Методика исследования

 

1. Исследование дистиллированной воды, используемой для изготовления лекарственных форм (кроме лекарств для инъекций и глазных капель), производят в целях определения общего количества микроорганизмов (бактерий, плесневых грибов) в 1 мл и наличия кишечной палочки и бактерий рода Proteus.

а) Определение общего количества микроорганизмов в 1 мл.

Исследуемую воду вносят по 1 мл в две параллельные чашки Петри, которые затем заливают питательным агаром и выдерживают 24 часа при 37 °C и 24 часа при комнатной температуре. После этого подсчитывают число выросших колоний микроорганизмов как на поверхности, так и внутри агара. Подсчет колоний проводится обязательно с помощью лупы, так как колонии бактерий, даже после 48-часового инкубирования, могут быть настолько мелкими, что невооруженным глазом не видны.

При вычислении результатов анализа выводят среднее арифметическое из числа колоний, выросших на обеих чашках.

Кроме того, для выявления плесневых грибов по 0,5 мл исследуемой воды засевают на поверхность двух чашек Петри со средой Сабуро и инкубируют при 20 - 22 °C в течение 3 - 4 суток. Затем подсчитывают число колоний плесневых грибов на обеих чашках. После этого суммируют число бактерий и число грибов, содержащихся в 1 мл воды.

Примечание: При приготовлении питательного агара берут 5 г сухого питательного агара, производства Дагестанского НИИПС, 50 мл бульона и 100 мл воды.

 

Приготовление среды Сабуро: к одному литру дистиллированной воды добавляют 10 г пептона, 40 г глюкозы или мальтозы, 1,5% агар-агара, PH не устанавливают. Стерилизуют при 110 °C в течение 30 мин.

б) Определение титра группы кишечных палочек.

При определении титра бактерий группы кишечных палочек пользуются методикой действующего ГОСТа 2874-74 (Вода хозяйственно-питьевого водоснабжения. Методы санитарно-бактериологического анализа).

2. Исследование дистиллированной воды для приготовления инъекционных растворов и глазных капель, инъекционных растворов (до стерилизации) и глазных капель осуществляют с целью установления содержания микроорганизмов (бактерий, грибов) в 1 мл, выявления бактерий группы кишечных палочек, определения патогенных стафилококков по эпидпоказаниям.

а) Определение общего количества бактерий производят в соответствии с пунктом "1а";

б) Определение наличия бактерий группы кишечных палочек.

Исследуемые лекарственные формы засевают в количестве 1 мл на 8 - 9 мл разведенной среды Эйкмана. Дальнейший ход исследования и идентификацию бактерий группы кишечных палочек проводят по общепринятой методике. При необходимости количественного определения бактерий групп кишечных палочек: 1 мл лекарственных форм засевают на чашку со средой Эндо глубинным методом. После инкубации чашки при 37 °C в течение 24 часов учитывают колонии, типичные для кишечной палочки.

3. Исследование сухих лекарственных веществ, используемых для изготовления инъекционных растворов и глазных капель.

Из доставленных сухих лекарственных веществ в лаборатории на стерильной дистиллированной воде готовят растворы в тех же концентрациях, что и инъекционные растворы и глазные капли, изготовляемые в аптеках. Объем и методика исследования приготовленных растворов в соответствии с пунктом "2".

4. Исследование аптечной посуды, пробок, прокладок и смывной жидкости с фильтровальных воронок, пипеток, мерных колб и цилиндров.

В один из трех доставленных флаконов наливают 10 мл стерильной водопроводной воды. Флакон ополаскивают в воду над пламенем горелки, последовательно переливают во 2-й и 3-й флаконы для тщательного их ополаскивания. В банки или широкогорлые колбы, доставленные с пробками, прокладками и т.д., наливают 10 мл воды и тщательно ополаскивают.

В полученной смывной жидкости определяют микробное число и наличие бактерий группы кишечной палочки.

а) Определение общей микробной обсемененности - определяют в соответствии с пунктом "1а". При вычислении результатов - число колоний, установленное в 1 мл смывной жидкости, умножают на 10, что соответствует содержанию колоний микробов на всей смывной поверхности 3-х одноименных предметов.

б) Определение наличия бактерий группы кишечных палочек. 8 мл оставшейся смывной жидкости засевают в 1 мл концентрированной среды Эйкмана и инкубируют в термостате 24 часа при 43 °C.

Дальнейший ход исследования и идентификацию бактерий группы кишечных палочек проводят по общепринятой методике.

5. Исследование смывов с инвентаря, оборудования, рук персонала.

Ориентировочный перечень объектов, подлежащих контролю методом смывов:

1. Рабочее место дефектара.

2. Стол для приготовления инъекционных растворов.

3. Стол для приготовления глазных капель.

4. Руки персонала во время приготовления лекарственных форм.

5. Весы для взвешивания сухих веществ у дефектара.

6. Тара для хранения прокладок и пробок для инъекционных растворов и глазных капель.

7. Ступки.

8. Пластинки пластмассовые.

9. Бюретки.

10. Штанглазы.

11. Весы роговые.

12. Кран водопроводный в ассистентской.

13. Руки персонала.

14. Полотенце.

15. Халат.

Объем исследования:

а) определение наличия бактерий группы кишечных палочек;

б) определение наличия патогенных стафилококков (по показаниям).

а) Определение наличия бактерий группы кишечных палочек.

Доставленный тампон помещают в среду Кесслера. Дальнейший ход исследования и идентификации бактерий группы кишечных палочек проводят по общепринятой методике исследования смывов.

б) Определение наличия патогенных стафилококков.

Смывную жидкость в количестве 3 - 4 капель засевают в 6% солевой бульон. Дальнейший ход исследования и идентификацию проводят по общепринятой методике.

Примечание:

а) При исследовании дистиллированной воды, инъекционных растворов, глазных капель, смывов с аптечного стекла, инвентаря, оборудования и рук персонала иногда отмечается рост синегнойных палочек, для выделения которых специальные посевы можно не производить, так как рост колоний удается обнаружить на среде Эндо и питательном агаре. На среде Эндо колонии плоские, желто-красные, без металлического блеска, со специфическим запахом. На питательном агаре колонии широкие, расплывчатые, с просвечивающим краем, неправильные, среда приобретает зеленоватый цвет. При окраске мазков по Граму - они грамотрицательны.

Одним из важных диагностических признаков синегнойной палочки является пигментообразование. С целью обнаружения способности продуцировать пигмент культуры нанесением на питательный агар с 2 - 5% глицерина или маннита.

Для выявления гемолитической способности синегнойной палочки высевы на чашки с кровяным агаром. Колонии дают четкую зону гемолиза, что позволяет их дифференцировать от других флуоресцирующих бактерий рода.

б) При исследовании дистиллированной воды и лекарственных форм необходимо обращать внимание на возможность выявления бактерий рода Proteus. Специального посева для этого можно не проводить, т.к. их удается обнаружить на среде Эндо в виде ползучего вуалеобразного роста.