- •Медицинская микробиология, её задачи, связь с другими медицинскими дисциплинами.
- •Вопросы врачебной этики и деонтологии в медицинской микробиологии.
- •Размеры и основные формы бактерий.
- •Окраска по Граму. Механизм окраски. Примеры грамположительных и грамотрицательных бактерий.
- •Окраска по Цилю-Нильсену. Применение, механизм окраски.
- •Строение бактериальной клетки.
- •Спорообразование у бактерий и его значение.
- •Химический состав бактериальной клетки, его особенности.
- •Питание бактерий. Механизмы, типы питания.
- •Классификация питательных сред по назначению.
- •Классификация бактерий по типу дыхания.
- •Способы создания условий для культивирования анаэробных микроорганизмов.
- •Рост и размножение бактерий. Характеристика роста бактериальной популяции на плотных и жидких питательных средах.
- •Влияние физических факторов на микроорганизмы.
- •Влияние химических факюровнамикроорганизмы. Дезинфекция.
- •Методы стерилизации, аппаратура.
- •Методы и критерии оценки чистоты воздуха в медицинских учреждениях.
- •Нормальная микрофлора желудочно-кишечного тракта организма человека.
- •Микрофлора женской половой сферы, ее возрастная динамика, особенности у девочек. Значение микрофлоры женской половой сферы для становления микрофлоры новорожденного.
- •Открытие вирусов. Критерии царства вирусов. Строение и химический состав вирионов.
- •Типы вирусной инфекции на уровне клетки. Фазы взаимодействия вируса с клеткой при продуктивной инфекции.
- •Интегративная вирусная инфекция. Онкогенные вирусы, классификация, вызываемые заболевания. Вирусо-генетическая теория онкогенеза ла.Зильбера.
- •Методы индикации и идентификации вирусов.
- •Вирусы бактерий (бактериофаги). Фазы взаимодействия фага с бактериальной клеткой. Умеренные и вирулентные бактериофаги.
- •Организация генетического материала бактериальной клетки. Факторы вне-хромосомной наследственности (плазмиды, инсерционные элементы, транспо-зоны).
- •Виды генетической изменчивости. Мутации и генетические рекомбинации.
- •Трансформация у бактерий.
- •Трансдукция и фаговая (лизогенная) конверсия.
- •Конъюгация у бактерий.
- •Ненаследственная изменчивость (модификации). Диссоциация бактерий.
- •Практическое значение генетики и изменчивости микроорганизмов. Использование генной инженерии в медицине.
- •Антибиотики. Механизмы антимикробного действия. Методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам.
-
Методы индикации и идентификации вирусов.
Индикация вирусов
Индикацию вирусов, имеющих в суперкапсидной оболочке фермент «гемагг-лютинин», можно проводить с помощью реакции гемагглютинации (РГА). Под действием вирусного гемагглютинина in vitro происходит склеивание эритроцитов. В результате формируется осадок эритроцитов с неровными, фестончатыми краями, в виде «перевернутого зонтика». При отрицательной реакции, в случае отсутствия вируса в исследуемом материале, осадок эритроцитов имеет вид «пуговицы» с ровными краями. РГА - неспецифическая, несерологическая реакция. Несерологическая, т.к. в ней не участвует иммунная диагностическая сыворотка. Неспецифическая, т.к. разные вирусы могут агглютинировать эритроциты животных разных видов. В частности, вирус гриппа хорошо агглютинирует куриные и человеческие эритроциты, вирус клещевого энцефалита - гусиные эритроциты.
Индикацию вирусов можно проводить по их цитопатогеныому действию (ЦПД) на культуру клеток. Это действие выражается в повреждении монослоя зараженной культуры клеток и изменении их морфологии (дегенерация). При этом клетки округляются, темнеют, теряют отростки, в них появляется зернистость. Возможно образование многоядерных клеток (симпласт), в частности, под действием респираторно-синцитиального вируса. В дальнейшем происходит отслойка клеток от стекла - нарушение монослоя.
Методы титрования (количественное определение) вирусов.
Титрование вирусов осуществляют на различных биологических моделях.
Если вирусом заражают лабораторных животных, то единицей измерения силы (дозы) вируса будет LD50.
LD50— то количество вирусов, которое вызывает гибель 50% взятых в опыт животных определенного веса, определенного вида (иногда пола) в определенный
срок.
Если исследуемым вирусом заражают куриные эмбрионы, то титр (доза) вируса определяется в ED50 (эмбриональная доза).
ЕДзо - то количество вирусов, которое вызывает гибель 50% взятых в опыт куриных эмбрионов.
Если исследуемым вирусом заражают культуру клеток, то титр вируса измеряется в ТЦД50 (тканевая цитопатогенная доза) и БОЕ (бляшкообразующая единица).
ТЦДм — то количество вирусов, которое вызывает гибель 50% взятых в опыт культур клеток.
Более точным является второй метод, определяющий абсолютное количество вирусов в исследуемом материале по количеству бляшек (БОЕ), т.е. участков по гибших клеток культуры ткани под действием инфицирующего агента. Сколько образуется бляшек, столько и вирусных частиц в исследуемом материале.
Идентификация вирусов.
Идентификацию вирусов по антигенным свойствам осуществляют постановкой серологических реакций со специфическими диагностическими противовирусными сыворотками. Основными серологическими реакциями, используемыми для идентификации вирусов, являются: реакция торможения гемахтлютинации, реакция нейтрализации в культуре клеток и иммуноферментный метод (ИФА).
Реакция торможения гемагглютинации ГРТГА) — 2-х компонентная, сложная серологическая реакция. Компоненты реакции:
а) исследуемая вируссодержащая жидкость (Аг);
б) типовые противовирусные диагностические сыворотки (Ат);
в) 1% взвесь эритроцитов (как индикатор).
Постановка FIT А состоит из следующих этапов: вначале соединяют вируссо-держашую жидкость с разведениями диагностических сывороток в лунках полистироловой пластины и оставляют для контакта на 30-40 минут при комнатной температуре. Затем во все лунки вносят взвесь эритроцитов. Учет реакции производят через 1 -2 часа.
Если тип вируса соответствует типу сыворотки, то вирусный гемагглютинин будет блокироваться антителами сыворотки, что проявляется отсутствием агглютинации эритроцитов. Такая реакция учитывается как положительная. Визуально в лунках определяется осадок эритроцитов с ровными краями, в виде «пуговицы».
С другими диагностическими противовирусными сыворотками, взятыми для постановки РТГА, реакция будет отрицательной из-за несоответствия типа вируса типу сыворотки. Визуально определяется осадок эритроцитов с неровными фестончатыми краями, в виде «перевернутого зонтика» (гемагглютинация).
РТГА применяется для идентификации вирусов гриппа, клещевого энцефалита.
Реакция нейтрализации (РН) в культуре клеток - 2-х компонентная, сложная серологическая реакция. Компоненты реакции:
а) исследуемая вируссодержащая жидкость (Аг);
б) типовые противовирусные диагностические сыворотки (Ат);
в) культура клеток (в качестве индикатора).
Постановка РН состоит из следующих этапов: вначале выделенный цитопато-генный вирус смешивают в пробирках со специфическими диагностическими сыворотками. Смеси выдерживают 1 час при комнатной температуре. Затем этими смесями заражают флаконы с культурой клеток. Если тип вируса соответствует типу сыворотки, то произойдет нейтрализация вируса антителами сыворотки и культура клеток будет без изменений (положительная реакция).