25.Серологические реакции,применяемые в инфекционной иммунологии.(см.20)Иммуноблотинг, радиоиммунологический анализ:спецефичность,чувствительность,механизмы реакции.Практическое использование.

Иммуноблоттинг — высокочувствительный метод выявления белков, основанный на сочетании электрофореза и ИФА или РИА. Иммуноблоттинг используют как диагностический метод при ВИЧ-инфекции и др.

Антигены возбудителя разделяют с помощью электрофореза в полиакриламидном геле, затем переносят их из геля на активированную бумагуили нитроцеллюлозную мембрану и проявляют с помощью ИФА. Фирмы выпускают такие полоски с «блотами» антигенов. На эти полоски наносят сыворотку больного. Затем, после инкубации, отмывают от несвязавшихся антител больного и наносят сыворотку против иммуноглобулинов человека, меченную ферментом. Образовавшийся на полоске комплекс [антиген + антитело больного + антитело против Ig человека] выявляют добавлением хромогенного субстрата, изменяющего окраску под действием фермента.

С помощью РИА в биологических жидкостях определяют концентрации гормонов, факторов роста, ферментов, аутоантител, маркеров злокачественных новообразований и других веществ (например, лекарственных средств и наркотиков).

В основе РИА лежит феномен конкуренции: связывание антител с антигеном, меченным радиоактивным изотопом, подавляется в присутствии немеченого антигена.

Методика РИА проста и включает следующие основные этапы:

1. К антителам добавляют меченый антиген и пробу (содержащую неизвестное количество немеченого антигена). Концентрацию антител в реакционной смеси подбирают так, чтобы число мест связывания было намного меньше общего числа антигенов. Концентрация меченого антигена должна превышать максимально возможную концентрацию антигена в пробе.

2. Реакционную смесь инкубируют при определенной температуре заданное время. Меченный и немеченый антигены конкурентно связываются с антителами, при этом образуются иммунные комплексы, содержащие либо меченный, либо немеченый антиген. Таким образом, к концу инкубации в реакционной смеси присутствуют меченные и немеченые иммунные комплексы, а также свободные меченные и немеченые антигены. Количество меченных иммунных комплексов обратно пропорционально количеству немеченого антигена в пробе.

3. Чтобы оценить количество образовавшихся меченных иммунных комплексов, их отделяют от оставшегося несвязанным свободного меченого антигена.

4. Определяют концентрацию антигена в пробе по калибровочной кривой. Для ее построения используют несколько стандартных калибровочных растворов с известными концентрациями немеченого антигена.

26. Вакцины: их подразделение, основные требования, предъявляемые к вакцинам. Принципы получения инактивированных вакцин. Приведите примеры вакцин, применяемых для плановой вакцинации детей. Охарактеризуйте поствакцинальный иммунитет.

ОТВЕТ: Вакцины - иммунобиологические препараты, изготовляемые из живых аттенуированных или инактивированных микроорганизмов, токсинов, микробных антигенов и используемые для создания специфического активного искусственного иммунитета. В основном вакцины применяют с профилактической целью, значительно реже- с лечебной( при хронических затяжных инфекционных заболеваниях) Подразделение вакцинных препаратов: По составу на корпускулярные ( живые и инактивированные), растворимые ( химические и анатоксины) и генно-инженерные; по назначению на профилактические и лечебные. Различаются несколько поколений вакцин: -вакцины первого поколения - корпускулярные вакцины состоящие из целых микроорганизмов живых или убитых -вакцины второго поколения- препараты состоящие из отдельных фракций возбудителя или продуктов их жизнедеятельности -химические вакцины и анатоксины -вакцины третьего поколения -рекомбинатные вакцины, полученные генно-инженерными методами Основные требования к вакцинных препаратам: -высокая иммуногенность и создание достаточно стойкого иммунитета -остаточная вирулентность для аттенуированных штампов и стабильность их свойств -безвредность -ареактивность (отсутствие выраденных побочных реакций) -гипоаллергенность ( минимальное сенсибилизирующее действие) - отсутствие в препарате контаминирующиз микроорганизмов -доступность стоимости производства Инактивированные (убитые) корпускулярные клетки содержат микробные клетки или вирионы ( корпускулярные бактериальные и цельновирионные вакцины). Для их приготовления используют вирулентные микроорганизмы, содержащие протективные антигены, активность которых должна сохраняться после воздействия инактивирующих факторов физической ( нагревание, ультрафиолетовое излучение) или химической природы (спирт, фенол, ацетон, глутаровый альдегид, формальдегид) или комбинацией обоих факторов. Инактивированные вакцины вызывают иммунный ответ гуморального типа, менее напряженной иммунитет с меньшей длительностью, чем живые вакцины, не индуцируют местный иммунитет, требуется их 2-3х кратное введение, частое проведение повторный курсов иммунизации. Убитые корпускулярные вакцины обладают выраженной токсичностью и аллергенностью. Их важнейшее преимущество по сравнению с живыми -они никогда не вызывают инфекционных заболеваний. Вакцины для плановой вакцинации детей: АКДС, БЦЖ, АКаДС, ИПВ (инактивированная полиомиелитная вакцина). После вакцинации развивается искусственный активный иммунитет. Возникает после контакта с антигеном. Это предусматривает реализацию всех этапов иммунной реакции с формированием антиген-специфических Т-лимфоцитов и антител, а также сохранением иммунной памяти. Преимуществами активного иммунитета является более высокая эффективность, так как наработанные иммунные факторы наиболее соответствуют конкретному антигенному раздражителю, а также длительный, а порой и пожизненный, эффект последействия, связанный с формированием клеток памяти и поддержанием защитного титра специфических антител в сыворотке крови и других биологических жидкостях организма. К недостаткам активного иммунитета следует отнести значительную энергозатратность и сравнительно длительный срок развития. Не передается по наследству.

27. Вакцины. Основные требования, предъявляемые к вакцинам. Живые вакцины: аттенуированные, дивергентные (БЦЖ, вакцина против натуральной оспы), рекомбинантные. Принципы получения, примеры. Характеристика поствакцинального иммунитета. ОТВЕТ: Живые вакцины готовят из вакцинных штаммов бактерий, риккетсий, вирусов, полученных различными методами селекции. Вакцинные штаммы являются аттенуированными, сохранившими незначительную остаточную вирулентность и не способны вызывать клинически выраженную инфекцию. Их получают путем снижения вирулентности при культивировании в неблагоприятных условиях ( при пониженной или повышенной температуре, на питательных средах с определенными добавками) или путем пассажей на маловосприимчивых животных, в куриных эмбрионах и клеточных культурах, выделением аттенуированных мутантов от больных или из внешней среды, воздействием мутагенов. В аттенуированных штаммах инактивированы или репрессированы гены отвечающие за вирулентность. В связи с тем, что живые вакцины способны вызывать вакцинную инфекцию (живые аттенуированные микробы размножаются в организме, вызывая воспалительный процесс проходящий без клинических проявлений), они всегда вызывают перестройку иммунобиологического статуса организма и образование специфических антител. Это так же может являться недостатком, т. к. живые вакцины чаще вызывают аллергические реакции. Вакцины данного типа, как правило, вводятся однократно. Примеры: сибиреязвенная вакцина, чумная вакцина, бруцеллёзная вакцина, БЦЖ вакцина, оспенная дермальная вакцина. - аттенуированные - препараты, действующим началом которых являются ослабленные тем или иным способом, потерявшие вирулентность, но сохра- нившие специфическую антигенность штаммы патогенных микроорганиз- мов (бактерий, вирусов), получившие название аттенуированных штаммов. - дивергентные - получают на основе непатогенных штаммов микроорга- низмов, имеющие общие протективные антигены с патогенными для чело- века возбудителями инфекционных болезней (вакцина против натуральной оспы человека - используется вирус оспы коровы, вакцина БЦЖ - использу- ются микобактерии бычьего типа). - рекомбинантные - на основе получения непатогенных для человека ре- комбинантных штаммов, несущих гены протективных антигенов патоген- ных микробов и способных при введении в организм человека размножать- ся, синтезировать специфический антиген и создавать иммунитет к патоген- ному возбудителю. Поствакционный иммунитет ( искусственный активный) клеточный или гуморальный по своей напряженности приближается к постинфекционному.