- •Робочий план
- •Самостійна робота студентів:
- •Контрольні запитання:
- •Література:
- •Лабораторна робота 2
- •«Імунограма»
- •Самостійна робота студентів:
- •Контрольні запитання:
- •Завдання на виконання:
- •Лейкоцитарна формула крові щурів
- •Контрольні запитання:
- •Література:
- •Лабораторна робота 4
- •«Кількісне визначення антитіл методом локального гемолізу в гелі»
- •Самостійна робота студентів:
- •Контрольні запитання:
- •Література:
- •Лабораторна робота 5
- •«Дослідження фагоцитарної ланки імунітету (початок). Вивчення кисень залежної бактерицидності фагоцитів в нст-тесті»
- •Самостійна робота студентів:
- •Контрольні запитання:
- •Література:
- •Лабораторна робота 6
- •«Дослідження фагоцитарної ланки імунітету (закінчення). Вивчення поглинальної здатності фагоцитів»
- •Самостійна робота студентів:
- •Контрольні запитання:
- •Література:
- •Лабораторна робота 7
- •«Імунодіагностика. Підбір імунокоригуючих препаратів»
- •Самостійна робота студентів:
- •Контрольні запитання:
- •Література:
- •Лабораторна робота 8
- •«Підсумкове заняття» План:
- •Самостійна робота студентів:
- •Література:
- •Лабораторна робота 9
- •«Захист курсової роботи»
Завдання на виконання:
1. Самостійно виділити лімфоцити з периферійної крові в градієнті густин фікол-верографіну (центрифугування, 1500 об/хв, 15 – 20 хв):
1.1. В чисту пробірку №1 наливають 1 мл гепаринізованої крові і додають 3 мл фізіологічного розчину.
1.2. В пробірку №2 наливають 5 мл розчину фікол-верографіну (ρ = 1,077 г/мл). Обережно, по внутрішній стороні пробірки пастеркою з грушею додають 2,5 – 3 мл розведеної крові з пробірки №1.
1.3. Кров центрифугують упродовж 20 хв за кімнатної температури при 1500 об/хв.
1.4. Після центрифугування в пробірці спостерігають чотири фракції (Рис.3.1): І – уламки клітин і еритроцити; ІІ – градієнт густини фікол-верографіну; ІІІ – лімфоцити; ІV – плазма крові.
2. Обережно підвести кінчик пастерки до шару лімфоїдних клітин і за допомогою гумової груші відібрати ці клітини і перенести їх в стерильну пробірку.
3. Клітини відмити в середовищі 199 за допомогою центрифугування (центрифугування 1500 об/хв, 5 – 7 хв).
4. Після центрифугування надосадову рідину злити, до осаду додати 0,5 – 1 мл середовища 199, осад ресуспендувати.
5. Одержану суміш лімфоцитів розділити на кілька проб у різні пробірки, додати Т-систему (проба №3) та В-систему (проба №4).
6. Проби №3 з Т-лімфоцитами (Т-системою) струшують та ставлять на 30 хв у термостат за 37°С, потім на 1 год у холодильник за температури 6 – 8°С. Виймають з холодильника, легенько струшують і виливають на предметне скло. Мазок підсушують і залишають до наступного заняття.
7. Проби №4 з В-лімфоцитами (В-системою) струшують та ставлять на 15 хв у термостат за 37°С. Виймають з термостата, легенько струшують і виливають на предметне скло. Мазок підсушують і залишають до наступного заняття.
8. Провести фарбування мазків крові (Лаб. роб. №2):
Спосіб №1. На мазок крові наносять фарбу-фіксатор Мая-Грюнвальда на 3 хв; фарбу змивають дистильованою водою; потім на мазок наносять розведену фарбу Романовського-Гімзе (розведення 1:2) на 20 хв; мазок змивають дист. водою до стікання чистої води; підсушують на повітрі.
Спосіб №2. На мазок крові наносять етиловий спирт на 20 – 25 хв до випаровування фіксатора; зафіксовані мазки забарвлюють упродовж 20 хв фарбу Романовського-Гімзе (розведення 1:2); мазок змивають дист. водою до стікання чистої води; підсушують на повітрі.
9. Підрахувати формені елементи крові у мазках за допомогою світлового мікроскопу (90) з імерсією: визначити відсоток лімфоцитів, моноцитів, нейтрофілів, еозинофілів та базофілів (закінчення Лаб. роботи №2).
10. Порівняти одержані значення кількості клітин зі значення нормальних показників крові здорової людини або тварин.
10.1. Показники складу крові щурів:
Таблиця 3.1.
Лейкоцитарна формула крові щурів
еритроцити, кл/л |
лейкоцити, кл/л |
тромбоцити, кл/л |
моноцити, % |
еозинофіли, % |
нейтрофіли | |
паличко-ядерні, % |
сегменто- ядерні, % | |||||
7,94±0,17×1012 |
6,75±0,44×109 |
0,025±0,001×1012 |
1,0±0,18 |
2,0±0,5 |
1,92±0,22 |
26,4±0,24 |
11. Оформити протокол заняття, зробити висновки.