раздел публикуется для информации.

СРЕДЫ, РЕКОМЕНДУЕМЫЕ ДЛЯ МЕТОДА КУЛЬТИВИРОВАНИЯ

Рекомендуются нижеследующие среды. Могут использоваться и другие среды при условии, что на каждой партии в присутствии и отсутствии испытуемого

продукта продемонстрирована способность к поддерживанию роста микоплазм.

СРЕДЫ, РЕКОМЕНДУЕМЫЕ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ MYCOPLASMA GALLISEPTICUM

Жидкая среда
Бульон из экстракта говяжьего сердца (1)	90,0 мл
Лошадиная сыворотка (не подвергнутая нагреву)	20,0 мл
Дрожжевой экстракт (250 г/л)	10,0 мл
Ацетат таллия (раствор концентрацией 10 г/л)	1,0 мл
Феноловый красный (раствор концентрацией 0,6 г/л)	5,0 мл
Пенициллин (20 000 МЕ/мл)	0,25 мл
Дезоксирибонуклеиновая кислота (раствор концентрацией 0,6 г/л)	1,2 мл

Значение рН доводят до 7,8.

Твердая среда

Готовят так же, заменяя бульон из экстракта говяжьего сердца на агар из экстракта говяжьего сердца, содержащий агар в концентрации 15 г/л.

СРЕДЫ, РЕКОМЕНДУЕМЫЕ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ MYCOPLASMA SYNOVIAE

Жидкая среда
Бульон из экстракта говяжьего сердца (1)	90,0 мл
Важнейшие витамины (2)	0,025 мл
Глюкозы моногидрат (раствор концентрацией 500 г/л)	2,0 мл
Поросячья сыворотка (инактивированная при 560С 30 минут)	12,0 мл
β-Никотинамидадениндинуклеотид (раствор концентрацией 10 г/л)	1,0 мл
Цистеина гидрохлорид (раствор концентрацией 10 г/л)	1,0 мл
Феноловый красный (раствор концентрацией 0,6 г/л)	5,0 мл
Пенициллин (20 000 МЕ/мл)	0,25 мл

Смешивают растворы β-никотинамидадениндинуклеотида и цистеина гид-

рохлорида и через 10 минут добавляют к остальным компонентам. Значение рН доводят до 7,8.

Твердая среда
Бульон из экстракта говяжьего сердца (1)	90,0 мл
Ионагар (3)	1,4	г
Значение рН доводят до 7,8, стерилизуют автоклавированием, после чего
добавляют:
Важнейшие витамины (2)	0,025 мл
Глюкозы моногидрат (раствор концентрацией 500 г/л)	2,0	мл
Поросячья сыворотка (не подвергнутая нагреву)	12,0 мл
β-Никотинамидадениндинуклеотид (раствор концентрацией 10 г/л)	1,0	мл
Цистеина гидрохлорид (раствор концентрацией 10 г/л)	1,0	мл
Феноловый красный (раствор концентрацией 0,6 г/л)	5,0	мл
Пенициллин (20 000 МЕ/мл)	0,25 мл

СРЕДЫ, РЕКОМЕНДУЕМЫЕ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКОПЛАЗМ, ИМЕЮЩИХ ОТЛИЧНОЕ ОТ ПТИЧЬЕГО ПРОИСХОЖДЕНИЕ

Жидкая среда

Сбалансированный солевой раствор Хэнкса (модифицированный) (4) 800 мл

Дистиллированная вода	67 мл
Экстракт из сердца и мозгов (5)	135	мл
Бульон PPLO (6)	248	мл
Дрожжевой экстракт (170 г/л)	60 мл
Бацитрацин	250	мг
Метициллин	250	мг
Феноловый красный (5 г/л)	4,5 мл
Ацетат таллия (раствор концентрацией 56 г/л)	3 мл
Лошадиная сыворотка	165	мл
Поросячья сыворотка	165	мл

Значение рН доводят до 7,4 – 7,45.

Твердая среда

Сбалансированный солевой раствор Хэнкса (модифицированный) (4) 200 мл

DEAE-декстран	200 мг
Ионагар (3)	15,65 мг

Хорошо перемешивают и стерилизуют автоклавированием. Охлаждают до

1000С. Добавляют к 1740 мл вышеописанной жидкой среды.

(1) Бульон из настоя говяжьего сердца
Говяжье сердце (для приготовления экстракта)	500 г
Пептон	10 г
Натрия хлорид	5 г
Дистиллированная вода	до 1000 мл

Стерилизуют автоклавированием.

(2) Важнейшие витамины
Биотин	100 мг
Кальция пантотенат	100 мг
Холина хлорид	100 мг
Фолиевая кислота	100 мг
i-Инозит	200 мг
Никотинамид	100 мг
Пиридоксаля гидрохлорид	100 мг
Рибофлавин	10 мг
Тиамина гидрохлорид	100 мг
Дистиллированная вода	до 1000 мл

(3) Ионагар

Высокочистый агар для использования в микробиологии и иммунологии го- товят ионообменным методом с получением продукта исключительной чистоты, прозрачности и прочности образующегося геля. Приблизительное содержание в ионагаре:

Вода	12,2%
Зола	1,5%
Зола, нерастворимая в кислоте	0,2%
Хлор	0
Фосфаты (в пересчете на Р2О5)	0,3%
Общий азот	0,3%
Медь	0,0008%
Железо	0,017%
Кальций	0,28%
Магний	0,32%

(4) Сбалансированный солевой раствор Хэнкса (модифицированный)

Натрия хлорид	6,4 г
Калия хлорид	0,32 г
Магния сульфат гептагидрат	0,08 г
Магния хлорид гексагидрат	0,08 г
Кальция хлорид безводный	0,112 г
Натрия гидрофосфат дигидрат	0,0596 г
Калия дигидрофосфат безводный	0,048 г
Дистиллированная вода	до 1000 мл
(5) Экстракт из сердца и мозгов
Экстракт мозга теленка	200 г
Экстракт говяжьего сердца	250 г
Протеозный пептон	10 г
Глюкозы моногидрат	2 г
Натрия хлорид	5 г
Натрия гидрофосфат безводный	2,5 г
Дистиллированная вода	до 1000 мл

(6) Бульон PPLO
Экстракт говяжьего сердца	50 г
Пептон	10 г
Натрия хлорид	5 г
Дистиллированная вода	до 1000 мл

2.6.8 ПИРОГЕННОСТЬ

Испытание состоит в измерении роста температуры тела вызванного у кро- ликов внутривенным введением стерильного раствора испытуемой субстанции.

Выбор животных. Используют здоровых взрослых кроликов обоего пола мас- сой не менее 1,5 кг, # желательно от 2,0 до 3,5 кг # получавших полноценное сба-

лансированное питание, не включающее антибиотиков, масса тела которых не снижалась в течение недели, предшествующей испытанию. Кролика не следует использовать в испытании на пирогенность, если:

a)он использовался в испытании на пирогенность, давшем отрицательный ре- зультат, в течение предшествующих 3 дней:

б) он использовался в испытании на пирогенность, в котором испытуемая суб- станция была признана не соответствующей требованиям, в течение предшест- вующих 3 недель.

# Кролики, бывшие в опыте, могут быть использованы для определения пи- рогенности повторно, но не ранее чем через 3 суток, если внедренный им до этого раствор лекарственного средства или вода для инъекций были непирогенными.

Если же введенный раствор лекарственного средства или вода для инъекций ока-

зались пирогенными, кролики могут быть использованы для дальнейших опытов через 2 недели. При повышении температуры у кроликов в подобных случаях на 1,2оС и более они используются через 3 недели. Если исследуемые вещества об- ладают антигенными свойствами, то одних и тех же кроликов нельзя использовать для испытания повторно (если нет специальных указаний в частной статье)

Помещение для животных. Кроликов содержат индивидуально в спокойном

помещении при однородной подходящей температуре. Кроликов не кормят в те-

чение ночи и до окончания испытания. В течение испытания кроликам не дают во-

ду. Испытание проводят в тихом помещении, где отсутствует риск возникновения

помех, которые могут возбудить животных, и в котором температура поддержива- ется на уровне, не более, чем на 30С отличающемся от температуры, поддержи-

ваемой в месте постоянного содержания кроликов, или в котором кролики содер- жались в течение не менее 18 часов до начала испытания.

Материалы. Стеклянная посуда, шприцы и иглы. Тщательно моют всю стеклянную посуду, шприцы и иглы водой для инъекций и нагревают в сухожаро- вом шкафу при 2500С в течение 30 минут или при 2000С в течение 1 часа.

Клетки. Клетки для кроликов, температура которых измеряется с помощью электрического прибора, устроены таким образом, чтобы животные фиксирова- лись лишь с помощью свободно закрепленных на шее хомутов; остальная часть тела остается относительно свободной так, чтобы кролики могли сидеть в обыч-

ном положении. Они не удерживаются с помощью ремней или другими подобны-

ми методами, которые могут причинить вред животному. Животные помещаются в

клетки не менее чем за 1 час до первого измерения температуры и остаются там в течение испытания.

Термометры. Используют термометр или электрическое устройство, пока- зывающее температуру с точностью до 0,10С, вводя его в прямую кишку кролика

на глубину около 5-7 см. Глубина введения постоянна для каждого из кроликов в течение каждого из испытаний. При использовании электрического устройства, оно может оставаться на месте в течение всего испытания.

Предварительное испытание. После отбора животных, за 1–3 дня до про-

ведения испытания продукции, тем из них, которые не использовались в течение последних двух недель, вводят внутривенно апирогенный раствор хлорида натрия

концентрацией 9 г/л, нагретый приблизительно до 37,00С в количестве 10 мл на килограмм массы тела. Записывают температуру животных, начиная не менее,

чем за 90 минут до введения и продолжая в течение 3 часов после введения рас- твора. Животные, температура которых колеблется в пределах более 0,60С, не

используются в основном испытании.

Основное испытание. Испытание проводят с использованием группы из трех кроликов.

Подготовка и введение продукта. Испытуемую жидкость перед введением

нагревают до 37,00С. Испытуемый продукт может быть растворен или разведен в

апирогенном растворе, содержащем 9 г/л хлорида натрия, или другой раствори- телем, указанной в частной статье. Раствор медленно вводят в крайнюю вену уха

каждого из кроликов в течение не более 2 минут, если иное не предписано в част-

ной статье. Количество вводимого продукта варьируется в зависимости от испы- туемого препарата и указывается в частной статье. Вводимый объем должен со- ставлять не менее 0,5 мл и не более 10 мл на 1 кг массы тела.

# Объем введенного раствора должен составлять не менее 0,1 мл и не бо- лее 10 мл на 1,0 кг массы тела кролика.

Определение исходной и максимальной температуры. За «исходную тем-

пературу» каждого из кроликов принимают среднее из двух значение температу-

ры, записанных для данного кролика с интервалом 30 минут в течение 40 минут, предшествующих введению испытуемого продукта. «Максимальная температура»

каждого из кроликов – самая высокая температура, записанная для данного кро-

лика в течение 3 часов после введения. Температуру каждого из кроликов запи- сывают с интервалами, не превышающими 30-60 минут, начиная не менее, чем за 90 минут до введения испытуемого продукта и продолжая в течение 3 часов после

введения. За результат испытания принимают разность между максимальной и исходной температурами каждого из кроликов. При отрицательной разности ре-

зультат принимают равным нулю.

При определении исходной температуры кролики, у которых два последо-

вательных значения температура варьируется в пределах, превышающих 0,20С, изымаются из испытания. В каждом из испытаний используют кроликов, исходная

температура которых отличается друг от друга не более, чем на 10С. Кролики, ис- ходная температура которых выше 39,50С или ниже 38,50С, изымаются из испыта-

ния.

Интерпретация результатов. После проведения испытания на группе из трех кроликов, его при необходимости повторяют на других группах из трех кроли-

ков (суммарно до четырех групп), в зависимости от полученных результатов. Если

суммированный результат, полученный в первой группе, не превышает значение,

данное во второй колонке таблицы 2.6.8.-1, считают, что субстанция выдерживает

испытание. Если суммированный результат превышает значение, данное во вто- рой колонке таблицы, но не превышает значение, данное в третьей колонке таб-

лицы, испытание повторяют, как указано выше. Если суммированный результат превышает значение, данное в третьей колонке таблицы, считают, что продукт не

выдерживает испытание.

Таблица 2.6.8.-1.

Количество	Продукт выдерживает испыта-	Продукт не	выдерживает
кроликов	ние при суммированном ре-	испытание	при суммиро-
	зультате, не превышающем:	ванном результате, пре-
		вышающем:
3	1,150С	2,650С
6	2,800С	4,300С
9	4,450С	5,950С
12	6,600С	6,600С

# Интерпретация результатов

Воду для инъекций или раствор лекарственного средства считают непиро- генным, если сумма повышений температуры у 3 кроликов меньше или равна

1,4оС; если эта сумма превышает 2,2оС, то воду для инъекций или раствор лекар-

ственного средства считают пирогенными. В случаях, когда сумма повышений температуры у 3 кроликов находится в пределах от 1,5 до 2,2оС, испытание по-

вторяют дополнительно на 5 кроликах. В этом случае воду и для инъекций или

раствор лекарственного средства считают непирогенным, если сумма повышений температуры у всех 8 кроликов не превышает 3,7оС. Если же эта сумма равна 3,8оС или больше, воду для инъекций или раствор лекарственного средства счи- тают пирогенным.

		# Таблица 2.6.9
Количество	Продукт выдерживает испыта-	Продукт не выдерживает испы-
кроликов	ние при суммированном резуль-	тание при суммированном ре-
	тате, не превышающем:	зультате, превышающем:
3	1,40С	2,20С
5	1,5 до 2,2оС	3,70С

#Примечание: Испытание проводят поэтапно. На I этапе его выполняют на трех кроликах. Если необходим II этап, его выполняют на пяти кроликах.

2.6.9. АНОМАЛЬНАЯ ТОКСИЧНОСТЬ

#ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ

#Испытание проводят на здоровых белых мышах обоего пола массой 19-21

г, на которых ранее не проводили никаких испытаний.

#ПОДГОТОВИТЕЛЬНЫЕ МЕРОПРИЯТИЯ

# За 24 часа до испытания и во время его проведения животные должны

находиться в помещении с постоянной температурой. За 2 часа до взвешивания и отбора животных для проведения испытания у них отбирается корм и вода.

ОБЩЕЕ ИСПЫТАНИЕ

Каждой из пяти здоровых мышей вводят внутривенно предписанное в част-

ной статье количество субстанции, растворенное в 0,5 мл воды для инъекций или стерильного раствора хлорида натрия концентрацией 9 г/л. Если не предписано иное, раствор вводят в течение 15-30 секунд.

#Мышь фиксируется на станке, в котором свободным остается только хво-

стик. Инъекция производится в хвостовую вену мыши.

#Если в частной статье предусмотрен иной путь введения препарата мы-

шам, объем раствора, вводимого в брюшную полость, под кожу или в желудок, может быть увеличен до 1 мл. Введение в желудок производят шприцем посред-

ством инъекционной иглы, на конце которой имеется наплавленная олива, или при помощи другого приспособления, обеспечивающего поступление раствора

или взвеси препарата в желудок.

Считают, что субстанция # и другие препараты # выдерживает испытание, если ни одна из мышей не погибает в течение 24 часов или времени, указанного в частной статье. Если погибает более одного животного, считают, что субстанция

не выдерживает испытание. Если погибает одно животное, испытание повторяют.

Считают, что препарат выдерживает испытание, если ни одна из мышей второй группы не погибает в течение указанного промежутка времени.

#ПОВТОРНЫЕ ИСПЫТАНИЯ

#В случае гибели одной мыши опыт повторяют на 5 мышах; в случае гибе-

ли при первоначальном испытании двух мышей повторное испытание проводят на 15 животных. Если при повторном испытании ни одна мышь не погибнет, т.е. сум- марная гибель животных в двух опытах не превысит 10%, препарат считается вы- державшим испытание. В противном случае препарат бракуют.

ИММУННЫЕ СЫВОРОТКИ И ВАКЦИНЫ ДЛЯ МЕДИЦИНСКОГО ПРИМЕНЕНИЯ

Если не предписано иное, каждой из пяти здоровых мышей массой от 17 до 22 г внутрибрюшинно вводят одну человеческую дозу, но не более 1,0 мл. Чело-

веческая доза указана на этикетке или листке-вкладыше испытуемого препарата.

Животных наблюдают в течение 7 дней. Препарат выдерживает испытание, если ни одно из животных не обнаруживает признаков недомогания. Если погибает бо- лее одного животного, препарат не выдерживает испытание. Если одно из живот-

ных погибает или обнаруживает признаки недомогания, испытание повторяют. Препарат выдерживает испытание, если ни одно из животных второй группы не

погибает и не обнаруживает признаков недомогания в течение указанного проме- жутка времени.

Испытание также должно быть проведено на двух здоровых морских свин- ках массой от 250 до 300 г. Внутрибрюшинно вводят каждому животному одну че- ловеческую дозу, но не более 5,0 мл. Человеческая доза указана на этикетке или листке-вкладыше испытуемого препарата. Животных наблюдают в течение 7 дней. Препарат выдерживает испытание, если ни одно из животных не обнаружи- вает признаков недомогания. Если погибает более одного животного, препарат не выдерживает испытание. Если одно из животных погибает или обнаруживает при- знаки недомогания, испытание повторяют. Препарат выдерживает испытание, ес-